板栗花粉生活力及貯藏適宜溫度的研究

鄒仁雙

(遼寧省林業種苗管理總站，遼寧 沈陽 110036)

板栗花粉生活力及貯藏適宜溫度的研究

鄒仁雙

(遼寧省林業種苗管理總站，遼寧 沈陽 110036)

摘要以遼栗10號花粉為試材，采用培養基法和碘-碘化鉀染色法對其進行生活力測定比較，并比較室溫(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3 種不同貯藏溫度下花粉生活力的表現。結果表明：培養基法較碘-碘化鉀染色法更適用于板栗花粉測定，-20 ℃溫度貯藏板栗花粉的效果較好。

關鍵詞板栗；花粉活力；培養基法；碘-碘化鉀染色法

板栗(Castaneamollissima)屬于山毛櫸科栗屬植物[1]，是我國山區一種重要木本糧油作物[1]。在板栗生產過程中，授粉是花期非常重要的自然活動，花粉生活力會受到自身條件和環境的影響而降低，這將直接影響板栗的坐果甚至產量[2,3]。同時，在雜交育種工作中，花粉攜帶著父本的遺傳信息，是其在進行遺傳信息交換的基本載體，在進行雜交授粉前，需要對花粉進行采集和保存，用來實現跨區域雜交或者解決花期不遇的問題。所以，無論是板栗的生產栽培還是雜交育種實踐，了解其花粉的活力特性和貯藏特性都是非常重要的。為此，筆者以遼栗10號的花粉為試料，對該品種花粉測定和貯藏溫度分別進行了比較試驗，以期為板栗的花粉活力測定及其花粉資源的臨時保存提供參考，為授粉實踐提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

試材為嫁接5年生栗樹，品種為遼栗10號。在栗樹散粉前，于2014 年6月中下旬采集該品種帶雄花序的枝條于實驗室進行水培2 d。采集雄花序，去除花瓣和花絲后收集足量的花粉，并將其分裝至2 mL離心管內，分別貯藏在室溫(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3種溫度下進行保存。

1.2試驗方法

1.2.1固體培養基法測定板栗花粉生活力測定的花粉為新鮮花粉，參照胡適宜的方法[4]，并略作修改。依次稱取硼酸和硝酸鉀各0.1 g、硝酸鈣和硫酸鎂各0.2 g，用蒸餾水溶解并定容至100 mL后混勻作為培養基母液。使用時，將培養基母液中加0.7%瓊脂，加熱完全溶解后倒入9 cm培養皿內。完全冷卻后，取少量花粉輕彈至培養基的中部，蓋上培養皿蓋，32 ℃培養24 h。花粉萌發后，利用光學顯微鏡對花粉的萌發情況進行觀察。每次觀察的視野數為5～10，合計觀察花粉粒的個數為200～300。花粉生活力用萌發率表示，即萌發的花粉數量與觀察的花粉數量百分比。重復3 次。

1.2.2碘-碘化鉀法測定板栗花粉生活力測定的花粉為新鮮花粉，參照王欽麗的方法[5]，并略作修改。依次稱取碘化鉀1 g和碘0.5 g后用20 mL蒸餾水將其完全溶解，用蒸餾水定容至50 mL。滴2滴于粘有花粉的載物片上。32 ℃下靜置5 min后利用光學顯微鏡觀察其著色情況：變為紅色的認定為該花粉具有活力，不變為紅色的認定為無活力。每次觀察的視野數為5～10，合計觀察花粉粒的個數為200～300。花粉生活力用萌發率表示，即著色的花粉數量與觀察的花粉數量的百分比。重復3 次。

1.2.3不同貯藏處理比較將花粉分別在室溫(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3種不同環境進行貯藏后，定期測定花粉的生活力。測定方法為固體培養基法(測定操作參見見1.2.1)。每個處理3次重復。

2結果與分析

2．1板栗花粉活力測定方法的確定

從表1 可以看出，使用2種方法檢測新鮮板栗花粉生活力均較高，這說明遼栗10號的花粉散粉初期有較強的授粉能力，但相比之下，固體培養基法較碘-碘化鉀染色法測定的板栗花粉平均活力高18.9 %，固體培養基法較碘-碘化鉀染色法在測定板栗花粉生活力上效果好。可見，把固體培養基法用于花粉生活力測定使花粉生活力表現得更為充分，其結果更為可靠。

表1　板栗花粉生活力不同測定方法比較

2．2板栗花粉貯藏方法比較

如圖1所示：無論使用何種貯藏方法，隨著時間的延長，花粉的生活力均在不斷降低；貯藏溫度越低，下降越慢。室溫(20～25 ℃)下，遼栗10號的花粉生活力下降的最為明顯，10 d后其花粉萌發率已降低至30%以下，大部分花粉已喪失活力，但短時間放置5 d，該品種的花粉的活力仍可超出50%，依然可以用于授粉。在4 ℃貯藏條件下，該品種的花粉的生活力下降速度明顯低于室溫放置；該條件下，花粉貯藏25 d后的萌發率仍可達到50%，可以作為雌花和雄花花期不遇時花粉臨時儲藏的方法。以-20 ℃作為貯藏條件，55 d后花粉的萌發率依然可以保持在50%以上，貯藏效果明顯好于前2種方法，是花粉貯藏的理想溫度。

3結論和討論

在生產和育種實踐中，花粉生活力往往會受到其內在遺傳因子及外部環境因素的影響。其中環境因素中合適的溫度、相對濕度是花粉萌發的必要條件[2]。不同檢測方法測定花粉的萌發率盡管不能夠完全等同于其生活力，但在合適的條件下測定結果仍可以表征其生活力[6]。本試驗結果表明固體培養基法在32 ℃測定板栗花粉生活力時，花粉萌發良好，能更準確地反映花粉的活力，可作為室內花粉生活力測定的常規方法，這為板栗不同種質資源花粉的評價提供了良好的實驗基礎。

花粉在貯藏過程中，貯藏溫度是影響花粉保存質量的必不可少的關鍵要素，大量的研究結果表明：貯藏溫度越低，花粉保存的時間就會越長，花粉的利用率越高[7]。本試驗結果表明，-20 ℃保存較4 ℃保存更為持久，花粉活力保存效果更好。

參考文獻：

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第十二卷)[M].北京：科學出版社，1998

[2] 王欽麗，盧龍斗，吳小琴，等.花粉的保存及其生活力測定[J].植物學通報，2002，19(3)：365-373

[3] 藍上宗.板栗栽培技術問答[ M].北京:中國農業出版社,1998.22-23

[4] 胡適宜.花粉生活力的測定[J].植物學通報，1993，70(2)：60-62

[5]王欽麗，盧龍斗，吳小琴，等． 花粉的保存及其生活力測定[J]．植物學通報，2002，19( 3) : 365- 373

[6] 朱軍.遺傳學[M].北京：中國農業出版社，2002：112-113

[7] 王改萍，徐濤，彭方仁.木本植物花粉的保存研究進展[J].林業科技開發，2007，21(6)：9-11

Viability of Pollen forCastaneamollissimaand its Optimal Temperature for Storage

Zou Renshuang

(Liaoning Provincial Forestry Seed Administration Station,Shenyang 110036，China)

AbstractTaking pollen of Castanea mollissima No. 10 as materials,its viability were determined by adopting iodine-potassium iodide staining. Viability of pollen under three different temperatures (20-25 ℃,4℃ & -20 ℃)was compared.Result shows that using media method is more applicable to determine the pollen of Castanea mollissima,the temperature of -20 ℃ can store optimally the pollen of Castanea mollissima.

Key wordsCastanea mollissima;viability of pollen;media method;iodine-potassium iodide staining

文章編號：1005-5215(2016)06-0039-02

收稿日期：2016-04-29

作者簡介：鄒仁雙(1978-)，男，遼寧鳳城人，大學，工程師，主要從事林業種苗管理工作.

中圖分類號：S603.2

文獻標識碼：A

doi:10.13601/j.issn.1005-5215.2016.06.013