HPLC法測定歸芍護肝顆粒中芍藥苷的含量

戴蕓 胡秀 楊林 等

摘 要：建立測定歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的方法。采用HPLC-UV法，Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6 ×250 mm，5 ?m）；流動相為乙腈-0.1 %磷酸溶液（14：86，v/v）為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；流速為1 mL/min。芍藥苷在10～100 μg/mL范圍內線性關系良好，平均回收率為98.79%，RSD 分別為0.92%。該法簡便、準確、靈敏、重現性好，可用于歸芍護肝顆粒中芍藥苷含量的測定。

關 鍵 詞：HPLC；歸芍護肝顆粒；芍藥苷；含量測定

中圖分類號：TQ 460 文獻標識碼： A 文章編號： 1671-0460（2016）03-0476-03

Abstract： A method for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules was established. A HPLC-UV method was developed. The separation was performed on a ZORBAX SB-C18 column （4.6×250 mm， 5 ?m）. The mobile phase consisted of acetonitrile- 0.1% phosphoric acid （14：86， v/v） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 230 nm. The column temperature was 30 ℃. The calibration curves of peoniflorin showed good linearity in the range of 10～100 μg/mL. The average recoveries were 98.79% with RSD of 0.92%. The method is simple， accurate， sensitive and reproducible for determination of peoniflorin content in Guishao Hugan Granules.

Key words： HPLC； Guishao hugan granules； Peoniflorin； Content determination

歸芍護肝顆粒由我院經過長期的臨床經驗總結而來，是用于“行氣解郁、活血化瘀、清利濕熱”的中藥顆粒劑，臨床上主要用于輕度肝損傷的治療[1，2]。該方劑由當歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等八味中藥配伍，經過煎煮、濃縮、混勻等工藝制成[3]。為有效控制本品的質量，確保療效和進一步開發利用，該研究建立方中芍藥苷的含量測定方法。芍藥苷為方中白芍的主要藥效成分，具有補肝養腎澀精之功效。本研究參照相關文獻[4，5]和前期工作基礎建立歸芍護肝顆粒中芍藥苷的含量測定方法。

1 實驗部分

1.1 藥品與試劑

芍藥苷（純度：96.4%，購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201438）；當歸、白芍、山藥、茯苓、澤瀉等藥材購自湖北蘄州中藥材市場；乙腈、甲醇（色譜純，美國賽默飛世爾公司）；無水乙醇、磷酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為純凈水。

1.2 儀器

日立L-7000型高效液相色譜系統，配有L-7110 型泵，L-7200 型自動進樣器，L-7420 型UV檢測器；Sigma 3K15 高速低溫離心機（Sigma公司）；XW-80A 旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；KQ 250DE型數控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLER ME104E型電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.3 溶液制備

1.3.1 對照品溶液的制備

芍藥苷對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制成每l mL含 200 μg的溶液，即得，保存于4 ℃冰箱備用。

1.3.2 供試品溶液的制備

取本品中粉約0.5 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加稀乙醇30 mL，超聲處理（功率240 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

1.3.3 陰性供試品溶液的制備

按處方制備不含白芍的歸芍護肝顆粒10 g，取適量按1.3.2項下方法制備陰性對照溶液。

1.4 色譜條件[6，7]

色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18柱（4.6× 250 mm，5 ?m）；以乙腈-0.1 %磷酸溶液（14：86）為流動相；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；流速為1 mL/min，分析時間25 min。

2 結 果

2.1 專屬性

取陰性供試品溶液、對照品溶液及供試品溶液，按1.4項下色譜條件進樣分析，在230 nm記錄供試品溶液色譜圖，芍藥苷保留時間為14.23 min，陰性對照品溶液無此特征峰，如圖1。表明供試品中其它組分對所測組分無干擾。

2.2 線性關系

分別取不同體積的芍藥苷對照品溶液置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。配制成含芍藥苷10、20、40、60、80、100 μg/mL的標準系列溶液。以芍藥苷的峰面積比值為Y，以芍藥苷的濃度為X，線性回歸得到芍藥苷的回歸方程為Y=4596.4X+23026，相關系數為r2=0.999 2，芍藥苷對照品溶液在10～100 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。