豬病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

高鵬

近些年我國養(yǎng)豬業(yè)蓬勃發(fā)展，整體模式還是以散養(yǎng)戶和小規(guī)模養(yǎng)殖場結(jié)合為主。養(yǎng)殖技術(shù)參差不齊，疾病的流行也是呈現(xiàn)多樣化的趨勢。老的傳染病死灰復(fù)燃、新的疾病層出不窮、多種疾病混合感染的案例不斷出現(xiàn)。過去獸醫(yī)依靠經(jīng)驗(yàn)?zāi)軐膊∽龀龀醪皆\斷，但現(xiàn)在疾病的臨床表現(xiàn)呈現(xiàn)多元化、非典型性病例時有發(fā)現(xiàn)，僅憑臨床癥狀和流行病學(xué)很難對疾病做出準(zhǔn)確的診斷。并且臨床診斷具有滯后性，一旦豬場出現(xiàn)疾病大規(guī)模流行、到了臨床癥狀非常明顯的階段，再想控制就比較困難了。近些年，國內(nèi)外越來越重視豬病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，不但可以快速、準(zhǔn)確的診斷疾病以便合理用藥，還可以對于潛伏期的疾病做出預(yù)警，評估豬群疫苗接種效果、了解母源抗體水平等，為豬場的安全生產(chǎn)保駕護(hù)航。

1實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)介紹

1.1涂片鏡檢及病原體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

通過提取血液、尿液、痰液及組織等，涂抹在玻片上，在顯微鏡下觀察細(xì)菌等病原體。通過革蘭氏染色還可以區(qū)別革蘭氏陽性或陰性細(xì)菌的感染。涂片鏡檢實(shí)驗(yàn)方法簡單、僅需要顯微鏡就可實(shí)驗(yàn)、可用于疾病的初期判斷。病原體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)是一種體外人工繁殖病原體的技術(shù)，選取病料接種在培養(yǎng)基上、37℃生長12-24h、通過菌落形態(tài)及生化反應(yīng)來判斷結(jié)果。分離培養(yǎng)的菌株還可以進(jìn)一步做藥敏實(shí)驗(yàn)，通過抑菌試驗(yàn)篩選出敏感性強(qiáng)、療效好的抗菌藥物進(jìn)行治療。仔豬黃白痢等疾病通過細(xì)菌培養(yǎng)比較好判斷，而副豬嗜血桿菌、傳染病胸膜肺炎放線桿菌等較難判斷，并且越來越多的豬只混合感染、需要結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步診斷。

1.2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）

通過擴(kuò)增放大特定的DNA片段來檢測微量病原體的技術(shù)。偽狂犬、藍(lán)耳病、乙腦、傳染性腸胃炎、輪狀病毒、豬瘟等都可以應(yīng)用PCR方法檢測。該方法靈敏度高、適用于疾病的早期診斷。但該實(shí)驗(yàn)方法操作復(fù)雜、技術(shù)要求高、需要專門的實(shí)驗(yàn)室、不適用于基層開展。

1.3酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）

將抗原或抗體包被在聚乙烯微孔板上、加入待檢標(biāo)本進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)、洗脫后加入辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行反應(yīng)、洗脫后加入底物液進(jìn)行顯色反應(yīng)、通過顏色變化或者酶標(biāo)儀來讀取結(jié)果。ELISA實(shí)驗(yàn)是一種比較經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)室方法，包括間接法、雙抗原夾心法、捕獲法等，開用于病原體及血清抗體的測定，即能定性也能得出定量結(jié)果，現(xiàn)在市場上有多種商品化的試劑盒供選擇。但ELISA實(shí)驗(yàn)操作需要有相應(yīng)的儀器設(shè)備如孵育箱、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等，并且ELISA實(shí)驗(yàn)操作比較繁瑣、實(shí)驗(yàn)過程需要1～2個小時、不適用于單個標(biāo)本的檢測。

1.4膠體金實(shí)驗(yàn)

將抗原或抗體結(jié)合在膠體金顆粒上邊，與待檢血清結(jié)合、在醋酸纖維膜載體上形成顯色反應(yīng)的一種技術(shù)方法，主要有層析法和滲濾法。膠體金檢測方法可用血清、全血標(biāo)本，不需要特殊的儀器設(shè)備、可以實(shí)現(xiàn)單個標(biāo)本現(xiàn)場檢測，敏感性和特異性也不錯，試劑穩(wěn)定性好、一般可以室溫保存。

1.5血凝實(shí)驗(yàn)

某些病毒的血凝素能夠選擇性的使動物紅細(xì)胞發(fā)生凝集，當(dāng)特異性的抗體與相應(yīng)病毒結(jié)合使病毒失去凝集紅細(xì)胞的能力，從而抑制血凝現(xiàn)象。該實(shí)驗(yàn)方法可用于口蹄疫、流感、細(xì)小病毒、副豬嗜血桿菌、乙腦等疾病的診斷。但血凝實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜、技術(shù)要求高，需要一定條件的實(shí)驗(yàn)室才能開展。

2實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)用途

2.1疾病診斷

通過病原體的檢測及血清抗體的檢測可以了解豬只的健康情況，結(jié)合臨床癥狀明確診斷疾病。對于早期控制、合理用藥有著重要作用。

2.2免疫效果觀察

接種前，通過血清抗體測定可以了解豬只抗體保護(hù)水平、尤其是仔豬的母源抗體，這樣就可以為豬只疫苗接種時間提供參考。接種后，檢測血清抗體可了解豬群的疫苗接種效果，為免疫程序的制定和修改提供幫助。

3實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)注意事項(xiàng)

3.1病料的采集

不同類型的疾病病料采集和運(yùn)輸?shù)姆绞揭膊惶粯樱瑧岩杉?xì)菌性疾病時要做到無菌采集、采集病料所用的刀、剪、鑷子等用具須經(jīng)嚴(yán)格消毒后方可使用。病毒性疾病要采集病毒集中的部位如淋巴結(jié)、脾臟、腎臟等。同時采樣人員做好個人防護(hù)，必須戴好手套、口罩、帽子，穿好工作服等防護(hù)用品后才能進(jìn)行采樣操作，以減少被感染的機(jī)會。

3.2結(jié)果假陽性和假陰性

實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果會出現(xiàn)假陽性和假陰性，即沒有感染疾病的豬只得出陽性結(jié)果、感染疾病的豬只得出陰性結(jié)果。病料污染、實(shí)驗(yàn)室交叉污染、檢測試劑質(zhì)量問題等都會造成假陽性結(jié)果。假陰性的情況就比較復(fù)雜，如疾病的“窗口期”、檢測試劑的靈敏度、送檢病料的采樣時機(jī)和部位等都會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。

總之，在豬病防控過程中，一定要有科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和方法，不能抱有僥幸心理。學(xué)習(xí)現(xiàn)代的豬病防治技術(shù)，學(xué)習(xí)剖檢化驗(yàn)技術(shù)，不能僅憑豬身的外觀變化，就亂下結(jié)論，盲目用藥，從而造成豬病延誤，藥費(fèi)增加，損失極大。有條件的養(yǎng)豬場可自行建立化驗(yàn)室，可對豬場疾病控制起到事半功倍的效果。規(guī)模小的豬場可選擇適當(dāng)?shù)臋z測方法和試劑，或者與大的養(yǎng)殖場及科研單位建立聯(lián)系、將標(biāo)本送檢。當(dāng)然，實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果也不是100%準(zhǔn)確的，也需要通過流行病學(xué)和臨床癥狀綜合判斷。