櫛孔扇貝、蝦夷扇貝及其雜交子代線粒體COI和Cytb基因遺傳多樣性分析

于　濤，吳　彪，楊愛國，周麗青，劉志鴻

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櫛孔扇貝、蝦夷扇貝及其雜交子代線粒體COI和Cytb基因遺傳多樣性分析

于濤1，吳彪2，楊愛國2，周麗青2，劉志鴻2

（1.中國水產科學研究院 長島增殖實驗站，山東 煙臺 265800； 2.農業部海洋漁業資源可持續利用重點開放實驗室，中國水產科學研究院 黃海水產研究所，山東 青島266071）

摘要：為了解櫛孔扇貝（Chlamys farreri）、蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）及其雜交子代（F1）的種群遺傳多樣性和遺傳結構，對3個群體的線粒體COI和Cytb基因的部分序列進行了擴增和分析。經比對分別獲得781bp和725bp核苷酸片段，74個樣本共檢測到47個單倍型； F1群體的單倍型數、單倍型多樣性指數、核苷酸多樣性及平均核苷酸差異數都是最高的，而雙親的較低； F1和櫛孔扇貝間的遺傳距離最小，其次為櫛孔扇貝和蝦夷扇貝群體之間，F1和蝦夷扇貝群體之間的遺傳距離最大； F1和櫛孔扇貝之間的遺傳分化系數較小而兩者間的基因流比較大，F1和櫛孔扇貝與蝦夷扇貝之間的遺傳分化系數較大而基因流較小，說明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝群體群體很早就發生了遺傳分化； 采用 UPGMA法和簡化的中介網絡法構建的系統樹表明，3個群體的所有個體被分為2個族群，櫛孔扇貝和F1交叉聚為一類，蝦夷扇貝獨自聚為一類，2個分支間沒有交叉； 使用特異性引物分別對3個群體進行PCR擴增檢驗，結果櫛孔扇貝的特異引物能在雜交子代中擴增，而蝦夷扇貝的特異引物不能在子代中擴增出條帶，說明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交，其子代的線粒體遺傳模式為嚴格的母系遺傳。本研究結果表明雜種優勢的形成與線粒體遺傳多樣性的變化有關。

關鍵詞：COI； Cytb； 櫛孔扇貝； 蝦夷扇貝； F1； 遺傳多樣性

［Foundation： Supported by the earmarked fund for modern agroindustry technology research system］

櫛孔扇貝（Chlamys farreri）是我國北方海水傳統養殖的重要經濟貝類，蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）是原產于日本、俄羅斯遠東及朝鮮部分水域的冷水性貝類，20世紀80年代引入中國。針對20世紀90年代以來扇貝在夏季高溫季節大規模死亡的現象，自 2000年開始，黃海水產研究所貝類研究實驗室開展了櫛孔扇貝（♀）與蝦夷扇貝（♂）遠緣雜交的研究，雜交子代外形偏向母本，但和母本相比，具有明顯的優勢［1］。

線粒體（mitochondria）是細胞內呼吸的場所，與細胞周期、信號轉導、受精、細胞生長、分化、衰老、凋亡等有密切關系［2］，線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）是動物細胞中唯一存在于核外的遺傳物質［3］，其分子質量小，為共價閉合的環狀分子，具有較高突變率，突變固定后形成的多態位點可反映出群體遺傳結構、種群分化和種屬關系等特點［4］。絕大多數生物的線粒體遺傳模式為母系遺傳［5］，即使在不同種間的雜交研究中，仍遵循母系遺傳，徐冬冬［6］研究了褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）和夏牙鲆（P.dentatus）雜交及回交子代的線粒體遺傳模式，徐?。?］分析了對櫛孔扇貝、華貴櫛孔扇貝（Chlamys nobilis）及其雜交子代線粒體遺傳模式，結果都表明子代線粒體與母本完全相同，說明在雜交過程中線粒體遵循母系遺傳的方式。但近年來對一些雙殼貝類的研究表明［8］，線粒體基因組不完全遵循母性遺傳，而是雙單性遺傳（doubly uniparental inheritance，DUI）。

滕麗麗［9］利用16S rRNA研究了櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交其雜交子代的線粒體遺傳模式，結果證明為嚴格的母系遺傳。一般16S rRNA基因比較保守，進化速率較低，而細胞色素氧化酶 I亞基（cytochrome oxidase subunit I，COI）和細胞色素b（cytochrome b，Cytb）則變異較大，進化速度適中，可提供豐富的DNA多態信息，是研究種間、種內分子進化和系統發育最有用的基因之一［10-11］。本文首先通過對COI、Cytb基因的擴增進一步確定櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交其雜交子代的線粒體遺傳模式； 同時，分析了3個群體線粒體的遺傳多樣性水平，探討了線粒體在雜種優勢表達過程中的作用，豐富了雜種優勢遺傳機理研究的內容。

1　材料與方法

1.1材料

櫛孔扇貝（♀）與蝦夷扇貝（♂）均取自山東長島海區，經雜交產生 F1代； 取親貝閉殼肌、雜交子代的 D型幼蟲用于實驗，閉殼肌于-80℃保存備用，酒精固定幼蟲，-20℃保存備用。閉殼肌DNA 的提取采用酚-氯仿法進行［12］； D型幼蟲 DNA 的提取參照萬俊芬等［13］的方法進行。每個群體分別取30個個體進行實驗。

1.2PCR擴增

COI 基因擴增引物序列為： F-GGTCAACAAAT CATAAAGATATT GG（5′-3′），R-TAAACTTCAGGGT GACCAAAAAATCA（5′-3′）； Cytb 基因擴增引物序列為： F-TACCATGAGGACAA ATATCATTCTG（5′-3′），R-CCTCCTAGTTTGTTAGGGATTGATCG（5′-3′）。

PCR擴增體系為 50uL： 模板 DNA50ng、Taq DNA Polymerase 1 U（Tiangen）、1×buffer、2mmol/L Mg2+、引物分別為0.2umol/L、0.2mmol/L的dNTP，超純水補至 50uL。優化后的反應程序： 94℃預變性5min； 94℃變性45s，48℃（COI）/50℃（Cytb）退火1min，72℃延伸1min共35個循環； 72℃延伸5min。

1.3PCR產物純化與測序

1.5%瓊脂糖凝膠檢測PCR產物，DL2000 Marker確定條帶大小，進行切膠、回收、純化（Zymoclean?Gel DNA Recovery Kit）。純化后的PCR 產物由上海生工進行雙向測序，所用測序儀器為 ABI PRISM 3730，測序試劑為BigDyeterminator v3.1。

1.4數據分析

參考呂振明［14］的分析方法，序列采用 Clustal 1.83軟件進行編輯、排序和校對； 采用DNAsp 5.10軟件對單倍型數、單倍型多樣性指數（H）、核苷酸多樣性指數（Pi）、平均核苷酸差異數（K）等遺傳多樣性參數進行計算； 采用MEGA 4.0.2軟件計算遺傳距離和聚類分析，系統發生樹采用UPGMA模型進行構建；采用簡化的中介網絡法［15］構建單倍型網絡關系圖；用Arlequin3.5軟件計算群體間遺傳分化系數Fst及顯著性（重復次數 1000次），群體間基因流 Nm由公式Nm=（1-Fst）/2 Fst計算而得。

1.5特異性引物驗證

為了進一步驗證是否有少量的父本線粒體基因滲入子代，參照徐?。?］的方法，根據測序所得櫛孔扇貝、蝦夷扇貝COI和Cytb基因序列以及二者的差異片段，利用Primer 5設計各自特異的引物，然后利用特異性引物分別對3個群體進行擴增，反應體系、程序、檢測方法同上。特異性引物序列見表1。

2　結果

2.1擴增結果及堿基組成

序列經Clustal 對位排序、校對后，得到櫛孔扇貝、蝦夷扇貝及其雜交子代的COI和Cytb基因序列。3個群體的COI基因序列長度為781bp，與Genebank（櫛孔扇貝： EU715252.2，蝦夷扇貝： AB271769.1）中已有的序列進行比對，同源率都達到 99%，其中雜交子代和母本櫛孔扇貝的序列一致，為母系遺傳。櫛孔扇貝、雜交子一代的堿基A、T、G、 C和A+T 含量分別為19.7%、40.5%、23.8%、16.0%和60.2% ； 蝦夷扇貝的堿基 A、T、G、 C和 A+T 含量分別為19.3%、36.2%、25.2%、19.3%和55.5%。3個群體的Cytb基因序列長度為725bp，與Genebank（櫛孔扇貝：EU715252.2，蝦夷扇貝： AB271769.1）中已有的序列進行比對，同源率也都達到 99%，雜交子代和母本櫛孔扇貝的序列也一致，同樣說明為母系遺傳，櫛孔扇貝、雜交子一代的堿基A、T、G、 C和A+T 含量分別為23.6%、36.9%、26.1%、13.4%和60.5% ； 蝦夷扇貝的堿基 A、T、G、 C和 A+T 含量分別為17.7%、35.2%、27.8%、17.3%和 54.9%，通過比較看出，櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交，其雜交子代線粒體的遺傳模式為嚴格的母系遺傳。

表1　特異性引物序列及其退火溫度Tab.1　Sequences and annealing temperatures of the primers

圖1　櫛孔扇貝與蝦夷扇貝線粒體COI 和Cytb基因片段核苷酸序列Fig.1　Nucleotide sequences of COI and Cytb gene fragments of Chlamys farreri and Patinopecten yessoensis

2.2基因多態性分析

3個扇貝群體2種線粒體基因片段的遺傳多樣性參數如表2所示。從單倍型參數看，雜交子代群體的單倍型數及單倍型多樣性指數最高，分別為11、8和0.914±0.00313、0.956±0.00353，雙親的單倍型及其多樣性指數相近； 在核苷酸參數中，雜交子代群體的核苷酸多樣性依舊是最高的，分別為 0.00551± 0.00630和 0.00508±0.00601，其次為蝦夷扇貝群體，最低為櫛孔扇貝群體； 平均核苷酸差異數仍是雜交子代的最高，雙親的最低。從以上結果可以看出，雜交子代群體的遺傳多樣性較雙親的有所提高。

2.3群體遺傳分化和聚類分析

利用MEGA軟件中的Kimura 2-paramter 雙參數模型對上述3個群體進行遺傳距離計算，COI和Cytb結果相似，雜交子代和櫛孔扇貝間的遺傳距離最小為0.004261、0.005625，其次為櫛孔扇貝和蝦夷扇貝群體之間，為0.7463、0.9971，遺傳距離最大的是雜交子代和蝦夷扇貝群體之間，為 0.7501、0.9991。這表明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝很早就出現了分化，同時也表明，二者的雜交子代的線粒體遺傳模式為母系遺傳。

表2　3個扇貝群體的遺傳變異參數Tab.2　Genetic variation parameters of three scallop populations

COI和 Cytb基因流（Nm）和遺傳分化系數（Fst）分析結果也相似，雜交子代和櫛孔扇貝之間的遺傳分化系數較小，基因流則比較大，而雜交子代和櫛孔扇貝與蝦夷扇貝之間的遺傳分化系數較大，基因流較小。說明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝群體很早就發生了遺傳分化，具體結果見表3。

表3　3個扇貝群體間的遺傳分化和基因流Tab.3　Genetic divergence and gene flow between three scallop populations

采用UPGMA 法構建3個群體2種基因的系統樹，并對各分支均進行 1000 次的重復檢驗，2個系統樹結果相似，見圖3。3個群體的所有個體被分為 2個族群，櫛孔扇貝和雜交子代交叉聚為一類，蝦夷扇貝獨自聚為一類，2個分支間沒有交叉。采用簡化的中介網絡法對各類群單倍型網絡關系圖進行構建，結果也支持聚類分析結果。如圖 2所示，網絡關系圖中櫛孔扇貝和雜交子代的單倍型聚為一支，而蝦夷扇貝的單倍型獨自聚為另一支。

圖2　3個扇貝群體單倍型網絡關系圖Fig.2　Reduced median network of haplotypes showing genetic relationship between three scallop populations

2.4特異引物擴增結果

使用特異性引物分別對櫛孔扇貝、蝦夷扇貝及其雜交子代進行PCR擴增檢驗。COI-C、Cytb-C2對引物能選擇性的擴增櫛孔扇貝的COI和Cytb部分片段，分別得到大小約為 450bp和 520bp的擴增產物，在蝦夷扇貝中則無擴增產物。引物 COI-P、Cytb-P則能選擇性的擴增蝦夷扇貝的COI和Cytb部分片段，分別得到約450bp和520bp大小的擴增產物，而在櫛孔扇貝中無擴增產物，如圖4。用各自的特異引物對雜交子代進行擴增，得出的結果和在櫛孔扇貝中的一致，櫛孔扇貝的特異引物能在雜交子代中擴增，而蝦夷扇貝的特異引物不能在子代中擴增出條帶（圖4），說明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交，其子代的線粒體遺傳模式為嚴格的母系遺傳。

3　討論

3.1櫛孔扇貝與蝦夷扇貝雜交

楊愛國［1］以櫛孔扇貝與蝦夷扇貝作親本，進行了正反交實驗，雜交后代在同一海區進行了養殖試驗。結果表明，水溫15～18℃條件下，正、反交均可正常受精，受精率在 90%以上，與對照組沒有明顯差別； 成體的外部形態與母本基本相同，是偏向母本類型的異源二倍體； 正交組在第 2年高水溫季節櫛孔扇貝出現大量死亡的情況下，成活率達 95%，生長速度提高 23%，反交組在苗種中間暫養和養殖過程中的成活率比蝦夷扇貝提高 16%，生長速度未見顯著差別； 正、反交子一代生殖腺發育正常，可排放精、卵。試驗證明，櫛孔扇貝（♀）×蝦夷扇貝（♂）的雜交子一代，外部形態雖與櫛孔扇貝基本相同，但顯著提高了櫛孔扇貝的生產性能尤其是抗逆能力，遠緣雜交育種是解決櫛孔扇貝大面積死亡的重要途徑之一，其雜交子一代已經具有生產使用價值。

為驗證雜交的雜交的真實性，周麗青［16］采用掃描電鏡和透射電鏡技術對櫛孔扇貝（♀）×蝦夷扇貝（♂）的精子人卵過程進行觀察。結果表明，這2種扇貝雜交與親本自交的精子人卵過程沒有本質的區別。成熟的精卵相遇時，相互激活，產生一系列胞間反應，卵子的激活集中表現為皮層反應、受精膜舉起、成熟分裂重新啟動； 精子激活集中表現為頂體反應和受精錐形成。楊璞［17-18］采用SSR、RAPD 和GISH 技術對櫛孔扇貝（♀）和蝦夷扇貝（♂）雜交子代胚后發育，其中 SSR引物P13F449和KMY134的擴增產物中可以明顯地分辨出來自父母本群體的特有條帶； 在 RAPD 檢測中，櫛孔扇貝的特異條帶和蝦夷扇貝特異條帶均能在后代中擴增出來； GISH 結果也表明，雜交扇貝在擔輪幼蟲期和D 形幼蟲期均繼承了來自父母本遺傳物質。

圖3　3個扇貝群體的UPGMA聚類分析Fig.3　UPGMA（unweighted pair group method with arithmetic mean）tree constructed from genetic distances among three scallop populations

3.2線粒體研究

線粒體DNA是動物細胞中唯一存在于細胞核外的遺傳物質，其分子量小、為共價閉合的環狀分子、遺傳性穩定、呈嚴格的母系遺傳、無組織特異性、進化速度快，在群體遺傳學、系統發育學、分子生態學等學科的應用越來越受到關注。秦芳［19］通過分析利川馬線粒體DNA Cytb基因全序列，發現所分析的群體遺傳多態性都較豐富； 呂振明［14］采用16S rRNA基因測序技術對青島、舟山、廈門和廣州 4個鰳地理群體的種群結構及遺傳變異進行研究，結果表明，中國現存鰳種群仍具較高的遺傳多樣性水平，同時發現，青島群體與其他 3個群體間存在顯著的遺傳分化，推測青島群體的分化可能與晚更新世以來頻繁的海平面變化有關； 牟希東［20］將鯽魚和金魚線粒體 Cytb基因序列進行比較，發現二者同源性達97.9%，表明二者還在同一種的水平上。

本研究發現，雜交子代在單倍型多樣性、平均核苷酸多樣性等遺傳參數方面較父母本有所提高，原因可能是雜交的結果，在蝦夷扇貝的精子進入櫛孔扇貝的卵子時，除了核DNA進入外還有其他物質進入了卵細胞，受精卵的細胞內環境發生很大變化，致使線粒體DNA處于一種新的體系中。同種生物其細胞內環境非常相似，基因間經過長期的進化，已達到一種平衡狀態，自交不會發生劇烈的變化，而當近緣種或遠緣種雜交時，細胞內環境發生劇烈變化，出于本能兩套基因間會相互協調達到一種平衡，由于線粒體DNA的復制酶沒有校對能力和無核蛋白保護［21］，變異率本來就高，這就造成在某些位點可能發生了突變但沒有有效的損傷修復機制，突變就很容易固定了下來導致多樣性升高。Ladoukakis［22］在雙單性遺傳的貝類中發現，F和M線粒體DNA有重組現象發生，且其同源重組率的高低與雙親的線粒體的差異大小有關。

圖4　通用引物及特異性引物PCR擴增結果Fig.4　Amplified results of the general and special primers

a、c： COI和Cytb通用引物在3個群體中的擴增： 1～4為櫛孔扇貝，5～8為雜交子代，9～12為蝦夷扇貝。b、d： COI和Cytb特異性引物在3個群體中的擴增： b（左）、d（左）為蝦夷扇貝的特異性引物在蝦夷扇貝（b1-b4，d7-d10）、櫛孔扇貝（b5-b7，d1-d3）及其雜交子代（a8-a10，d4-d6）中的擴增結果； b（右）、d（右）為櫛孔扇貝的COI特異引物在櫛孔扇貝（b11-b13，d11-d14）、雜交子代（b14-b16，d15-d18）和蝦夷扇貝（b17-b20，d19-d22）中的擴增結果

Fig a and c was the amplified results of the general primers in the three populations： 1-4 was Chlamys farreri，5-8 was the hybrid offspring，9-12 was Patinopecten yessoensis.Fig b and d was the amplified result of the special primers in the three populations： b（left）、d（left）was the amplified results of the P.yessoensis' special primers in P.yessoensis（b1-b4，d7-d10），C.farreri（b5-b7，d1-d3），the hybrid offspring（b8-b10，d4-d6）； b（right）、d（right）was the amplified results ofthe C.farreri's special primers in C.farreri（b11-b13，d11-d14），the hybrid offspring（b14-b16，d15-d18），P.yessoensis（b17-b20，d19-d22）.

3.3母系遺傳的研究

絕大多數生物的線粒體遺傳模式為母系遺傳，即后代雌雄性的線粒體DNA和母本一致。對褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）、夏牙鲆（P.dentatus）［6］、翡翠股貽貝（Perna viridis）［23］、櫛孔扇貝和華貴櫛孔扇貝（Chlamys nobilis）［7］的研究表明，子代的線粒體類型都與母本完全相同，線粒體遵循母系遺傳的方式。但近年來，在貽貝科（Mytilus galloprovincialis、M.edulis、M.trossulus）、簾蛤科（Venerupis philippmarum、 Tapes philippinarum）、斧蛤科（Donax trunculus）、珍珠蚌科（Margaritifera hembeli）、河蚌科（Ligumia recta）等雙殼貝類的研究中［24］發現了雙單性遺傳（doubly uniparental inheritance，DUI）現象，即在雌性體內只有一套線粒體DNA，和母體線粒體DNA一致，稱為F型線粒體基因組，而在雄性體內則有兩套線粒體DNA，一套存在于身體的肌肉組織，與同代雌性個體和母本的 F型線粒體一致，而另一套則存在于雄性性腺中，稱為M型線粒體基因組，F型線粒體與M型線粒體基因序列有10%～30%的差異［25］。從本文的結果可以看到，櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交，其雜交子代的線粒體DNA和母本的相似性達到99.5%，且只有一套DNA序列，說明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交其子代的線粒體DNA的遺傳模式為嚴格的母系遺傳，這與滕麗麗［9］利用16S rRNA得出的結果一致。特異性引物驗證實驗顯示，櫛孔扇貝的特異性引物可以在櫛孔扇貝和雜交群體中擴增出來，而不能在蝦夷扇貝群體中擴增； 同樣，蝦夷扇貝的特異性引物可以在蝦夷扇貝擴增出來，而不能在櫛孔扇貝和雜交群體中擴增，進一步證明櫛孔扇貝和蝦夷扇貝雜交其子代的線粒體DNA的遺傳模式為嚴格的母系遺傳。

3.4細胞質遺傳與雜種優勢

滕麗莉［9］、何斌［26］、程寧寧等［27］利用 RAPD、ISSR、SRAP等技術研究了櫛孔扇貝、蝦夷扇貝及其雜交子一代的核遺傳物質的多樣性水平，都得到類似的結果，即雜交子代群體的遺傳多樣性水平都升高，得出遺傳多樣性的升高對雜種優勢的形成有一定的貢獻。群體遺傳多樣性水平是評價生物資源的重要指標，與生物對環境的適應能力、生長速度、抗病能力等密切相關，是物種保持進化潛能的基本條件，遺傳多樣性的升高將使物種表現出更強的適應性即表現出一定的優勢［28］。雜種優勢的表現涉及到各種基因之間、各種生理生化反應之間以及遺傳物質與環境之間的相互作用，因此僅僅從核基因角度來解釋雜種優勢的形成顯然是不夠的，作為動物細胞核外的唯一的遺傳物質，線粒體DNA也應該參與了雜種優勢的形成。

本文利用COI和Cytb基因考察雜交子代線粒體DNA的遺傳多樣性水平，結果顯示，在單倍型數、單倍型多樣性指數、核苷酸多樣性及平均核苷酸差異數等多樣性指數方面得出的結果和對核基因研究得出的結果類似，即雜交子代的多樣性都比兩親本的都要高。遺傳多樣性的升高將使物種表現出更強的適應性即表現出一定的優勢，核遺傳是這個原理，那么細胞質的也應該如此，線粒體遺傳多樣性的升高對雜種優勢的形成也應該有一定的作用。

Mcdaniel［29-30］等研究發現，雜種優勢的產生與線粒體的活性有密切聯系，具有雜種優勢的子代往往具有較高的線粒體活性； 鄭兢貴等［31］的研究表明，在超微結構上，雜交子代的線粒體比親本的發達；Sarkissian［3］研究還發現，將兩親本的線粒體混合，混合后的線粒體的活性比任何一方的親本的都要高，但和子代的線粒體活性相當。線粒體的遺傳模式為母系遺傳，父本的線粒體不能傳遞給后代，所以是父本的某些物質進入卵子，從而形成了一個全新的細胞內環境導致子代線粒體的變化，使其多樣性升高，多樣性升高的結果之一就是使線粒體的活性升高，類似結論在Sarkissian［30］的研究中也有發現，具有較高線粒體活性的雜交子代其線粒體的多態性也較高。

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（本文編輯： 梁德海）

Genetic diversity analysis of Chlamys farreri，Patinopecten yessoensis，and their offspring based on COI and Cytb sequences

YU Tao1，WU Biao2，YANG Ai-guo2，ZHOU Li-qing2，LIU Zhi-hong2
（1.Changdao Enhancement and Experiment Station，Chinese Academy of Fishery Science，Yantai 265800，China； 2.Key Laboratory for Sustainable Utilization of Marine Fisheries Resources，Yellow Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Qingdao 266071，China）

Received: Jul.11，2015

Key words:COI； Cytb； Chlamys farreri； Patinopecten yessoensis； F1； genetic diversity

Abstract:Mitochondrial DNA cytochrome oxidase subunit I（COI）and cytochrome b（Cytb）gene fragments were amplified and analyzed to examine the genetic diversity and structure of three scallop populations： Chlamys farreri，Patinopecten yessoensis，and their hybrid（F1）.Fragments with 781 bp of the partial COI gene and 725 bp of the partial Cytb gene were obtained after alignment and emendation，and 47 haplotypes were found in the sequences of the 74 samples.The genetic diversity indexes，including the haplotype number，haplotype diversity，nucleotide diversity，and average number of nucleotide differences，showed that the genetic diversity of F1was greater than that of the parents.The genetic distance between F1and C.farreri was the nearest and that between F1and P.yessoensis was the farthest.The level of gene flow between F1and P.yessoensis was less than the level between F1and C.farreri，while the population differentiation values between F1and P.yessoensis was greater than the value between F1and C.farreri，suggesting that the differentiation between C.farreri and P.yessoensis happened a long time ago.A UPGMA tree and reduced median network of haplotypes led to the same result，with the population of C.farreri and F1gathered together and the population of P.yessoensis gathered together independently.PCR reamplification revealed that the special primers of C.farreri could be amplified but the P.yessoensis special primers could not be amplified in the F1population，indicating that the mitochondrial DNA genetic model of F1represented matrilinear inheritance.

中圖分類號：S917

文獻標識碼：A

文章編號：1000-3096（2016）03-0001-09

doi：10.11759/hykx20141113002

收稿日期：2015-07-11； 修回日期： 2015-10-22

基金項目：國家現代農業產業技術體系建設專項基金項目

作者簡介：于濤（1985-），男，工程師，主要從事貝類遺傳育種和健康養殖研究，E-mail： cdyutao@126.com； 楊愛國（1957-），通信作者，男，研究員，電話： 0532-85811982，E-mail： yangag@ysfri.ac.cn