轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2和基質(zhì)金屬蛋白酶—7在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其意義

陳宇倩 趙俊軍

[摘要] 目的 探討轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2（MTA2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其意義。 方法 選取本院2012年1月～2014年12月的60例結(jié)腸癌標(biāo)本作為觀察組，選取30例結(jié)腸癌旁組織作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)MTA2、MMP-7蛋白在結(jié)腸癌與癌旁組織中的表達(dá)情況以及在腫瘤不同分化程度、不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況下的表達(dá)水平。結(jié)果 MTA2和MMP-7在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)與分組、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MTA2和MMP-7在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 MTA2和MMP-7與結(jié)腸癌的惡性程度有關(guān)，對(duì)結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用，能夠參與結(jié)腸癌的發(fā)展過程，可作為判斷結(jié)腸癌預(yù)后評(píng)估的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)腸癌；轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2；基質(zhì)金屬蛋白酶-7；免疫組化

[中圖分類號(hào)] R363.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）03（b）-0061-04

[Abstract ] Objective To explore expression and significance of metastasis associated protein 2 （MTA2） and matrix metalloproteinase -7 （MMP-7） in colorectal cancer. Methods 60 cases of colorectal cancer specimen from January 2012 to December 2014 in our hospital were selected as the observation group，30 cases of colorectal cancer adjacent tissues were selected as the control group.Expression condition of MMP-7 and MTA2 protein in colorectal cancer and adjacent tissues and its expression level in different degree of differentiation，clinical stage，lymph node metastasis and distant metastasis were detected by immunohistochemistry SP method. Results The positive expression of MTA2 and MMP-7 in colorectal cancer was related to the grouping，differentiation degree，lymph node metastasis and TNM stage，with significant difference （P<0.05）.There was no significant difference in the positive expression rate of MTA2 and MMP-7 in colorectal cancer （P>0.05）. Conclusion MTA2 and MMP-7 are related to the malignant degree of colorectal cancer，which can promotes the invasion and metastasis of colorectal cancer and it is involved in the development of colorectal cancer，can be used as a reference index for evaluating the prognosis of colorectal cancer.

[Key words] Colorectal cancer；Metastasis associated protein 2；Matrix metalloproteinase-7；Immunohistochemistry

結(jié)腸癌是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤，其復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移會(huì)對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生很大影響[1]。對(duì)結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)因素及機(jī)制的研究有助于為臨床預(yù)測(cè)、控制以及治療提供十分重要的客觀指標(biāo)。

近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者篩選出了一種腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MTA家族，其是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因中較重要的一種，主要參與組成組蛋白去乙酰基酶（NuRD），發(fā)揮基因轉(zhuǎn)錄抑制功能，通過調(diào)節(jié)雌激素通路、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞骨架等路徑能夠促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[2-3]。深入研究MTA基因家族的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能有利于分析惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制。目前，研究較詳細(xì)的MTA家族成員為MTA1基因。已有研究證實(shí)，MTA1可能通過影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式發(fā)揮作用，其陽(yáng)性表達(dá)率與結(jié)腸癌等惡性腫瘤的大小、病程分期和腫瘤分化程度等密切相關(guān)[4-5]。MTA2與MTA1蛋白有65%的同源性，研究顯示[6]，MTA2在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)且與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床分期以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類水解基底膜（BM）和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的蛋白水解酶家族，其中MMP-7可水解BM和ECM中的Ⅳ型膠原等多種成分，在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著很重要的作用。其基因表達(dá)水平和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)[7]。

本研究主要探討MTA2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及同MMP-7蛋白是否具有明顯相關(guān)性，分析其在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的作用，以期為評(píng)估預(yù)后和治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2012年1月～2014年12月經(jīng)手術(shù)切除并確診為結(jié)腸癌的60例標(biāo)本作為觀察組，選取30例結(jié)腸癌旁組織作為對(duì)照組。觀察組患者中，男性35例，女性25例；年齡51～77歲，平均65.2歲；高-中分化30例，低分化30例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移6例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移54例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期35例。所有患者均根據(jù)WHO中結(jié)腸癌的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型，手術(shù)前未做放化療等。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 材料 MTA2和MMP-7蛋白濃縮液均購(gòu)于Santa Cruz公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色SP法 ①石蠟切片脫蠟、水化，自來水沖洗，進(jìn)行抗原修復(fù)；②滴加過氧化物酶阻斷劑；③切片上滴加動(dòng)物非免疫血清，室溫下孵育10 min；④除去血清，切片上滴加第一抗體，4℃過夜；⑤除去PBS，切片上滴加生物素標(biāo)記的第二抗體，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，3 min/次；⑥除去PBS，切片上滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶試劑，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，3 min/次；⑦滴加新鮮配制的DAB顯色試劑顯色；⑧水沖洗，蘇木素復(fù)染，經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

MTA2和MMP-7染色陽(yáng)性的細(xì)胞均在細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，選擇陽(yáng)性細(xì)胞比較集中的區(qū)域，共10個(gè)（400倍），計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，取平均值。以陽(yáng)性細(xì)胞≥10%為陽(yáng)性，<10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTA2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析

MTA2在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)與分組、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 MMP-7表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析

MMP-7在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)與分組、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3 MTA2和MMP-7陽(yáng)性表達(dá)率的比較

MTA2和MMP-7在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.543，P=0.461）（表3）。

3 討論

MTA家族是近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者篩選出的與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因中較重要的一種，產(chǎn)物涉及MTA1、MTA2、MTA3以及MTA1s和MTA3L等類似分子[8-10]。

研究顯示[11-16]，MTA2的表達(dá)水平與乳腺癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌、胰腺導(dǎo)管癌、喉癌等腫瘤的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理學(xué)分級(jí)相關(guān)，但關(guān)于MTA2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及與MMP-7蛋白是否具有明顯相關(guān)性的報(bào)道較少。

本研究結(jié)果顯示，MTA2的表達(dá)水平與結(jié)腸癌的臨床分期及分化程度密切相關(guān)，在腫瘤的侵襲過程中能夠發(fā)揮重要作用，這與上述文獻(xiàn)中的結(jié)論相似。本研究結(jié)果也顯示，MTA2在結(jié)腸癌伴遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與不伴遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與樣本例數(shù)相對(duì)不足有關(guān)，有待在今后的研究中繼續(xù)探討。

MMPs家族是一類作用于基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的肽鏈內(nèi)切酶[7]。細(xì)胞的遷移和細(xì)胞外基質(zhì)重建的動(dòng)態(tài)平衡是由MMPs及其抑制劑——金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）共同來維持的，其平衡失常是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵性因素[17-18]。

MMP-7屬于MMPs家族中的一個(gè)亞型，能夠降解構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的主要結(jié)構(gòu)蛋白——Ⅳ型膠原和層粘連蛋白，在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用[19]。臨床研究顯示，MMP-7的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度與食管癌等多種腫瘤的分化、局部浸潤(rùn)程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Dukes分期呈正相關(guān)（P<0.05），但是其臨床意義還沒有肯定的結(jié)論，尚需進(jìn)一步探討。

本研究結(jié)果顯示，MMP-7表達(dá)水平在結(jié)腸癌和癌旁組織、結(jié)腸癌低分化組和高分化組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期與TNM分期Ⅰ～Ⅱ期中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P<0.05），提示MMP-7的表達(dá)水平與結(jié)腸癌的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度具有相關(guān)性，其可能在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。MMP-7在未伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

有研究顯示[20]，MTA2既有影響轉(zhuǎn)錄的活性，也有促進(jìn)MMP-7分泌的活性，能夠發(fā)揮基底膜的溶解作用而引起腫瘤的進(jìn)展。本研究聯(lián)合檢測(cè)了結(jié)腸癌組織中的MTA2和MMP-7表達(dá)情況，其在結(jié)腸癌中的表達(dá)無顯著相關(guān)性，而在結(jié)腸癌中的相互作用還有待于擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

綜上所述，MTA2和MMP-7在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，其與腫瘤的分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，提示MTA2和MMP-7與結(jié)腸癌的惡性程度有關(guān)，其對(duì)結(jié)腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用，能夠參與結(jié)腸癌的發(fā)展過程，故可作為判斷結(jié)腸癌預(yù)后的參考指標(biāo)。

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