胃癌組織中Vav3表達與腫瘤侵襲轉移的關系及臨床意義研究

溫 轉，王 曉，檀碧波，李 勇，劉慶偉，賈 楠

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·論著·

胃癌組織中Vav3表達與腫瘤侵襲轉移的關系及臨床意義研究

溫 轉，王 曉，檀碧波，李 勇，劉慶偉，賈 楠

目的探討胃癌組織中Vav3表達與腫瘤侵襲轉移的關系及其臨床意義。方法選取2014年5月—2015年5月于河北醫科大學第四醫院外三科住院并行腫瘤切除的胃癌患者92例。收集患者胃癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤邊緣>3 cm，鏡檢無癌細胞)的石蠟標本，采用免疫組化法檢測Vav3、RelA、增殖細胞核抗原(PCNA)、基質金屬蛋白酶2(MMP-2)在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達；分析胃癌組織中Vav3表達強度與臨床病理特征的關系；Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表達之間的關系采用Spearman秩相關分析。結果胃癌組織中Vav3的陽性表達率為78.3%(72/92)，高于癌旁正常組織的40.2%(37/92)(χ2=27.572，P<0.001)；胃癌組織中RelA的陽性表達率為88.0%(81/92)，高于癌旁正常組織的52.2%(48/92)(χ2=28.242，P<0.001)；胃癌組織中PCNA的陽性表達率為73.9%(68/92)，高于癌旁正常組織的47.8%(44/92)(χ2=13.143，P<0.001)；胃癌組中MMP-2的陽性表達率為69.6%(64/92)，高于癌旁正常組織的48.9%(45/92)(χ2=8.125，P=0.004)。Vav3強表達患者性別、年齡、浸潤深度、遠處轉移情況與Vav3弱表達比較，差異無統計學意義(P>0.05)；Vav3強表達患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移程度與Vav3弱表達比較，差異有統計學意義(P<0.05)。Vav3表達與RelA、PCNA、MMP-2表達均呈正相關(rs=0.338，P<0.001；rs=0.225，P=0.031；rs=0.267，P=0.010)；RelA表達與PCNA表達呈正相關(rs=0.336，P=0.001)；RelA表達與MMP-2表達無直線相關關系(rs=0.176，P=0.094)；PCNA表達與MMP-2表達無直線相關關系(rs=0.188，P=0.072)。結論胃癌組織中Vav3存在過表達現象，Vav3表達增強與腫瘤轉移及進展有關。Vav3可能通過調節RelA、PCNA、MMP-2表達而參與胃癌侵襲轉移。

胃腫瘤；腫瘤浸潤；腫瘤轉移；Vav3蛋白

溫轉，王曉，檀碧波，等.胃癌組織中Vav3表達與腫瘤侵襲轉移的關系及臨床意義研究[J].中國全科醫學，2016，19(21)：2509-2512，2521.[www.chinagp.net]

WEN Z,WANG X,TAN B B,et al.Relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance[J].Chinese General Practice，2016，19(21)：2509-2512，2521.

胃癌的發病率和病死率一直居我國惡性腫瘤的前列，對人們健康危害極大。胃癌惡性程度較高，且進展迅速，多數患者就診時已處于進展期，存在淋巴結轉移甚至遠處轉移[1]。胃癌患者的治療效果常較差，即使接受手術和放化療等綜合治療，預后亦不理想，進展期胃癌患者5年生存率約30%[2-3]。胃癌侵襲轉移迅速是多種基因共同作用的結果，但該領域研究一直無突破性進展[4-5]。近年來發現Vav3與惡性腫瘤關系密切，在乳腺癌、口腔癌、皮膚癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中異常表達[6-9]。也有研究發現，Vav3在胃癌中存在過表達現象[10]。本課題組前期研究也發現，在胃癌細胞株中Vav3表達增高，抑制Vav3表達后腫瘤細胞的增殖能力和侵襲能力均明顯降低[11-12]。本研究為了解Vav3在胃癌組織中表達情況與腫瘤侵襲轉移的關系，檢測了臨床患者胃癌組織中Vav3、核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)蛋白家族的主要成員RelA、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、基質金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)的表達情況，并分析了Vav3與胃癌侵襲轉移的關系及可能機制，從臨床實驗角度為了解胃癌侵襲轉移機制提供依據。

本研究要點：

Vav3具有原癌基因的特征，在胃癌等惡性腫瘤中表達增高。本課題組前期體外研究也發現，Vav3在胃癌細胞株中表達增高，抑制該基因后腫瘤細胞的增殖、凋亡等過程均出現改變。但這些體外研究的證據與臨床組織結果有較大差距，故本研究以臨床組織為樣本，分析了Vav3與患者臨床病理特征的關系，并探討了Vav3與胃癌侵襲轉移相關基因之間可能存在的調控關系。本研究從臨床角度證實了Vav3參與胃癌的侵襲轉移，也為今后的體外實驗及體內試驗的開展提供了方向。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2014年5月—2015年5月于河北醫科大學第四醫院外三科住院并行腫瘤切除的胃癌患者92例。其中男68例，女24例；年齡21～86歲，平均年齡(59.7±10.5)歲；中高分化腺癌63例，低分化腺癌29例；術后分期：I～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期64例。納入標準：有完整的臨床病理資料，術前未接受過放化療、生物治療等與腫瘤相關的治療；有明確的病理學診斷；通過手術切除了原發病灶，有完整的臨床病理資料。排除標準：未行手術或手術未能切除原發病灶；合并其他惡性腫瘤；術前接受過放化療等治療；腫瘤復發再次手術的胃癌患者。本研究取得所有患者的知情同意，并經河北醫科大學第四醫院醫學倫理委員會批準。

1.2免疫組化法檢測Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達收集患者胃癌組織及癌旁正常組織(距腫瘤邊緣>3 cm，鏡檢無癌細胞)的石蠟標本，采用免疫組化法檢測Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達，操作嚴格按免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司)說明書進行。結果均由兩位病理專業醫師進行評分。判斷標準：Vav3、MMP-2以細胞質及細胞膜出現黃色或棕色顆粒為陽性表達；RelA、PCNA以細胞核出現黃色或棕色顆粒為陽性表達。參照文獻[13]對各蛋白的染色強度進行計分：0分記為陰性(-)、1～2分記為弱陽性(+)、3～4分記為陽性(++)、5～6分記為強陽性(+++)，(+)、(++)、(+++)均計為陽性表達；同時以(-)和(+)為弱表達，(++)和(+++)為強表達。

1.3統計學方法使用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析。患者胃癌組織Vav3表達強度與臨床病理特征的關系采用χ2檢驗；Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表達之間的關系采用Spearman秩相關分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織及癌旁正常組織的表達胃癌組織中Vav3的陽性表達率為78.3%(72/92)，高于癌旁正常組織的40.2%(37/92)，差異有統計學意義(χ2=27.572，P<0.001)；胃癌組織中RelA的陽性表達率為88.0%(81/92)，高于癌旁正常組織的52.2%(48/92)，差異有統計學意義(χ2=28.242，P<0.001)；胃癌組織中PCNA的陽性表達率為73.9%(68/92)，高于癌旁正常組織的47.8%(44/92)，差異有統計學意義(χ2=13.143，P<0.001)；胃癌組織中MMP-2的陽性表達率為69.6%(64/92)，高于癌旁正常組織的48.9%(45/92)，差異有統計學意義(χ2=8.125，P=0.004，見圖1、2，本文圖1、2彩圖見本刊官網 www.chinagp.net電子期刊相應文章附件)。

2.2Vav3表達強度與臨床病理特征的關系Vav3強表達患者性別、年齡、浸潤深度、遠處轉移情況與Vav3弱表達比較，差異無統計學意義(P>0.05)；Vav3強表達患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移程度與Vav3弱表達比較，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.3相關性分析Vav3表達與RelA、PCNA、MMP-2表達均呈正相關(rs=0.338，P<0.001；rs=0.225，P=0.031；rs=0.267，P=0.010)；RelA表達與PCNA表達呈正相關(rs=0.336，P=0.001)；RelA表達與MMP-2表達無直線相關關系(rs=0.176，P=0.094)；PCNA表達與MMP-2表達無直線相關關系(rs=0.188，P=0.072)。

3　討論

近年來，胃癌的綜合治療已取得很大進展，但胃癌患者總體生存率仍不能令人滿意[2-3]。胃癌存在進展快、易發生淋巴結轉移、治療后易復發等特點，均是導致其綜合治療效果不佳的主要原因。本課題組前期研究發現，Vav3在胃癌細胞株存在表達增高現象，而抑制胃癌細胞株中Vav3表達對胃癌細胞的增殖、侵襲、耐藥能力均有積極影響[11-12,14]。本研究檢測了Vav3在胃癌組織和癌旁正常組織中的表達情況，結果顯示，胃癌組織中Vav3陽性表達率高于癌旁正常組織，表明Vav3與胃癌的發生有關。Vav3強表達患者腫瘤分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移程度與Vav3弱表達間存在差異，提示Vav3在促進胃癌侵襲轉移中發揮了重要作用，通過Vav3檢測可對胃癌侵襲轉移情況進行預測。但本研究也發現，Vav3與腫瘤浸潤深度、遠處轉移無關。分析其原因一方面可能為胃癌侵襲轉移是一個復雜的過程，多種基因共同作用導致胃癌進展，Vav3表達僅發揮了部分作用；另一方面可能為本研究樣本較少，還應擴大樣本量進行深入探索。

注：PCNA=增殖細胞核抗原，MMP-2=基質金屬蛋白酶2

圖1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌組織中的表達(免疫組化染色，×400)

Figure 1Expression of Vav3,RelA,PCNA,MMP-2 protein in gastric cancer tissue

圖2　Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在癌旁正常組織中的表達(免疫組化染色，×400)

Table 1Relationship between Vav3 expression in gastric cancer tissue and clinicopathologic features

臨床病理特征Vav3強表達(n=72)Vav3弱表達(n=20)χ2值P值性別0.4910.484 男52(72.2)16(80.0) 女20(27.8)4(20.0)年齡(歲)1.1100.292 ≥6041(56.9)14(70.0) <6031(43.1)6(30.0)腫瘤分化程度5.4840.019 中高分化45(62.5)18(90.0) 低分化27(37.5)2(10.0)腫瘤直徑(cm)15.947<0.001 ≥547(65.3)3(15.0) <525(34.7)17(85.0)浸潤深度4.3820.223 T14(5.6)4(20.0) T217(23.6)4(20.0) T317(23.6)5(25.0) T434(47.2)7(35.0)淋巴結轉移程度18.853<0.001 N05(6.9)5(25.0) N15(6.9)7(35.0) N238(52.8)6(30.0) N324(33.4)2(10.0)遠處轉移0.2250.635 M064(88.9)17(85.0) M18(11.1)3(15.0)

注：T1=腫瘤侵犯黏膜或黏膜下層，T2=腫瘤侵犯固有肌層，T3=腫瘤穿透漿膜下層結締組織但未侵犯臟層腹膜或鄰近結構，T4=腫瘤侵犯漿膜或鄰近組織，N0=無區域淋巴結轉移，N1=1～2個區域淋巴結轉移，N2=3～6個區域淋巴結轉移，N3=≥7個區域淋巴結轉移，M0=無遠處轉移，M1=存在遠處轉移

RelA是NF-κB蛋白家族的5個成員之一，NF-κB蛋白家族作為重要的信號轉導通路，在腫瘤的進展中發揮了重要作用[15-16]。PCNA存在于細胞核內，為DNA聚合酶δ的輔助蛋白，在增殖旺盛的腫瘤細胞內表達明顯增高，是反映細胞增殖狀態的蛋白質[17-18]。MMP-2是基質金蛋白酶(MMPs)家族的重要成員，對促進腫瘤細胞侵襲轉移有重要作用。目前認為，MMP-2在腫瘤細胞破壞細胞間基質及突破基底膜的過程中發揮了重要作用[19-20]。本研究結果顯示，胃癌組織中RelA、PCNA、MMP-2陽性表達率均高于癌旁正常組織，表明這些蛋白在胃癌癌變過程中發揮了作用。

有研究發現，Vav3可增強NF-κB信號轉導通路的活性[21]。本課題組前期研究發現，Vav3具有上調PCNA、MMP-2表達的作用[10-11]。本研究結果顯示，Vav3表達與RelA、PCNA、MMP-2表達均呈正相關，提示Vav3可能通過調控這些蛋白促進了腫瘤的侵襲轉移。

綜上所述，Vav3在胃癌組織中存在過表達現象，Vav3表達與腫瘤轉移相關指標存在關系，且與調節腫瘤細胞侵襲轉移的蛋白存在相關性。但本研究僅對臨床發現的現象進行了理論上的分析，結果可能存在較大的推測性質。今后一方面要進一步擴大樣本量，確定Vav3基因與胃癌的關系；另一方面還要結合本課題組前期體內試驗、體外實驗研究結果[10-11,13]，將Vav3基因檢測推向臨床。

作者貢獻：溫轉進行試驗設計與實施、資料收集整理、研究質量控制、撰寫論文、成文、審校等工作；李勇對試驗設計、實施、論文撰寫等工作進行指導和質量控制，并對文章負責；王曉、檀碧波、劉慶偉、賈楠進行資料收集、試驗實施及結果分析、統計處理等。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：李婷婷)

Relation Between Vav3 Expression and Tumor Invasion and Metastasis in Gastric Cancer Tissue and the Clinical Significance

WENZhuan,WANGXiao,TANBi-bo,etal.

DepartmentofHealthCare,theFourthAffiliatedHospital,HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011,China

ObjectiveTo investigate the relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance.MethodsWe collected the paraffin specimens of gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue from 92 patients who2=27.572,P<0.001).The positive expression rate of RelA in gastric cancer tissue was 88.0%(81/92),higher than 52.2%(48/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=28.242,P<0.001).The positive expression rate of PCNA in gastric cancer tissue was 73.9%(68/92),higher than 47.8%(44/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=13.143,P<0.001).The positive expression rate of MMP-2 in gastric cancer tissue was 69.6%(64/92),higher than 48.9%(45/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=8.125,P=0.004).There was no significant difference in gender,age,depth of infiltration,and distant metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P>0.05).There was significant difference in tumor differentiation degree,tumor diameter and the extent of lymph node metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P<0.05).The expression of Vav3 had positive correlation with the expression of RelA,PCNA and MMP-2(rs=0.338,P<0.001;rs=0.225,P=0.031;rs=0.267,P=0.010).The expression of RelA had positive correlation with the expression of PCNA(rs=0.336,P=0.001);the expression of RelA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.176,P=0.094).The expression of PCNA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.188,P=0.072).ConclusionThere is overexpression of Vav3 in gastric cancer tissue,and the increase of Vav3 is associated with tumor metastasis and progress.Vav3 is involved in the progress and metastasis of gastric cancer by regulating RelA,PCNA and MMP-2 expression.

resection for gastric carcinoma in the Third Surgery Department of the Fourth Affiliated Hospital of Hebei Medical University from May 2014 to May 2015.The expressions of Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 in gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue were detected by immunohistochemistry staining.The relation between Vav3 expression and clinical and pathological characteristics in gastric cancer tissue was analyzed.The relation among Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 expression was investigated by Spearman correlation analysis.ResultsThe positive expression rate of Vav3 in gastric cancer tissue was 78.3%(72/92),higher than 40.2%(37/92) in carcinoma side normal tissue(χ

Stomach neoplasms;Neoplasm invasiveness;Neoplasm metastasis;Vav3 protein

國家自然科學基金資助項目(81072033,81372580)；河北省科技支撐項目(14277779D)；河北省衛計委醫學科學研究重點課題(20150340)

050011河北省石家莊市，河北醫科大學第四醫院干部保健處(溫轉)，外三科(檀碧波，李勇，劉慶偉，賈楠)；河北省人民醫院醫療美容科(王曉)

李勇，050011河北省石家莊市，河北醫科大學第四醫院外三科；E-mail：li_yong_hbth@126.com

R 735.2

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.21.004

2015-11-17；

2016-03-26)