雞IGF2基因外顯子1的多態(tài)性及其與生產(chǎn)性能的相關(guān)性

陳則東++沈曉鵬++穆洪云

摘要：為研究胰島素樣生長因子2基因（IGF2）多態(tài)性及其對雞生產(chǎn)性能的影響，采用DNA測序、PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）技術(shù)分析基因單核苷酸多態(tài)性，并對雞的生產(chǎn)性能進行相關(guān)分析。結(jié)果可知：共發(fā)現(xiàn)2個SNPs位點，P1位點對4周齡雞體質(zhì)量具有顯著影響（P<0.05）。研究結(jié)果初步表明：IGF2基因可能是影響雞生長繁殖性狀的1個主效基因或是與其存在緊密遺傳連鎖的1個標記。

關(guān)鍵詞：雞；IGF2基因；外顯子1；遺傳多態(tài)性；生產(chǎn)性能

中圖分類號： S831.2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2016）06-0331-02

收稿日期：2015-05-19

作者簡介：陳則東（1985—），男，江蘇宿遷人，碩士，助教，從事實驗動物科學(xué)與教學(xué)研究。E-mail：m15852953053@163.com。

IGF2（insulin-like growth factor2）基因是最早發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性印跡基因[1]，IGF2為單鏈多態(tài)，分子量7.5 ku[2]。研究發(fā)現(xiàn)，IGF2是影響動物胚胎生長分化的重要因子，參與多種代謝的調(diào)節(jié)[3]。IGF2基因表達具有時間特異性，如小鼠胚胎中IGF2基因開始為雙等位基因表達，但在胚胎形成后期則表現(xiàn)為母源單等位基因表達[4-5]。本研究以雞為研究對象，以IGF2基因為候選基因，采用PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）方法[6]檢測基因是否存在單核苷酸多態(tài)性，探討不同基因型與雞生產(chǎn)性能的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1試驗材料與處理

210羽母雞血樣采自翔龍企業(yè)有限公司，同時記錄其生長性狀（初始質(zhì)量、4、8、12、16周齡體質(zhì)量）及繁殖性狀（開產(chǎn)日齡、開產(chǎn)體質(zhì)量、開產(chǎn)蛋質(zhì)量、300日齡產(chǎn)蛋數(shù)）；翅靜脈采集血樣1.5 mL，肝素鈉抗凝，-20 ℃保存；DNA提取試劑盒[Omega Blood DNA Kit（200次）]法抽提基因組DNA。

1.2引物設(shè)計

根據(jù)GenBank中雞的IGF2基因（GenBank登錄號：NC_006092）設(shè)計IGF2基因第1外顯子引物P1，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物的詳細信息：F：5′-TGTGCTGCCAGGCAGATAC-3′；R：5′-CCCCAACCCAGCTCTATCT-3′。

1.3PCR-SSCP分析

將3 μL PCR產(chǎn)物加入7 μL變性緩沖液中，98 ℃變性 10 min，然后迅速冰浴5 min。將變性好的PCR產(chǎn)物點樣加入到10%聚丙烯酰胺凝膠中，于140 V電泳12 h。在電泳結(jié)束后，進行銀染顯色并拍照記錄結(jié)果。

1.4IGF2基因統(tǒng)計分析

配合以下模型進行方差分析：

yijk =μ+Gi+Gj+Gij+eijk。

式中：yijk為性狀測定值；μ為群體平均值；Gi、Gj為基因型效應(yīng)；Gij為位點i與位點j間的互作效應(yīng)；eijk為第i個品種在第j個環(huán)境、第k次重復(fù)的試驗誤差。

2結(jié)果與分析

2.1PCR-SSCP結(jié)果

P1引物擴增片段采用PCR-SSCP分析。由圖1可知，P1擴增片段有3種帶型，分別定義為AA、AB、BB。

2.2序列分析結(jié)果

測序結(jié)果（圖2）顯示，P1引物擴增的IGF2基因外顯子1檢測到2個突變位點：1個為C-A突變，導(dǎo)致蘇氨酸變化為賴氨酸；另一個為G-A突變，導(dǎo)致丙氨酸變成蘇氨酸。

2.3IGF2基因P1引物擴增的不同基因型與生產(chǎn)性能的關(guān)聯(lián)分析

由表1可知：在4周齡，AA基因型體質(zhì)量顯著低于AB基因型（P<0.05）。

3討論

SNPs指基因組中單個核苷酸的變異引起的DNA序列多態(tài)性，包括堿基轉(zhuǎn)換（A與G之間或T與C之間的替換）、顛換（嘌呤和嘧啶之間的替換）、單堿基插入或缺失等變化，而且其中最少的一種等位基因在群體中的頻率不低于1%。研究表明，DNA序列中單個堿基發(fā)生轉(zhuǎn)換、顛換約占DNA變異的90%以上，是最常見的一種變異形式[7]。本試驗在雞的IGF2基因外顯子1中檢測到2個突變位點，1個為C-A顛換，導(dǎo)致蘇氨酸變化為賴氨酸，另一個為G-A轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致丙氨酸變化為蘇氨酸；P1位點AA型個體4周齡體質(zhì)量顯著低于AB型（P<0.05），因此初步認為AB與4周齡體質(zhì)量呈正相關(guān)。

參考文獻：

[1]楊玉華，何小兵. 印記基因IGF2和H19的研究進展[J]. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜記，2002，24（4）：254-256.

[2]李瑗. 胰島素樣生長因子Ⅱ與人及實驗動物的肝細胞癌[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志，1998，14（5）：86-87.

[3]ODell S D，Day I N M. Molecules in focus insulin-like growth factor Ⅱ（IGF-Ⅱ）[J]. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology，1998，30（7）：767-771.

[4]李志輝，王啟貴，趙建國，等. 類胰島素生長因子Ⅱ（IGF2）基因多態(tài)性與雞體脂性狀的相關(guān)研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，37（4）：600-604.

[5]楊鳳萍，李其松，戴國俊，等. 京海黃雞IGF-Ⅱ基因SNPs及其與生產(chǎn)性能關(guān)系研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2008，39（11）：1470-1475.

[6]王利紅，袁旭紅，魏萍萍，等. 蘇姜豬Lrh-1基因PCR-SSCP多態(tài)性及其與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（5）：21-25.

[7]雷秋霞，周艷. 淺談數(shù)量遺傳學(xué)與家禽育種[J]. 家禽科學(xué)，2009（3）：45-47.