淺析關(guān)于三種中藥制劑微生物限度檢查方法學(xué)驗證

孟曉丹

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淺析關(guān)于三種中藥制劑微生物限度檢查方法學(xué)驗證

孟曉丹

【摘要】目的 探討三種中藥制劑微生物限度檢查方法學(xué)驗證的結(jié)果。方法 按《中國藥典》中微生物限度檢查方法對腎炎清片、濟生腎氣膠囊、健腎顆粒進行微生物限度檢查。結(jié)果 研究顯示被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)大于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上菌落一致，說明該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。結(jié)論 微生物限度檢查方法檢測三種中藥制劑（腎炎清片、濟生腎氣膠囊、健腎顆粒）中，準(zhǔn)確可行，操作簡單。

【關(guān)鍵詞】中藥制劑；微生物限度；檢查方法學(xué)；驗證

中藥制劑微生物限度檢查是控制我國中藥藥品質(zhì)量的重要方法和指標(biāo)之一［1-3］。本文參照2010年《中國藥典》關(guān)于微生物限度檢查方法，對三種治療腎病的中藥制劑進行方法學(xué)驗證，從而為中藥制劑微生物限度檢查提供理論依據(jù)。

1 實驗材料和儀器

1.1 實驗儀器

BLYSC-DA-008凈化工作臺、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子分析天平、霉菌培養(yǎng)箱、電熱鼓風(fēng)干燥箱、紫外分析儀。

1.2 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉脂培養(yǎng)基、膽鹽乳酸培養(yǎng)基、馬丁培養(yǎng)基、pH 7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液等。

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌；白色念珠菌/大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/黑曲霉菌。

1.4 中藥制劑樣品

腎炎清片、濟生腎氣膠囊、健腎顆粒。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備供試品溶液

取出樣品，各為10 g，放置于滅菌錐形瓶內(nèi)，加入緩沖液到100 ml，攪拌均勻，比例為1：10，備用。

2.2 制備對照品溶液

把金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)物進行接種，加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放在溫度為35℃的環(huán)境下進行培養(yǎng)，時間為18～24 h，取其培養(yǎng)物，使用0.9%無菌生理鹽水制備菌液（50～100 cfu/ml），備用。然后把白色念珠菌的培養(yǎng)物進行接種，加入改良馬丁培養(yǎng)基中，放在溫度為25℃的環(huán)境下進行培養(yǎng)，時間為24～48 h，取其培養(yǎng)物，使用0.9%無菌生理鹽水制備菌液（50～100 cfu/ml），備用。最后，把黑曲霉的培養(yǎng)物進行接種，加入改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，放在溫度為25℃的環(huán)境下進行培養(yǎng)，時間為7 d，取其培養(yǎng)物，使用0.9%無菌生理鹽水5 ml，洗脫，吸出孢子懸液，放在無菌試管中，再使用0.9%無菌生理鹽水制備菌液（50～100 cfu/ml）備用。

2.3 培養(yǎng)基適用性檢查

取出各種菌體，量各為50～100 cfu，注入無菌容器中，倒入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，對每株實驗菌進行平行制備，各為2個平皿，按照規(guī)定的時間和溫度進行操作和計數(shù)。使用相應(yīng)對照培養(yǎng)基取代被檢測對象進行以上實驗，見表1。

表1 計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果

被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)大于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，說明該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

2.4 菌落計數(shù)方法驗證

中藥制劑樣品組：取出三種中藥制劑的供試品溶液1 ml注入10個平皿里面，加入5中菌體的菌液1 ml，平均每株菌制備2個平皿，倒入溫度在45℃以下的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，放在20～35℃的環(huán)境中進行細(xì)菌培養(yǎng)48 h，放在23～28℃的環(huán)境中進行細(xì)菌培養(yǎng)72 h。菌液組：取出5中菌液1 ml，放進平皿中，平行制備2個平皿，檢測加入的試驗菌數(shù)。稀釋對照組：取出緩沖液替代供試品溶液1 ml，按照上述操作步驟進行操作，見表2。

表2 中藥制劑菌體回收率測定（%）

2.5 控制菌檢查方法驗證

2.5.1 菌液制備取出大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物少許，進行接種，加入營養(yǎng)肉羊培養(yǎng)基，放在35℃環(huán)境下進行培養(yǎng)，24 h后使用0.9%無菌生理鹽水制備菌液（10～100 cfu/ml）。

2.5.2 控制菌檢查的適用性（1）促生長能力檢查，被檢培養(yǎng)基的菌體生長情況優(yōu)于對照組培養(yǎng)基。（2）抑制能力檢查，實驗菌體沒有生長。（3）指示能力檢查，被檢培養(yǎng)基菌體生長情況、指示劑反應(yīng)和對照組培養(yǎng)基一致。

3 討論

中藥制劑含有中藥材種類較多，有的中藥成分會對微生物限度檢測準(zhǔn)確度產(chǎn)生一定影響［4］。不同中藥制劑由于含有抑菌成分的抑菌能力不同，因此其對微生物限度檢查的準(zhǔn)確度的影響也有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)抑菌成分的抑菌特性來選擇合適的方法減少抑菌成分的數(shù)量或者濃度，從而提高微生物限度檢查的準(zhǔn)確度［4-6］。

本試驗采用2010年版《中國藥典》的微生物限度檢查方法對三種中藥制劑（腎炎清片、濟生腎氣膠囊、健腎顆粒）進行微生物限度檢查［7］，研究顯示被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)大于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，說明該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

綜上所述，2010年版《中國藥典》的微生物限度檢查方法在檢測三種中藥制劑中，準(zhǔn)確可行，操作簡單。

參考文獻

［1］ 莫小林，伍小燕，韋振源，等. 10種中藥制劑微生物限度檢查方法學(xué)的驗證［J］. 中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（13）：56-59.

［2］ 劉雅琴. 5種中藥制劑微生物限度檢查方法驗證［J］. 天津藥學(xué)，2010，22（4）：6-8.

［3］ 王慧敏. 4種中藥制劑微生物限度檢查方法驗證探討［J］. 臨床合理用藥雜志，2012，5（23）：87.

［4］ 李曉東，李娟，郭朝暉，等. 幾種醫(yī)院外用中藥制劑微生物限度檢查方法的建立［J］. 西部中醫(yī)藥，2012，25（2）：25-27.

［5］ 冒興建，閆玉梅，秦建. 中藥口服制劑微生物限度檢查不合格的原因及解決辦法［J］. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2011，5（19）：130-131.

［6］ 閔紅，唐娜，尹良君. 2種中藥制劑微生物限度與控制菌方法驗證［J］. 西北藥學(xué)雜志，2013，28（3）：301-303.

［7］ 黃玉蘭，李鎮(zhèn)濤，呂謙. 中藥制劑微生物污染的因素及對策［J］. 藥物評價研究，2011，34（3）：204-207.

【中圖分類號】R927

【文獻標(biāo)識碼】A

【文章編號】1674-9308（2016）15-0179-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.15.119

作者單位：河南省洛陽市第三人民醫(yī)院藥劑科，河南 洛陽 471002

Analyses on Three Kinds of Microbial Limit Examination of TCM Methodology Validation

MENG Xiaodan
Department of Pharmacy， The Third People's Hospital of Luoyang， Luoyang He'nan 471002， China

［Abstract］Objective To investigate the effects of three kinds of microbial limit examination of TCM and the results of the methodology. Methods According to "Chinese pharmacopoeia" in the method of microorganism limit inspection of nephritis tablet， Jisheng Shenqi capsule， the healthy kidney particles for microbial limit examination. Results Studies have shown that the colony average of test medium to average 70% greater than that of contrast medium colonies， and size of colony morphology and contrast medium colonies， check that the applicability of the medium within the rules. Conclusion The method of microbial limit examination test three kinds of traditional Chinese medicine preparation （nephritis tablet， dhi kidney capsule， the healthy kidney particles）， accurate and feasible， simple operation.

［Key words］Chinese native medicine preparation， Microbial limit， Check the methodology， Validation