□袁萬哲 李玉保 王建昌 張姍 陳萍 崔元 經美 李佳暖 左奕 劉聚祥 孫繼國
(1河北農業大學動物醫學院,2河北省獸醫生物技術工程技術研究中心,3聊城大學農學院,4河北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心)
雞心包積液-肝炎綜合征研究初報
□袁萬哲1,2李玉保3王建昌4張姍1陳萍1崔元1經美1李佳暖1左奕1劉聚祥1,2孫繼國1,2
(1河北農業大學動物醫學院,2河北省獸醫生物技術工程技術研究中心,3聊城大學農學院,4河北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心)
2015年6月以來,我國河南、山東、河北、遼寧、安徽、吉林等部分地區,雞群發生了不明原因的以心包積液、肝臟腫大為特征的疾病,根據病變,暫將該病稱為雞心包積液-肝炎綜合征。該病主要發生于20~30日齡的肉雞,包括817、肉雜等,發病后4~8天為死亡高峰,病程8~15天,死亡率達20~30%。同時蛋雞20~70日齡以及200~300日齡也有發生,但死亡率低于肉雞。目前,該病的發病區域不斷擴大,給我國養雞業造成了巨大的經濟損失。
該病發生后,河北省蛋雞產業技術體系崗位專家劉聚祥教授迅速組織以袁萬哲博士為首的團隊成員開展相關研究。根據流行病學調查結果,初步確定該病為一種病毒性傳染病。將發病雞肝臟經研磨、凍融并過濾除菌,通過尿囊腔接種于9日齡SPF雞胚,盲傳5代后,收集尿囊液,提取DNA后進行PCR檢測。結果顯示,該病毒可在雞胚中可以增殖,接種雞胚120小時后有部分死亡,感染雞胚肝臟可見腫大、出血等病變。通過提取尿囊液核酸進行PCR檢測,成功利用一對禽腺病毒特異性引物擴增得到目的大小的條帶,連接pMD18-T載體后轉化DH5α大腸桿菌感受態細胞,挑陽性克隆測序。結果顯示,該目的片段大小為743bp,GenBank登錄號為KT932640。BLASTN結果顯示,該毒株與禽腺病毒4型親緣關系較近。
收集第5代尿囊液,采用腹腔注射方式接種20只1日齡SPF雞,并設定對照組,隔離飼養,攻毒后第3天開始,攻毒組開始死亡,死亡雞剖檢變化與自然發病雞一致,從發病死亡雞體內也能分離到禽腺病毒。
綜上所述,通過病原分離鑒定及動物回歸實驗,確定了雞心包積液-肝炎綜合征病原為禽腺病毒4型。該病于1987年最早發現于巴基斯坦卡拉奇市附件的安卡拉地區,故也稱為安卡拉病,我國之前尚未見該病發生與流行的報道。目前,部分雞場采用組織水苗預防具有一定效果。