氣相色譜法測定參芎葡萄糖注射液中甘油含量*

馮廣衛， 付思紅， 孫　緒， 朱　迪， 鄭　林， 李勇軍， 王愛民**

(1.貴州醫科大學 基礎醫學院， 貴州 貴陽　550004； 2.貴州醫科大學 藥學院， 民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽　550004)

氣相色譜法測定參芎葡萄糖注射液中甘油含量*

馮廣衛1， 付思紅2， 孫緒2， 朱迪2， 鄭林2， 李勇軍2， 王愛民2**

(1.貴州醫科大學 基礎醫學院， 貴州 貴陽550004； 2.貴州醫科大學 藥學院， 民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 建立參芎葡萄糖注射液中甘油含量方法的測定。方法： 采用氣相色譜法對參芎葡萄糖注射液中甘油的含量測定進行測定,色譜柱為AT-624毛細管柱、初始140 ℃保持13.5 min、120 ℃/ min升至255 ℃、保持5 min；分流進樣，分流比5.0，進樣口溫度250 ℃，進樣量1 μL，FID檢測器溫度300 ℃，柱流量6.0 mL/min，載氣高純氮氣。結果: 成功建立了氣相色譜法測定參芎葡萄糖注射液中甘油的方法，所測甘油濃度在1～10 g/L內線性關系良好，平均回收率為102.5%，RSD為2.0%；精密度試驗RSD為0.9%，重復性試驗RSD為2.4%，穩定性試驗RSD為4.2%。結論： 氣相色譜測定參芎葡萄糖注射液中甘油含量的方法，操作簡便、準確可靠。

[關鍵詞]甘油; 葡萄糖； 參芎； 色譜法,氣相

參芎葡萄糖注射液為已上市的注射劑，由丹參提取物、鹽酸川芎嗪配伍組成，具有抗血小板聚集，擴張冠狀動脈作用，用于閉塞性腦血管病及其它缺血性血管疾病的治療、療效確切[1-3]。現行參芎葡萄糖注射液質量標準僅對其中丹參素和鹽酸川芎嗪進行定量控制，難以全面控制產品內在質量[4]。課題組前期建立了參芎葡萄糖注射液中6種主要成分的含量測定方法以及指紋圖譜測定方法[5-6]。甘油作為參芎葡萄糖注射液中的主要輔料，具有調節滲透壓，增溶等作用。有研究指出，高濃度甘油對中樞神經有直接作用和滲透障礙，可引起溶血或其他毒副作用，這在參芎葡萄糖注射液質量標準[WS-10001-(HD-1136)-2002-2012]中并未加以控制[7]。本研究在前期多成分含量測定和指紋圖譜研究的基礎上，采用氣相色譜測定參芎葡萄糖注射液中甘油，為本產品的質量控制提供參考依據。

1儀器與試藥

GC-2010Plus氣相色譜儀，配置氫火焰離子化檢測器，GC-Slution色譜工作站(日本島津)。甘油分析標準品(阿拉丁試劑公司，含量>99.5%)，二甘醇(分析純，阿拉丁試劑公司，含量>99.0%)，無水乙醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，8批次參芎葡萄糖注射液均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

2方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品儲備溶液制備稱取甘油對照品2.020 8 g，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得儲備液。

2.1.2內標溶液制備精密稱取二甘醇150 mg，置50 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得內標液。

2.1.3對照品溶液制備精密量取甘油對照品儲備液2 mL，置10 mL量瓶中，精密加入內標液1 mL，加無水乙醇稀釋至刻度、搖勻，得每1 mL含甘油4.042 mg的對照品溶液。

2.1.4供試品溶液的制備精密量取供試品5 mL，置10 mL量瓶中，再精密加內標溶液1 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.5陰性對照溶液制備 按“參芎葡萄糖注射液”處方配制缺甘油的陰性樣品，照2.1.4項下方法制備陰性對照溶液。

2.2色譜條件

色譜柱 AT-624毛細管柱(30 m ×0.53 mm，3 μm)，載氣為氮氣，流速6 mL/min；柱溫140 ℃，保持13.5 min，再以120 ℃/min升至255 ℃，保持5 min；分流進樣，分流比10∶1；進樣口溫度250 ℃；氫火焰離子化檢測器，溫度300 ℃；進樣體積1 μL。

2.3專屬性試驗

分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液及不加二甘醇(內標物)的供試品溶液，照2.2項下色譜條件測定。結果顯示在供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照溶液色譜無此峰，供試品溶液和陰性對照液在與內標物相同保留時間處也無干擾峰，表明方法專屬性良好，見圖1。

注：1.二甘醇(內標物)，2.甘油，A.對照品溶液，B.供試品溶液，C.陰性對照溶液，D.不加二甘醇(內標物)的供試品溶液圖1　甘油含量測定氣相色譜圖Fig.1　Gas chromatograms of the determination of glycerol contents

2.4線性試驗

精密量取甘油對照品儲備液 0.5、1、2、4、8 mL，分別置于5個10 mL量瓶中；分別精密加入內標液1 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含甘油1.010、2.021、4.042、8.083及16.17 mg 的系列工作溶液。分別量取前述工作液1 μL，按照2.2項下的色譜條件測定，記錄色譜圖。以甘油色譜峰峰面積與內標物(二甘醇)的峰面積比值(Y)為縱坐標，以甘油濃度(X)為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=0.247 1X+0.019 8，r=0.999 9，表明在1.01～16 .2 g/L的甘油濃度范圍內線性關系良好。

2.5精密度試驗

取參芎葡萄糖注射液，照2.1.4項下方法制備供試品溶液，按2.2項下色譜條件連續測定6次。計算甘油峰面積與內標二甘醇峰面積的比值，測得峰面積比值平均值的RSD為0.90%，表明本方法的精密度良好。

2.6重復性試驗

取同一批號參芎葡萄糖注射液，分別精密量取3、5、7 mL，照2.1.4項下供試品溶液的制備方法，每個濃度分別制備3份供試品溶液，共9份，照2.2項下色譜條件測定并計算甘油含量，結果供試品中甘油平均含量為11.68 g/L，RSD為2.4%，表明方法重復性良好。

2.7穩定性試驗

取參芎葡萄糖注射液，按2.1.4項下制備供試品溶液，并按2.2項下儀器條件測定并計算含量。分別于室溫放置0、1、2、4、8、12及24 h，分別進樣測定，結果顯示甘油與內標二甘醇峰峰面積比值平均值RSD為1.8%，表明供試品溶液中甘油在24 h內穩定性良好。

2.8回收率試驗

精密量取已知甘油含量的參芎葡萄糖注射液2.5 mL，按所取供試品中甘油含量的50%、100%和150%加入甘油對照品，每個濃度制備3份，照2.1.4項下供試品溶液的制備方法制備樣品9份，并按2.2項下色譜條件測定并計算含量，結果為甘油的平均回收率為101.0%，RSD為2.3%，表明該方法準確度較好，表1。

表1　甘油回收率試驗結果

2.9樣品測定

取參芎葡萄糖注射液供試品，按2.1.4項下的制備方法制備供試品溶液各2份，按2.2項下色譜條件測定。按內標法以峰面積比值計算甘油含量，測定結果見表2。

表2　參芎葡萄糖注射液樣品甘油測定結果(n=2)

3討論

根據參芎葡萄糖注射液制備工藝，制得參芎葡萄糖注射液1 000 mL，甘油處方量為10 mL，樣品含甘油應為12.6 g/L，從測定結果可見，其含量在11.68～13.70 g/L，即在處方量的90%～110%，說明本研究的生產工藝穩定。由于甘油的沸點高，采用恒溫分離供試品甘油時，色譜峰較寬，柱效差，內標物與干擾成分不能分離，本研究在制備方法的基礎上[8～10]，采用程序升溫，使甘油的色譜峰形正常，柱效提高，獲得較好的分離效果。

本文優化了載氣流速、色譜柱溫度、進樣口和檢測器溫度、分流比等實驗參數。成功建立了氣相色譜法測定參芎葡萄糖注射液中甘油的測定方法。甘油濃度在1～10 g/L內線性關系良好，平均回收率為102.5%，RSD為2.0%；精密度試驗RSD為0.9%，重復性試驗RSD為2.4%，穩定性試驗RSD為4.2%。本文建立的參芎葡萄糖注射液中甘油的含量測定方法，操作簡便、結果穩定、準確可靠好，可應用于參芎葡萄糖注射液質量控制體系。為全面保證參芎葡萄糖注射液的質量奠定基礎。

4參考文獻

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(2016-03-03收稿，2016-05-26修回)

中文編輯： 劉平； 英文編輯： 周凌

Determination of Glycerol in Shenxiong Glucose Injection with Gas Chromatography

FENG Guangwei1, FU Sihong2, SUN Xu2, ZHU Di2, ZHENG Lin2, LI Yongjun2, WANG Aimin2

(1.SchoolofBasicMedicine,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.EngineeringResearchCenterofMinistryofEducationforDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTraditionalChineseMedicine,SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To establish the method for determination of glycerol content in Shenxiong glucose injection. Methods: The concentration of glycerol in Shenxiong glucose injection was determined by gas chromatography using AT-624 capillary column. Temperature program for the column was set up as follow: initialize at 140 ℃ for 13.5 minutes, then rise to 255 ℃ by rate of 120 ℃ per minute and keep at 255 ℃ for 5 minutes.Shunt sample with the split ratio of 5.0, injection temperature at 250 ℃, sample volume 1 μL, FID detector temperature was 300 ℃, flow rate 6.0 mL/min, and high purity nitrogen as carrier gas. Results: The reliable and accurate method for determination of glycerol in Shenxiong glucose injection by gas chromatography was established, which show a good linear relationship in the concentration range of 1 g/L～10 g/L. The average recovery rate was 102.5% with RSD of 2.0%.Precision test RSD was 0.9%, duplicate test RSD was 2.4%, and stability tests RSD was 4.2%. Conclusion: A facile, accurate and reliable method was established for determination of glycerol, which can be used as quality control method on Shenxiong glucose injection.

[Key words]Glycerol; glucose; Shenxiong; chromatography, gas

*[基金項目]貴州省中藥現代化科技產業研究開發專項項目[黔科合重G字(2013) 4001]； 貴州省教育廳項目黔教合協同創新字(2013) 04、黔教社發[(2013) 419號]

[中圖分類號]R286

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)06-0664-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.010

**通信作者 E-mail:gywam100@163.com

網絡出版時間：2016-06-16網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1639.016.html