益氣活血方抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究*

楊宇　夏建龍△　陳剛　楊挺　蔡平（.南京中醫(yī)藥大學，江蘇　南京　003；.江蘇省中醫(yī)院，江蘇　南京　0046）

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益氣活血方抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究*

楊宇1夏建龍1△陳剛2楊挺1蔡平2
（1.南京中醫(yī)藥大學，江蘇南京210023；2.江蘇省中醫(yī)院，江蘇南京210046）

【摘要】目的觀察不同濃度的益氣活血方的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法取ICR小鼠隨機分為對照組、益氣活血方高質(zhì)量濃度組［54 g/（kg·d）］、益氣活血方中質(zhì)量濃度組［27 g/（kg·d）］、益氣活血方低質(zhì)量濃度組［13.5 g/（kg·d）］、地塞米松組（0.75 mg/kg），每組10只。通過二甲苯致小鼠耳腫脹法，以小鼠耳腫脹度為考察指標，觀察不同質(zhì)量濃度的益氣活血方的抗炎作用；通過醋酸扭體法，以小鼠扭體反應次數(shù)為考察指標，觀察不同質(zhì)量濃度的益氣活血方的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度的益氣活血方均能顯著抑制二甲苯致小鼠耳腫脹的作用，能減輕冰醋酸致小鼠扭體反應次數(shù)。結(jié)論益氣活血方有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。

【關(guān)鍵詞】益氣活血方耳腫脹扭體反應抗炎鎮(zhèn)痛作用

益氣活血方在圣愈湯的基礎上加減而成，原方出自《脈因證治·金瘡》卷四，為著名醫(yī)家朱震亨所創(chuàng)。江蘇省中醫(yī)院夏建龍導師在臨床中以該方為基本方，隨癥加減，靈活運用，用于治療脊髓型頸椎病以及改善脊髓型頸椎病術(shù)后的脊髓功能狀態(tài)，該方具有益氣活血，利水消腫，通絡止痛的功效，對治療該病具有很好的療效，且服用安全、方便。在本實驗之前，已有益氣活血方對大鼠脊髓型頸椎病細胞凋亡相關(guān)基因及小鼠急性毒性試驗的研究，同時還有對其基礎方圣愈湯的臨床研究［1］，最終得到了益氣活血方能促進脊髓功能恢復且無毒副作用的結(jié)論。為了探討益氣活血方的抗炎與鎮(zhèn)痛作用，筆者通過二甲苯致小鼠耳腫脹法和醋酸扭體法，以期為益氣活血方的臨床應用提供科學依據(jù)。現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物ICR小鼠，雌雄兼?zhèn)洌?00只，體質(zhì)量（20±2）g，由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，SPF級，許可證號: SCXK（京）2012-0001。

1.2試劑與儀器黃芪、陳皮、甘草、桂枝、羌活、丹參、茯苓、當歸、蜈蚣、延胡索、地龍、獨活、澤蘭、葛根、地塞米松、鹽酸曲馬多緩釋片、生理鹽水，均購于江蘇省中醫(yī)院，二甲苯（南京化學試劑有限公司批號: 12051410789），0.6%冰醋酸（上海申博化工有限公司批號:1401101），純水由南京中醫(yī)藥大學藥理研究室提供。錘子、眼科剪、9 mm打孔器、微量進樣器由南京中醫(yī)藥大學藥理研究室提供，萬分之一電子天平由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，1 mL注射器購于江蘇省中醫(yī)院。分別取中藥材于江蘇省中醫(yī)院代煎，將代煎好的中藥按成人臨床用藥量的20倍換算為高質(zhì)量濃度、10倍換算為中質(zhì)量濃度、5倍換算為低質(zhì)量濃度，在南京中醫(yī)藥大學藥理實驗室濃縮，中藥高質(zhì)量濃度濃縮至5.4 g/mL、中藥中質(zhì)量濃度將高濃度用純水等倍稀釋至2.7 g/mL、中藥低質(zhì)量濃度將中質(zhì)量濃度用純水等倍稀釋至1.35 g/mL；用研缽將地塞米松磨細之后，用純水配制成0.075 mg/mL；用研缽將鹽酸曲馬多緩釋片磨細之后，用純水配制成2.5 mg/mL；用膠頭滴管吸取0.6 mL的冰醋酸置于100 mL的純水中配制成0.6%冰醋酸備用。

1.3分組與造模1）二甲苯致小鼠耳腫脹模型［2］。取ICR小鼠50只，雄，體質(zhì)量（20±2）g，隨機分為對照組、益氣活血方高［54 g/（kg·d）］、中［27 g/（kg·d）］、低［13.5 g/（kg·d）］質(zhì)量濃度組和地塞米松組［0.75 g/（kg·d）］，每組10只。采用灌胃給藥，對照組灌服等量（1 mL/100 g）0.9%氯化鈉溶液，地塞米松及益氣活血方各質(zhì)量濃度組，每日灌胃1次，連續(xù)5 d。小鼠禁食（自由進水）12 h后，開始實驗。末次給藥1 h后，用微量進樣器吸取二甲苯0.05 mL，涂抹于小鼠左耳里、外兩面，右耳不涂為正常對照。1 h后小鼠頸椎脫臼處死，剪下雙側(cè)耳廓，用9 mm內(nèi)徑打孔器分別在雙側(cè)耳片的同一部位打下圓耳片，稱量、記錄耳殼質(zhì)量并按照下列公式計算小鼠耳腫脹度及抑制率。腫脹度＝左耳耳質(zhì)重-右耳耳質(zhì)重。腫脹抑制率（%）=（對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對照組平均腫脹度×100%。2）冰醋酸致小鼠扭體模型［2］。另取ICR小鼠50只，雌，體質(zhì)量（20±2）g，隨機分為對照組、益氣活血方高［54 g/（kg·d）］、中［27 g/（kg·d）］、低［13.5 g/（kg·d）］質(zhì)量濃度組和鹽酸曲馬多緩釋片組（25 mg/kg），每組10只。益氣活血方各質(zhì)量濃度組及對照組灌胃給藥，對照組灌服等量（1 mL/100 g）0.9%氯化鈉溶液，每日灌胃1次，連續(xù)5 d；鹽酸曲馬多緩釋片組在造模當天灌胃給藥1次。小鼠禁食（自由進水）12 h后，開始實驗。各組動物末次給藥30 min后，每只動物分別腹腔注射0.6%冰醋酸溶液1 mL/100 g。觀察并記錄注射0.6%冰醋酸后小鼠開始扭體的時間（潛伏期）及20 min內(nèi)小鼠扭體反應（腹部凹陷，伸展后肢，臀部抬高）的次數(shù)。抑制率（%）=（對照組扭體反應的均數(shù)-給藥組扭體反應的均數(shù)）/對照組扭體反應的均數(shù)×100%

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料以表示，進行單因素方差分析和兩兩比較的LSD和Tamhanes’T2（M）檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1各組二甲苯所致小鼠耳腫脹率比較見表1。不同質(zhì)量濃度的益氣活血方均明顯降低二甲苯所致小鼠耳腫脹度，益氣活血方高、中、低質(zhì)量濃度以及地塞米松抑制率與對照組比較，效果顯著（P＜0.001）。抑制二甲苯致小鼠耳腫脹效果強弱順序為:地塞米松＞中藥高質(zhì)量濃度＞中藥中質(zhì)量濃度＞中藥低質(zhì)量濃度，表明益氣活血方具有抗炎作用。

表1　各組二甲苯所致小鼠耳腫脹率比較

表1　各組二甲苯所致小鼠耳腫脹率比較

與對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.001。下同。

組別　n　腫脹抑制率（%）對照組　10　-中藥高質(zhì)量濃度組　10　54.22中藥中質(zhì)量濃度組　10　54.00腫脹度（mg）13.85±5.16 6.34±3.35△△6.39±4.23△△中藥低質(zhì)量濃度組　10　47.00 7.31±1.90△△地塞米松組　10　5.85±4.92△△　58.00

2.2各組冰醋酸所致小鼠扭體反應比較見表2。不同質(zhì)量濃度的益氣活血方均明顯減少冰醋酸所致小鼠扭體反應的次數(shù)，益氣活血方與對照組比較有顯著差異（P＜0.05），鹽酸曲馬多緩釋片組對冰醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應有十分明顯的抑制作用（P＜0.001）。鎮(zhèn)痛效果強弱順序為:鹽酸曲馬多緩釋片＞中藥高濃度＞中藥中濃度＞中藥低濃度，表明益氣活血方有鎮(zhèn)痛作用，但是鎮(zhèn)痛效果不及曲馬多緩釋片。

表2　各組冰醋酸所致小鼠扭體反應比較

表2　各組冰醋酸所致小鼠扭體反應比較

組別　n　抑制率（%）對照組　10　-中藥高質(zhì)量濃度組　10　37.0中藥中質(zhì)量濃度組　10　36.3扭體次數(shù)（次）41.6±17.25 26.2±19.63△26.5±15.76△中藥低質(zhì)量濃度組　10　33.7 27.6±12.64△曲馬多組　10　11.8±9.67△△　71.6

3　討論

脊髓型頸椎病臨床表現(xiàn)為頸項部疼痛、上肢疼痛、麻木、無力、手指精細動作減弱、行走不穩(wěn)、肢體的觸痛覺減退或過敏，急性發(fā)作時疼痛劇烈，徹夜不得安眠。本病常因天氣變化，寒冷刺激，勞累等原因誘發(fā)，導致氣血運行不暢，經(jīng)脈瘀阻不通，出現(xiàn)頸項部及上肢疼痛、麻木。本病為本虛標實，氣血不足，瘀血內(nèi)阻，髓失所養(yǎng)之證。勞則耗氣，久勞其氣必虛，“氣為血之帥”“氣行則血行”，氣虛導致血瘀，血瘀不通則痛；氣能生血，氣虛血亦虛，肌膚、筋骨、脊髓失于濡養(yǎng)則可出現(xiàn)肢體麻木、肌肉萎軟無力、行走不穩(wěn)等癥狀；根據(jù)中醫(yī)學理論“氣行則血行，治血先治氣”的觀點，以圣愈湯為主方，加減組成益氣活血方，其組成為黃芪、陳皮、甘草、桂枝、羌活、丹參、茯苓、當歸、蜈蚣、延胡索、地龍、獨活、澤蘭、葛根14味中藥，方中重用黃芪、當歸、丹參為君藥，取其補益氣血、活血化瘀之功，延胡索、地龍、蜈蚣、桂枝活血化瘀通絡，羌活、獨活祛風勝濕止痛，陳皮、茯苓、澤蘭燥濕利水，葛根升津舒筋，甘草調(diào)和諸藥，諸藥共奏益氣活血，利水消腫，通絡止痛之功。

脊髓型頸椎病的產(chǎn)生，有其復雜的病理生理機制，多年來，一直認為脊髓受壓是產(chǎn)生疼痛的原因，然而有研究表明脊髓、神經(jīng)根周圍的炎癥可能是引起疼痛的主要原因［3］。炎癥是機體對損傷因子產(chǎn)生的一種防御反應，其局部反應主要包括紅、腫、熱、痛及功能障礙，二甲苯致小鼠耳腫脹實驗具有方法簡單、見效快、用藥少、復制成功率高等特點［4］，冰醋酸刺激引起小鼠腹膜炎而產(chǎn)生疼痛，其介導的疼痛反應可能由于腹腔PH值的下降而直接刺激傷害性傳入神經(jīng)纖維和炎癥遞質(zhì)合成共同作用導致［5］，因此本實驗選用二甲苯致小鼠耳腫脹法以及醋酸致扭體法制造抗炎鎮(zhèn)痛藥物的動物模型。

藥理實驗顯示黃芪提取物具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用［4］，其機制與鈣離子拮抗有關(guān)［5］。《景岳全書·本草正》“當歸，功專補血，又能行血，補中有動，行中有補，誠血中之氣藥，亦血中之圣藥也”。當歸在保護損傷神經(jīng)及促進神經(jīng)再生方面具有重要作用［6］，并具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗衰老等作用［7］。丹參可明顯通過降低血中炎性介質(zhì)的水平，發(fā)揮抗炎作用［8］。黃芪、丹參、當歸等能直接擴張周圍血管，明顯改善微循環(huán)，對滲出的炎性介質(zhì)有明顯的抑制作用［9］；能減輕神經(jīng)水腫、炎癥、出血、變性和脫髓鞘，來促進神經(jīng)的再生［10］，方中諸藥合用，有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛以及改善脊髓型頸椎病術(shù)后的脊髓功能狀態(tài)的作用。

通過本實驗結(jié)果顯示益氣活血方能降低二甲苯所致小鼠耳腫脹度以及減少冰醋酸所致小鼠扭體反應的次數(shù)，表明益氣活血方具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。益氣活血方的抗炎鎮(zhèn)痛作用，可能是與其方中應用能直接擴張周圍血管，改善微循環(huán)，對滲出的炎性介質(zhì)有抑制作用的黃芪、丹參、當歸等藥物有關(guān)。至于全方中各藥物的劑量與配伍之間的作用差別，全方抗炎鎮(zhèn)痛作用的有效物質(zhì)基礎和作用機制，有待進一步研究。

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The Study of Yiqi Huoxue Fang in Anti-inflammatory and Analgesic Effects

YANG Yu，XIA Jianlong，CHEN Gang，et al.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210046，China.

【Abstract】Objective: To study the anti-inflammatory and analgesic effects of Yiqi Huoxue Fang under different concentrations.Methods: The xylene-induced ear swelling model was made.The anti-inflammatory effects of 3 different concentrations Yiqi Huoxue Fang were observed by the mouse ear swelling degree as examining index.According to Glacial acetic acid-induced writhing response model，with the mouse writhing response times as examining index，the analgesic effects of 3 different concentrations Yiqi Huoxue Fang were observed.Results: Yiqi Huoxue Fang under 3 concentrations can inhibit the degree of ear swelling and the times of writhing response decreases in mouse significantly.Conclusion: Yiqi Huoxue Fang has the anti-inflammatory and analgesic effects.

【Key words】Yiqi Huoxue Fang；The ear swelling model；Glacial acetic acid-induced writhing response model；Anti-inflammatory and analgesic effects

中圖分類號:R285.5

文獻標志碼:A

文章編號:1004-745X（2016）01-0039-03

doi:10.3969/j.issn.1004-745X.2016.01.014

*基金項目：江蘇省中醫(yī)藥管理局課題（012071003370）

通信作者△（電子郵箱：drjlxia@aliyun.com）

收稿日期（2015-11-01）