冠心平對麻醉犬冠脈結(jié)扎所致急性心肌缺血的影響*

李芳　楊成流　李卓瓊　周軍　畢宇安　王振中　蕭偉△（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇　連云港　222001；2.中藥制藥過程新技術(shù)國家重點實驗室，江蘇　連云港　222001）

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冠心平對麻醉犬冠脈結(jié)扎所致急性心肌缺血的影響*

李芳1，2楊成流1，2李卓瓊1，2周軍1，2畢宇安1，2王振中1，2蕭偉1，2△
（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港222001；2.中藥制藥過程新技術(shù)國家重點實驗室，江蘇連云港222001）

【摘要】目的觀察冠心平對麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的影響。方法采用麻醉犬冠狀動脈左前降支結(jié)扎造成急性心肌缺血模型，將36只Beagle犬隨機分為假手術(shù)組、模型組、心可舒組及冠心平高、中、低劑量組，觀察心外膜電圖、檢測血氧及進行組織病理學檢查。結(jié)果冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌缺血犬的∑-ST顯著增加，與假手術(shù)組比較有明顯差異（P＜0.01）。模型組給予生理鹽水后，∑-ST無明顯影響，與假手術(shù)組比較仍有顯著性差異（P＜0.01）。給予冠心平后，冠心平高、低劑量組與模型對照組比較，在給藥60、120、180 min時∑-ST有顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），冠心平中劑量在給藥120、180 min時∑-ST有顯著降低（P＜0.01）。冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌缺血犬的N-ST較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.01）。模型組給予生理鹽水后，N-ST無明顯影響，與假手術(shù)組比較仍具有顯著性差異（P＜0.01）。給予冠心平后，冠心平高、中、低劑量組在給藥60、120、180 min時較模型組N-ST明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌氧利用率呈下降趨勢，但與假手術(shù)組比較無顯著差異（P＞0.05）。給藥3 h與給藥前比較，心肌氧利用率呈上升趨勢，冠心平高、中劑量組給藥后3 h與給藥前比較有顯著差異（P＜0.01）。假手術(shù)組心肌細胞橫紋清晰，核居中，未見變性壞死；間質(zhì)未見血管擴張及炎細胞浸潤及纖維組織增生。模型組主要表現(xiàn)心肌部分區(qū)域見心肌細胞小片狀或小灶性壞死，表現(xiàn)為細胞輪廓尚可見，但胞漿紅染、心肌纖維水腫溶解斷裂、胞核固縮碎裂或消失；心肌間質(zhì)水腫、內(nèi)有多量炎細胞浸潤（中性粒細胞、淋巴細胞和漿細胞），個別壞死區(qū)附近可見肉芽組織以及增生的纖維結(jié)締組織。各給藥組心肌細胞未見壞死、部分區(qū)域可見心肌纖維水腫，溶解斷裂；間質(zhì)水腫，有少許炎細胞浸潤和纖維組織增生。冠心平各劑量組較模型組病變均有改善，但以高劑量組最為明顯、其次是中劑量組、低劑量組。結(jié)論冠心平對犬急性心肌缺血具有明顯的保護作用。

【關(guān)鍵詞】冠狀動脈結(jié)扎心肌缺血冠心平麻醉犬

冠心病作為心血管常見病、多發(fā)病，其發(fā)病率居高不下。冠心平處方是江蘇省名中醫(yī)李七一教授的臨床經(jīng)驗方，用于治療氣陰兩傷、痰血瘀阻型冠心病，由黃精、當歸、三七、瓜萎皮、甘松5味藥組成，該藥源自古方化裁和經(jīng)驗積累。本文對冠心平治療麻醉犬急性心肌缺血的藥效學進行了研究。

1　材料與方法

1.1藥物與試劑冠心平，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號:100326，規(guī)格10 g/袋；心可舒片，山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司，批號:091273，規(guī)格0.3 g/片；肝素鈉注射液，江蘇常州千紅生化制藥股份有限公司，批號:091022；戊巴比妥鈉，上海化學試劑采購供應(yīng)站分裝廠，批號:860122；生理鹽水，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司提供，批號:1001044102；葡萄糖氯化鈉注射液，華裕制藥有限公司，批號:10032901。

1.2實驗動物健康Beagle犬（普通級）:由揚州四方實驗動物科技有限公司提供，雌雄兼用，體質(zhì)量8～12 kg，合格證號為SCXK（蘇）2008-0006。采用邢臺華興飼料有限公司提供全價營養(yǎng)犬糧，批號:20100522，飼養(yǎng)于普通級環(huán)境中，24 h晝夜交替環(huán)境，膨化飼料，每天2次，自由飲水。

1.3儀器MP150型多導(dǎo)生理記錄儀，美國Biopac公司；ALV-V10動物呼吸機，上海奧爾科特生物科技有限公司，GEM3000血氣分析儀:美國Instrumentation Laboratory公司，F(xiàn)A1004型電子分析天平:上海精科天平廠。

1.4模型制備［1-7］健康Beagle犬36只，雌雄兼用，隨機分為假手術(shù)組、模型組、心可舒組、冠心平高、中、低劑量組，每組6只。稱質(zhì)量后以30 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，背位固定，監(jiān)測肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。切開頸部皮膚后進行氣管插管并連接動物呼吸機，維持正常通氣。分離股動脈和股靜脈。股動脈插管并與壓力換能器相連監(jiān)測平均動脈血壓、心率變化，股靜脈滴注5%葡萄糖氯化鈉注射液。右側(cè)臥位固定，于左側(cè)第4肋間開胸，將心臟暴露后剪開心包，直接將每個電極分散地固定于心外膜表面，記錄心外膜電圖。分離冠狀動脈左前降支第二分支處穿線以備結(jié)扎用，通過冠狀動脈兩步結(jié)扎法建立Beagle犬急性心肌缺血模型。冠心平各劑量組和心可舒組的操作方法與模型組相同，但假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。

1.5給藥方法心可舒組予心可舒0.36 g/kg；冠心平高劑量組予6.7 g生藥/kg；冠心平中劑量組予3.35 g生藥/kg；冠心平低劑量組予1.675 g生藥/kg；假手術(shù)組和模型組給予等劑量的生理鹽水（2 mL/kg），造模當日給藥1次。待完全結(jié)扎15 min后進行記錄，作為給藥前對照，然后經(jīng)十二指腸給予各組藥物，于給藥后30、60、120、180 min記錄心外膜電圖。

1.6觀察指標1）心外膜電圖觀察:以ST段抬高≥2 mV為判斷標準，計算心肌缺血的范圍（ST段抬高總點數(shù)N-ST）及心肌缺血的程度（ST段抬高的總毫伏數(shù)∑-ST）。2）血氧檢測:取給藥前以及給藥后180 min的股動脈血和股靜脈血，采血后立即將注射器針頭插入橡皮塞，以隔絕空氣。應(yīng)用血氣自動分析儀測定血氧含量。3）組織病理學檢查:取冠脈結(jié)扎部位下1 cm處的少量心室肌組織，用10%甲醛固定后，分別進行病理組織切片檢查。觀察組織的病理學變化，具體觀察心肌細胞的水腫、變性壞死、心肌間質(zhì)的充血水腫和炎細胞浸潤及纖維組織的增生，并對主要病變按輕重程度分別記作無病變（0分）、輕度病變（1分）、中度病變（2分）和重度病變（3分）。

1.7統(tǒng)計學處理采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件。計量資料均以表示，兩組間的均數(shù)檢驗采用t檢驗，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1各組犬∑-ST、N-ST比較見表1，表2。冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌缺血犬的∑-ST顯著增加，與假手術(shù)組比較有顯著性差異（P＜0.01）。模型組給予生理鹽水后，∑-ST無明顯影響，與假手術(shù)組比較仍有顯著性差異（P＜0.01）。冠心平高、低劑量組在給藥60、120、180 min時∑-ST有顯著降低，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01），冠心平中劑量組在給藥120、180 min時∑-ST有顯著降低，與模型組比較有明顯差異（P＜0.01）。冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌缺血犬的NST明顯增加，與假手術(shù)組比較有顯著差異（P＜0.01）。模型組給予生理鹽水后，N-ST無明顯影響，與假手術(shù)組比較仍具有顯著差異（P＜0.01）。冠心平高、中、低劑量組在給藥60、120、180 min時N-ST明顯降低，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。

表1　各組犬∑-ST比較

表1　各組犬∑-ST比較

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別　n模型組　6心可舒組　6結(jié)扎前　結(jié)扎后15 min給藥后7.29±2.44 124.03±22.20△△116.4±21.00△△7.61±2.97 126.26±50.63△△91.61±35.57 100.2±20.31△△71.59±26.40 89.77±11.51△△83.44±11.50△△55.56±24.05*43.04±12.16**30 min　60 min　120 min　180 min假手術(shù)組　6　7.86±1.33 13.08±1.91　11.03±1.74　11.49±2.31 11.47±1.97　10.69±2.52冠心平高劑量組　6 10.12±3.88 122.54±11.66△△96.61±20.17　68.91±16.46*49.47±18.92**31.74±12.11**冠心平中劑量組　6　7.85±0.31 136.23±27.13△△124.08±22.72　83.97±14.67 59.71±18.63**48.26±19.95**冠心平低劑量組　6　7.86±2.18 143.53±37.47△△93.95±51.42　52.62±15.25**38.80±15.47**33.33±16.80**

表2　各組犬N-ST比較

表2　各組犬N-ST比較

組別　n模型組　6心可舒組　6結(jié)扎前　結(jié)扎后15 min給藥后0.17±0.41 12.00±0.00△△　12.00±0.00△△0.00±0.00 12.00±0.00△△　11.83±0.41 12.00±0.00△△11.33±1.03 12.00±0.00△△11.83±0.41△△8.67±1.97**　8.17±1.17**30 min　60 min　120 min　180 min假手術(shù)組　6　0.00±0.00 1.33±1.03　0.83±0.75　0.33±0.52　0.83±0.75　0.33±0.52冠心平高劑量組　6　0.17±0.41 12.00±0.00△△　11.67±0.82　10.33±1.37*　8.33±2.42**　5.50±2.17**冠心平中劑量組　6　0.00±0.00 12.00±0.00△△　12.00±0.00　10.00±1.26**　8.17±2.23**　6.00±2.68**冠心平低劑量組　6　0.00±0.00 12.00±0.00△△　11.83±0.41　9.50±1.22**　7.33±1.63**　5.67±2.42**

2.2各組犬心肌氧利用率比較見表3。冠狀動脈結(jié)扎后，各組心肌氧利用率呈下降趨勢，但與假手術(shù)組比較無顯著性差異（P＞0.05）。給藥3 h與給藥前比較，心肌氧利用率呈上升趨勢，冠心平高、中劑量組給藥后3 h與給藥前比較有顯著差異（P＜0.01）。

表3　各組犬心肌氧利用率的影響

表3　各組犬心肌氧利用率的影響

與本組0 h比較，▲P＜0.01。

組別　n模型組　6心可舒組　6氧差（A-V）20.33±23.95 37.17±13.33 28.50±23.86 51.67±15.72心肌氧利用率（AO2-VO2）/AO20.27±0.32　0.49±0.13 0.29±0.26　0.58±0.13 0 h　3 h　0 h　3 h假手術(shù)組　6 44.83±21.93 50.67±18.07　0.49±0.12　0.58±0.09冠心平高劑量組　6 29.00±14.48 50.50±11.26　0.38±0.15　0.61±0.07▲冠心平中劑量組　6 29.17±12.42 57.50±25.41　0.35±0.14　0.64±0.17▲冠心平低劑量組　6 29.17±9.33 47.67±29.60　0.41±0.12　0.53±0.25

2.3各組犬心室肌組織比較見表4，圖1。假手術(shù)組心肌細胞橫紋清晰，核居中，未見變性壞死；間質(zhì)未見血管擴張及炎細胞浸潤及纖維組織增生。模型組主要表現(xiàn)心肌部分區(qū)域見心肌細胞小片狀或小灶性壞死，表現(xiàn)為細胞輪廓尚可見，但胞漿紅染、心肌纖維水腫溶解斷裂、胞核固縮碎裂或消失；心肌間質(zhì)水腫、內(nèi)有多量炎細胞浸潤（中性粒細胞、淋巴細胞和漿細胞），個別壞死區(qū)附近可見肉芽組織以及增生的纖維結(jié)締組織。各給藥組心肌細胞未見壞死、部分區(qū)域可見心肌纖維水腫，溶解斷裂；間質(zhì)水腫，有少許炎細胞浸潤和纖維組織增生。冠心平各劑量組較模型組病變均有改善，但以高劑量組最為明顯，其次是中劑量組、低劑量組。

表4　各組心肌病理組織學檢查結(jié)果

表4　各組心肌病理組織學檢查結(jié)果

組別　n模型組　6心可舒組　6心肌細胞2.50±0.55△△1.67±0.82△1.17±0.75*　0**間質(zhì)2.50±0.84△△　1.17±0.75△1.50±1.05*　0**水腫　壞死　充血水腫　炎細胞假手術(shù)組　6　0　0　0　0冠心平高劑量組　6　1.17±0.41**　0**　1.33±1.03*　0**冠心平中劑量組　6　2.00±0.89*　0.50±0.84*　1.33±0.82*　0.50±0.84*冠心平低劑量組　6　2.83±0.41　0.33±0.52*　2.00±0.89*　0.50±1.22*

3　討論

冠心病是臨床常見病，其中醫(yī)證候動物模型包括冠心病心陽虛證大鼠模型、心血瘀阻證大鼠模型、氣虛痰濁證兔模型等，但上述模型研制較少，方法學有待進一步深入［8］。由于犬的心臟生理結(jié)構(gòu)與人比較接近，結(jié)扎犬心臟冠狀動脈前降支造成急性心肌缺血模型，具有梗死發(fā)生快、梗死范圍固定等特點［9］，是研究抗心肌缺血藥物藥效的經(jīng)典模型。

冠心平針對冠心病的常見病機“氣陰兩虛、痰瘀痹阻”組方，治療氣陰兩傷、痰血瘀阻型冠心病。心可舒具活血化瘀，行氣止痛的功效，處方中山楂可以消積化痰、活血化瘀；葛根具有養(yǎng)陰生津的功效。心可舒同時還具有滋陰化痰的作用，與冠心平功效基本相似。因為冠心平顆粒在功效上也是一種創(chuàng)新，所以就選擇了最為接近其功效的陽性藥心可舒。

冠心病主要病理基礎(chǔ)是冠狀動脈痙攣或梗塞以及心肌對氧需求量的增加，造成心肌缺血缺氧進而發(fā)生心肌變性壞死［10］。心電圖是早期診斷心肌梗死最敏感的方法［11］。心肌缺血是冠心病基本的病理生理過程，其根本防治措施是改善血供、降低氧耗及清除或?qū)褂泻ξ镔|(zhì)對心肌的不良影響［12］。因此，本實驗選取了心外膜電圖、心肌氧利用率和心肌組織病理學檢查作為檢測指標。本研究表明冠心平可降低心外膜電圖上∑-ST、N-ST，能夠改善心肌缺血犬心肌缺血程度和范圍，增加心肌氧利用率，減輕心肌組織病變程度，改善異常心肌活動、保護心肌細胞，這為其臨床應(yīng)用提供進一步的理論依據(jù)。

圖1　各組犬心室肌組織比較（HE染色，200倍）

參考文獻

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·研究報告·

·研究報告·

Effect of Guanxinping on Anesthetic Dog with Acute Myocardial Ischemia Caused by Coronary Artery Ligation

LI Fang，YANG Chengliu，LI Zhuoqiong，et al.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.，Ltd.，Jiangsu，Lianyungang 222001，China.

【Abstract】Objective: To study the effect of Guanxinping on anesthetic dog with myocardial ischemia caused by coronary artery ligation.Methods: The acute myocardial ischemic canine models were established by left anterior descending artery ligature after opening thoracic cavity under anesthesia.36 Beagle dogs were randomly assigned to six groups，which were the sham operation group，the model group，Xinkeshu group，and Guanxinping groups with high，median，and low doses of the drugs.The epicardial electrical diagram and blood oxygen were observed，and histopathological examination was evaluated.Results: The range and the degree of myocardial ischemia，as well as the pathogenic change of myocardium in the Guanxinping groups were significantly lower than that of the model group.Moreover，myocardial oxygen utilization rate of 3 h after the treatment rised obviously.Conclusion: Guanxinping has obvious protective effect on acute myocardial ischemiain dogs.

【Key words】Coronary artery ligation；Myocardial ischemia；Guanxinping；Anesthetic dog

中圖分類號:R285.5

文獻標志碼:A

文章編號:1004-745X（2016）01-0014-04

doi:10.3969/j.issn.1004-745X.2016.01.005

*基金項目：科學技術(shù)部國家重大新藥創(chuàng)制項目（2013ZX090402203）

通信作者△（電子郵箱：kanionlunwen@163.com）

收稿日期（2015-08-16）