超高效液相色譜法同時測定三黃片中4種成分的含量

曾建亭

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超高效液相色譜法同時測定三黃片中4種成分的含量

曾建亭

【摘要】目的 探討超高效液相色譜法同時測定三黃片中黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚含量的可行性。方法 采用超高效液相色譜法測定三黃片中4種組分的含量。結果 黃芩苷在6.03～241.2 mg/L、鹽酸小檗堿在6.21～248.4 mg/L、大黃素在2.06～82.4 mg/L、大黃酚在1.93～77.4 mg/L范圍內線性關系良好（r≥0.99）；穩定性試驗的相對標準偏差（RSD）均小于1.0%（n=6），精密度試驗的RSD均小于1.0%（n=6），重復性試驗的RSD均小于1.5%（n=6）；黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚的平均回收率分別為97.8%、97.0%、99.8%、98.9%，RSD均小于1.5%（n=6）。結論 超高效液相色譜法快速、靈敏，結果準確和重現性好，適用于三黃片的質量控制。

【關鍵詞】三黃片；超高效液相色譜法；含量測定

清遠市食品藥品檢驗所，廣東清遠 511515

三黃片為《中國藥典》［1］收載的品種，由大黃、黃芩苷浸膏、鹽酸小檗堿3味藥組成，具有清熱解毒、瀉火通便之功效。在《中國藥典》2015年版1部中對該制劑的質量控制是運用高效液相色譜（HPLC）法分別對黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素和大黃酚的含量進行測定。而采用超高效液相色譜法同時測定中成藥中藥物有效成分的報道也較多，已寫進了《中國藥典》2015年版。本研究就超高效液相色譜法同時測定三黃片中黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚含量的可行性進行探討，現報道如下。

1 材料與儀器

1.1 材料 黃芩苷對照品（批號：110715-201117，規格：91.7%），鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-200910，規格：97.9%），大黃素對照品（批號：110756-200110），大黃酚對照品（批號：110796-201118，規格：99.5%），均由中國藥品生物制品鑒定所提供；乙腈（色譜純）；三黃片（湖北仁悅藥業有限公司，批號：140812、140912、150203）。

1.2 儀器 沃特世ACQUITY UPLC H-Class型超高效液相色譜儀；KQ-300型超聲波臺式清洗器（廣州市自力色譜科儀有限公司）；Sartorius CPA225D型電子分析天平。

圖1 三黃片UPLC色譜圖（A.對照品；B.供試品）

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Acquity UPLC@BEH C18柱（50.0 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：乙腈-0.5%磷酸溶液梯度洗脫；柱溫：30 ℃；流速：0.2 ml/min；檢測波長：254 nm；進樣量：1 μl。在此色譜條件下測定黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素和大黃酚混合對照品溶液及三黃片供試品溶液，見圖1。

2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取黃芩苷對照品0.032 88 g、鹽酸小檗堿對照品0.031 72 g、大黃素對照品0.010 30 g、大黃酚對照品0.009 73 g分別置于20 ml容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，即得。

2.3 標準曲線繪制 精密量取上述4種對照品儲備液0.1、0.25、0.5、1、2、3、4 ml，分別置于25 ml容量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，在“2.1項”色譜條件下測定，以峰面積A與濃度C繪制標準曲線，得各組分回歸方程及相關系數，見表1。

2.4 對照品溶液 分別精密量取上述4種對照品儲備液0.5 ml，置于25 ml容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，即得黃芩苷30.150 96 μg/ml、鹽酸小檗堿31.053 88 μg/ml、大黃素10.3 μg/ml、大黃酚9.681 35 μg/ml的混合對照品溶液。

表1 各組分線性方程

2.5 供試品溶液 取三黃片樣品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約0.26 g，精密稱定，置于50 ml容量瓶中，加約30 ml 70%甲醇，超聲30 min后，冷卻，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取過濾液作為供試品溶液。

2.6 精密度試驗 取“2.4項”下混合對照品溶液，按“2.1項”色譜條件下進行測定，連續進樣6次，記錄色譜峰面積，計算得黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚相對標準偏差（RSD）分別為0.4%、0.9%、0.6%、0.6%。

2.7 重復性試驗 精密稱定同一批號（批號：150203）樣品6份，按“2.5”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1項”下色譜條件測定，記錄色譜峰面積，計算得黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚RSD分別為0.7%、1.3%、0.8%、1.0%。

2.8 穩定性試驗 取備好的批號為150203的供試

品溶液，按“2.1項”色譜條件，分別于0、4、6、8、10、12 h進樣1 μl，記錄色譜峰面積，計算得黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚RSD分別為0.6%、0.7%、0.4%、0.4%。

2.9 加樣回收率試驗 取已測定含量的樣品（批號：150203）10片，除去包衣，精密稱定，研細，分別精密稱取6份樣品約0.26 g，置于50 ml容量瓶中，分別精密加入黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚對照品儲備液適量，然后加70%甲醇約30 ml，超聲30 min后，冷卻，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取過濾液測定含量，計算回收率。黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、大黃酚的平均回收率分別為97.8%、97.0%、99.8%、98.9%，RSD分別為1.2%、1.4%、0.6%、0.7%。

2.10 樣品含量測定 取3批樣品，按“2.5”項方法制備成供試品溶液，測定含量，測得結果見表2。

表2 三黃片含量測定結果（ml/片）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 經查閱參考文獻，得知這4種物質在254 nm和265 nm［1-11］均有一定吸收，通過將混合對照品溶液比較發現，在254 nm處的吸收與線性關系更好。故選擇254 nm作為檢測波長。

3.2 樣品的前處理 參照《中國藥典》2010年版1部三黃片制劑項下3種含量測定方法中的樣品前處理方法，和比較50%甲醇提取和甲醇提取［4］，經試驗證明，70%甲醇［7］經超聲處理30 min，可將樣品提取完全。

3.3 流動相的選擇 如1%醋酸甲醇溶液-1%醋酸溶液梯度洗脫［2］、甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫［3］、乙腈-0.5%甲酸水溶液（三乙胺調pH=3.5）梯度洗脫［9］、乙腈-0.1 mol/L磷酸（三乙胺調pH=3.0）梯度洗脫［8］、甲醇-乙腈-0.5%三乙胺水溶液（含5 mol/L十二烷基磺酸鈉）梯度洗脫［12］等，最終選擇乙腈-0.5%磷酸水溶液（三乙胺調pH=3.0），分離效果好，柱效好。且用超高效液相色譜法后，4種成分分離的時間明顯縮短，同時測得4種組分的含量均符合《中國藥典》2015年版1部的要求，適用于大批量檢測和應急檢測。

參考文獻

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Simultaneous Determination of Four Components in Sanhuang Tablets by Ultra Performance Liquid Chromatography

Zeng Jianting

【Abstract】Objective To explore ultra performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of the feasibility of Sanhuang tablets;baicalin,berberine hydrochloride,emodin,chrysophanol content. Methods The contents of 4 components determination of sanhuangpian ultra high performance liquid chromatography. Results baicalin in 6.03～241.2mg/L range and berberine hydrochloride in 6.21～248.4mg/L range and emodin in 2.06～82.4mg/L range and Chrysophanol in 1.93～77.4mg/L linearity（r greater than or equal to 0.99） good.The RSD of stability test were less than 1.0% （n=6）and the RSD of precision test were less than 1.0%（n=6） and the RSD of the repeatability of the method were less than 1.5%（n=6）,baicalin,berberine hydrochloride,emodin,chrysophanol,average recovery rate was 97.8%,97.0%,99.8%,98.9% and RSD was less than 1.5%（n=6）.Conclusion Ultra high performance liquid chromatography method is rapid,sensitive,accurate and reproducible,and suitable for the quality control of Sanhuang tablet.

【Key words】Super San-huang tablets;UPLC;Content determination

【中圖分類號】R927.2

【文獻標志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.05.002

作者簡介：曾建亭（1981-），本科學歷，主管藥師。研究方向：食品藥品檢驗