OCT4及BIM蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達及其相關性研究

張永琦　王　敏　朱艷麗　史　聰　閆效宇　卓玉蓮

110004 中國醫科大學附屬盛京醫院

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OCT4及BIM蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達及其相關性研究

張永琦王敏朱艷麗史聰閆效宇卓玉蓮

110004 中國醫科大學附屬盛京醫院

【摘要】目的研究OCT4及Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達及其相關性，并探討兩者在化療耐藥中的影響。方法采用免疫組化sp法，對67例卵巢漿液性囊腺癌(化療耐藥30例，敏感37例)、卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標本10例及正常卵巢組織石蠟標本10例，進行OCT4及Bim蛋白表達情況檢測。結果OCT4蛋白陽性表達率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統計學意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽性表達率分別為83.33%和45.95%,差異有統計學意義(P=0.002)。Bim蛋白陽性表達率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統計學意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽性表達率分別為43.33%和70.27%,差異有統計學意義(P=0.026)。在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達無明顯相關性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達亦無明顯相關性(γ=0.006;P=0.97)。OCT4蛋白與Bim蛋白表達與卵巢漿液性癌的發展呈負相關(P<0.01)。OCT4蛋白與Bim蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理因素無關。結論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性癌的發生與發展有關.OCT4蛋白與Bim蛋白表達在卵巢漿液性癌的發展呈負相關。OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發生、發展相互作用。OCT4基因高表達，Bim基因低表達可能是造成卵巢漿液性癌對紫杉醇+鉑類化療耐藥的因素之一。

【關鍵詞】OCT4;Bim;免疫組化；卵巢癌;化療;耐藥;敏感

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:723～726)

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤,死亡率居婦科惡性腫瘤之首。化療是治療卵巢癌重要手段之一,患者在預后方面主要取決于對化療的敏感性。但是由于原發性與繼發性耐藥的關系，化療耐藥是成為卵巢癌治愈率的關鍵因素。

OCT4是1種全能性或多能性干細胞標記物，與多種腫瘤的形成與發展及化療耐藥相關。相關研究表明，在卵巢癌的發展機制中OCT4基因是一影響因素。Bim是Bel-2家族中僅含有一個BH3結構域的蛋白，廣泛分布在機體各種組織，對防御自身免疫、維持造血細胞穩態有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性[1]近年研究發現，OCT4基因在多種惡性上皮性腫瘤高表達，并與惡性腫瘤的發生、發展和預后呈高度正相關[2-7]。Bim基因具有助凋亡活性，對防御自身免疫、維持造血細胞穩態有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性。有研究顯示在Bim蛋白表達的改變促使多種癌癥的發生[8-9]。本研究采用免疫組織化學方法(S-P免疫組化法)，檢測OCT4、Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達，討論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性腫瘤的發生與發展之間的關系。通過研究我們可以控制OCT4、Bim蛋白的表達情況，將對卵巢癌治療有重要意義。

1材料與方法

1.1資料來源

選擇于2004年1月至2010年10月期間在中國醫科大學附屬盛京醫院婦科行卵巢癌分期術或腫瘤細胞減滅術的卵巢漿液性囊腺癌初發患者手術的石蠟標本共90例，經病理學檢查確診、經隨訪后，確定術后TP化療最少6次且化療期間未使用其它化療藥物或放療的患者，排除不符合條件者，術后單純行紫杉醇+鉑類方案化療最少6次者為67例，23例不符合條件排除。67例患者根據2011年版美國NCCN分為化療敏感組37例，化療耐藥組30例。同時選取卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標本10例及正常卵巢組織石蠟標本10例。入選的患者年齡、 腫瘤大小、 位置差異無統計學意義(P<0.05)。

1.2試劑和儀器

兔抗人OCT4多克隆抗體、兔抗人AKT1多克隆抗體 (北京博奧森生物) ； SP免疫組化檢測試劑盒及DAB顯色試劑盒 (北京中杉金橋) ； PBS緩沖液 (武漢博士得) ； 其他試劑及儀器由本院中心實驗室提供。

1.3方法

采用免疫組化SP法，嚴格按照SP試劑盒說明書進行。每批實驗中均按比例選擇每組切片，每批均設對照組。用PBS代替一抗作為陰性對照。DAB 顯色后用蘇木精復染，中性樹膠封固后鏡檢。

1.4判斷標準

OCT4蛋白主要表達于細胞核和細胞質內。Bim蛋白主要表達于細胞質內。以出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。按半定量積分法判斷蛋白表達。按染色強度評分： 0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。根據陽性細胞百分率評分： 0分為無陽性細胞，1分為陽性細胞數≤10%，2分為陽性細胞數>10%～50%，3分為>50%～75%，4分為>75%。上述兩項評分≤3為陰性，>3為陽性。

1.5統計學分析

應用SPSS 17.0軟件對數據進行統計，采用χ2檢驗、 Spearman 等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的表達情況

OCT4蛋白陽性表達率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統計學意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽性表達率分別為83.33%和45.95%,差異有統計學意義(P=0.002)。Bim蛋白陽性表達率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統計學意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽性表達率分別為40.33%和70.27%,差異有統計學意義(P=0.026)，見表1。OCT4與Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿液性囊瘤、漿液性囊腺癌中的表達呈負相關性(γ=-1.7，P<0.05)，差異有統計學意義。

表1　不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的

2.2OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌化療耐藥和化療敏感組織中的相關性

對耐藥組與敏感組免疫組織化學結果進行半定量分析積分，繪制出OCT4與Bim蛋白之間的散點圖,并進行 Spearman 等級相關分析，兩組比較差異無統計學意義(P>0.05)，在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達無明顯相關性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達亦無明顯相關性(γ=0.006;P=0.97)，見圖1～3。

2.3OCT4蛋白和Bim蛋白與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征的關系

OCT4蛋白與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌的臨床病理特征無明顯相關 (P>0.05)，見表2。

表2　OCT4及Bim 蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理學特征的關系/例

圖1　OCT4、Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿

圖2　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

3討論

OCT4是1種全能或多能性干細胞標記物，屬于V

圖3　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

類蛋白。OCT4 蛋白定位于胚胎細胞和胚泡的細胞核內，在維持干細胞的多能性以及自我更新能力上起到重要作用[10]。研究表明，OCT4具有雙重調節作用，既能維持干細胞的未分化狀態，又能控制干細胞向某一種細胞類型分化。OCT4是1種全能性或多能性干細胞標記物，與多種腫瘤的形成與發展及化療耐藥相關。OCT4促進癌細胞生長、增值的機制可能是通過激活PI3K通路完成的[11]。PI3K通調控腫瘤生長的關鍵分子[12]。Bim 是1種重要的凋亡調節蛋白,在造血細胞的內環境穩定、 防止自身免疫及腫瘤的發生中有著重要的作用。一定的凋亡刺激能通過各種信號途徑激活Bim分子,活化的 Bim 分子通過與 Bcl-2/Bax 的相互作用激活 Bax,引起細胞凋亡[13-15].Bim蛋白是PI3K/AKT信號轉導通路中最重要的蛋白。AKT分子包含pH結構域、 中心催化結構域和羧基端調AKT1是AKT的亞型之一，定位于染色體14q32，具有廣泛組織分布性，能在胚胎發育和生長方面起決定性作用[16]。激活的AKT能對其下游多種底物進行調控，主要發揮抑制凋亡的作用，進而促進耐藥性的產生[17]。近年研究的表明，它在血管再生、 新陳代謝、 腫瘤遷移中的作用逐步被發現[18]。

本研究發現OCT4基因為癌基因，Bim基因為抑癌基因。OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發生、發展中成負相關。說明在OCT4與Bim蛋白表達通路上，存在某一基因共同調節它們的表達。為臨床預測和防止腫瘤的發生提供依據。OCT4基因高表達，Bim基因低表達可能是造成卵巢漿液性癌對紫杉醇+鉑類化療耐藥的因素之一，為臨床耐藥性提供預測指標。

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(編輯：吳小紅)

Studying of the Expression of OCT4 and BIM Protein in Ovarian Cancer and Their Correlation

ZHANGYongqi,WANGMin,ZHUYanli,etal.

ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,110004

【Abstract】ObjectiveTo study the expression of the OCT4 and BIM protein in ovarian cancer and their relation，and to explore its effect on the chemotherapy drug resistance.MethodsOCT4 and BIM protein expression of 67 cases of ovarian serous cystadenocarcinoma(chemotherapy drug resistance 30 cases,sensitive 37 cases)and 10 cases of ovarian serous cystic adenoma paraffin specimens,10 cases of ovarian serous border pouch adenoma paraffin specimens and 10 cases of normal ovarian tissue paraffin specimens were det ected.ResultsThe positive expression rate of OCT4 protein decreased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002);The positive expression rates of OCT4 protein in the resistant group and sensitive group were 83.33% and 45.95%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.002).The positive expression rate of BIM protein increased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002).In the resistant group and sensitive group,the positive expression rate of BIM protein were 43.33% and 70.27%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.026).In the chemotherapy drug-resistant ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression had no significant correlation with Bim protein expression(γ=0.03;P=0.875);In chemotherapy sensitive ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression and Bim protein expression had no obvious correlation(γ=0.006;P=0.97).OCT4 protein expression and Bim protein expression in ovarian serous carcinoma had negative correlation(P<0.01).OCT4 and Bim protein expression had no correlation with clinical factors.ConclusionOCT4 and BIM protein expression are associated with the occurrence and development of ovarian serous carcinoma.Bim and OCT4 protein expression are negatively correlated with the development of ovarian serous carcinoma.OCT4 and Bim protein expression are interacted in ovarian serous tumor occurrence and development.High OCT4 gene expression and low Bim gene expression may be factor of resistance of ovarian serous carcinoma to paclitaxel plus platinum chemotherapy.

【Key words】OCT4;Bim;Immunohistochemical;Ovarian cancer;Chemotherapy;Drug resistance;Sensitive

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.008

中圖分類號：R737.31

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)05-0723-04

(收稿日期2015-07-15修回日期 2016-01-05)