Fascin-1蛋白在結直腸癌中的表達及其臨床意義

孔凡良,胡麗霞,李成發,黃孟芹,蔣英俊,繆華緯,吳　燕,王鳳云

(安徽省合肥市第二人民醫院血液腫瘤科　230011)

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Fascin-1蛋白在結直腸癌中的表達及其臨床意義

孔凡良,胡麗霞,李成發,黃孟芹,蔣英俊,繆華緯,吳燕,王鳳云

(安徽省合肥市第二人民醫院血液腫瘤科230011)

[摘要]目的探討Fascin-1蛋白在結直腸癌中的表達及其臨床意義。方法采用免疫組化MaxVision 兩步法檢測87例結直腸癌和28例癌旁正常組織中Fascin-1 蛋白的表達情況，分析Fascin-1蛋白表達與結直腸癌臨床病理特征的關系。Kaplan-Meier和Cox回歸模型分析Fascin-1蛋白表達與結直腸患者生存的相關性。結果Fascin-1 在結直腸癌組織和癌旁正常組織中的陽性表達率分別為43.7%(38/87)和7.1%(2/28)，二者差異有統計學意義(P<0.05)。Fascin-1 蛋白表達在不同年齡、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移間差異均有統計學意義(P<0.05)，但是在不同性別、病理類型、腫瘤位置、分化程度間差異無統計學意義(P>0.05)；Kaplan-Meier分析顯示Fascin-1蛋白高表達組患者的總生存率明顯低于低表達組(P=0.009)。多因素Cox回歸分析表明Fascin-1蛋白高表達是影響結直腸癌患者預后的獨立危險因素(相對危險度[HR]=2.087，95%CI：1.196～3.642，P=0.010)。結論Fascin-1蛋白在結直腸癌組織中呈高表達，其與患者的遠期生存率相關。Fascin-1蛋白可能是影響結直腸癌患者預后的獨立危險因素。

[關鍵詞]Fascin-1；結直腸腫瘤；免疫組織化學；遠期生存率

Fascin-1蛋白的主要功能是與肌動蛋白結合，其在人類諸多腫瘤中表達上調，包括結直腸癌[1]。但目前對于Fascin-1蛋白的表達與結直腸癌患者的遠期生存率之間的確切關聯鮮有研究。本研究采用免疫組化法檢測結直腸癌組織和癌旁正常組織中Fascin-1的表達差異，并通過對患者的長期隨訪，對Fascin-1與患者的遠期生存率之間的關聯進行研究，進一步探討Fascin-1蛋白在結直腸癌中的表達及其臨床意義，以期對該病的治療及預后判斷提供科學依據。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2009年6月至2014年7月本院病理科診斷為結直腸癌的臨床與病理資料齊全的石蠟組織標本87份，患者術前均未接受過任何抗腫瘤治療。其中男46例，女41例；年齡36～77歲,中位年齡63歲。同時從距腫瘤至少3 cm處取相應癌旁組織28份，并經病理檢查確認無癌細胞浸潤，作為對照組。所有標本均用10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，經石蠟包埋，4 μm 連續切片采用免疫組化染色。

1.2主要試劑免疫組化試劑使用免疫組化濃縮型兔抗人Fascin-1單克隆抗體(cp-6848)購自德國Celplor公司，免疫組化檢測試劑盒為即用型快捷免疫組化MaxVision 試劑盒和DAB 顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3方法免疫組化染色方法參照使用說明書操作，采用MaxVision兩步法進行免疫組化染色，簡要步驟按如下操作：檸檬酸鈉緩沖液高壓抗原修復，切片中滴加Fascin-1一抗，4 ℃過夜，去除一抗后滴加二抗，然后試劑盒室溫下孵育20 min，用DAB顯色，蘇木精對比染色。Fascin-1在間質的表達為自身切片的陽性對照，PBS液取代一抗作陰性對照。

1.4結果判斷免疫組化以癌及癌旁細胞質中出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。免疫組化評定方法參考文獻標準[2-3]。按染色強度記分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按染色程度記分：無陽性細胞數為0分，陽性細胞數1%～25%為1分，>25%～50% 為2分，>50%～75%為3分，>75%～100%為4分。兩項相加得分(0～7分)，≥3分為高表達。

1.5隨訪截至最后隨訪時間2015年2月，全部患者中位隨訪時間為43.1個月(7～68個月)。患者總的生存時間定義為從手術之日起至末次隨訪或死亡之日。

1.6統計學處理采用SPSS16.0進行統計學分析。Fascin-1表達與各個臨床病理因素的分析采用χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier方法和Log-rank檢驗。Fascin-1表達與預后的關系采用單因素和多因素Cox回歸模型進行分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1Fascin-1蛋白在結直腸癌及癌旁組織中的表達和分布Fascin-1免疫組化染色在結直腸癌中主要定位于細胞質或細胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀，在結直腸正常組織中僅少量表達于細胞。87份結直腸癌組織中，38份(43.7%)Fascin-1 蛋白高表達，見圖1；28份癌旁組織中，2份(7.1%)Fascin-1 蛋白高表達，二者比較差異有統計學意義(χ2=12.465，P<0.05)。

A：癌旁正常組織；B：結直腸癌組織。

圖1結直腸癌組織及癌旁正常組織中Fascin-1蛋白的表達(×100)

2.2Fascin-1蛋白的表達與結直腸癌患者臨床特征的關系Fascin-1蛋白表達在不同年齡、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移間比較差異有統計學意義(P<0.05)；但是在不同性別、病理類型、腫瘤位置、分化程度間比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　結直腸癌中Fascin-1蛋白表達與臨床病理特征的關系

續表1　結直腸癌中Fascin-1蛋白表達與臨床病理特征的關系

2.3Fascin-1蛋白的表達與患者預后的關系對87例獲得隨訪結果的結直腸癌患者進行Kaplan-Meier生存分析，結果顯示Fascin-1蛋白低表達組患者的總生存率明顯高于高表達組，用Log-rank檢驗進行組間生存率檢驗結果顯示χ2=6.833，P=0.009，即Fascin-1蛋白高表達與結直腸癌預后不良有關(圖2)。經Cox比例風險回歸模型分析，單因素分析顯示，Fascin-1蛋白表達、遠處轉移與患者預后相關(P<0.05)，見表2。多因素Cox回歸分析，Fascin-1蛋白高表達是影響結直腸癌患者預后的獨立危險因素[相對危險度(HR)=2.087，95%CI：1.196～3.642,P=0.01]。

low：Fascin-1蛋白低表達；high：Fascin-1蛋白高表達。

圖2結直腸癌中Fascin-1蛋白表達與患者生存狀況的關系

表2　結直腸癌預后Cox模型分析

續表2　結直腸癌預后Cox模型分析

3討論

結直腸癌是全球第三大最常見惡性腫瘤，其死亡率在西方國家中位居第二[4]。結直腸癌在我國大城市其發病率也逐年升高，已躍居癌癥死亡率的第三位[5]。近十年來隨著手術技術的改進，以及化療方案的不斷更新，對于結直腸癌的治療雖取得了重要的進展，但由于多數結直腸癌患者在行根治性手術時已發生微轉移，以及患者對化療藥物產生耐藥等的出現，復發和轉移的結直腸癌往往難以治療，使得患者的總生存率并沒有顯著改善[6]。因此，尋找更有效的生物標志物預測結直腸癌患者預后仍是目前治療的重點[7]。在這些標志物分子中，Fascin參與形成以肌動蛋白為基礎的細胞組織結構，包括皮質細胞突起(如絲狀偽足、樹突和微絨毛等)和胞質微絲束[8]。腫瘤細胞侵襲表型的一個重要標志是絲狀偽足這一感覺細胞器的豐富性表達。體內和體外實驗同時表明絲狀偽足的形成的關鍵因素之一是肌動蛋白纖維的有效聚合[9]。Fascin-1是目前惟一已知的定位在整個絲狀偽足上的肌動蛋白結合蛋白，通過siRNA干擾其缺失后則導致絲狀偽足的持續性減少[9]。此外一些研究表明Fascin-1能夠顯著增加細胞遷移[10-11]。因此，Fascin-1可能促進細胞遷移參與絲狀偽足的形成。人類Fascin-1 基因在1994 年被克隆，其染色體位于7q22，該基因編碼分子量為5.5×104ku 的細胞骨架蛋白，其主要作用就是與F-肌動蛋白結合。Fascin-1蛋白的第39位的絲氨酸是蛋白激酶C(PKC)的磷酸化位點，磷酸化后的該位點可調節Fascin-1蛋白與F-肌動蛋白的結合活性，抑制Fascin-1肌鈣蛋白的組裝功能并影響到細胞膜表面偽足和微棘的形成[12]。

既往的研究發現，Fascin-1蛋白在成人的上皮組織中低表達或不表達，在許多上皮來源的(如肺癌、卵巢癌、胃癌及食管癌等)腫瘤細胞系及腫瘤組織中表達明顯上調[13]，并可能與腫瘤侵襲及轉移有關。本研究中在28份正常結直腸黏膜標本中有2份(7.1%)Fascin-1 蛋白呈高表達，在87份結直腸癌標本共38份(43.7%)Fascin-1蛋白呈現高表達，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。本結果顯示，結直腸癌患者腫瘤組織中的Fascin-1蛋白表達明顯高于癌旁組織，提示組織中Fascin-1蛋白的高水平表達可能在結直腸癌的發生和發展過程中發揮著重要作用，這與文獻[1]的研究一致。進一步分析Fascin-1蛋白的表達與結直腸癌患者臨床特征的關系發現，Fascin-1蛋白表達在不同性別、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移間比較差異有統計學意義(P<0.05)，表明Fascin-1蛋白的表達與結直腸癌生長、TNM分期和遠處轉移具有相關性。

近年來發現，Fascin-1蛋白表達與一些非結直腸癌患者的預后不良和(或)低的生存率呈正相關[14-15]，這與本研究結果一致。本研究通過長期隨訪，進一步探討了Fascin-1蛋白表達與結直腸癌患者的遠期生存率之間的關聯。隨訪資料的Kaplan-Meier分析、單因素Cox回歸分析及多因素Cox回歸分析顯示Fascin-1蛋白表達與結直腸癌的預后有關，Fascin-1蛋白高表達提示患者預后差，因此Fasin-1蛋白表達可作為結直腸癌預后的指標之一。另外，單因素及多因素Cox分析顯示遠處轉移與預后相關，說明遠處轉移狀態是影響結直腸癌預后的重要因素，提示早期診斷、早期干預能夠提高患者的生存率。

本研究證實Fascin-1蛋白在結直腸癌組織中呈高表達，與結直腸癌的遠期生存率相關，其可能成為結直腸癌的預防及治療提供新的靶點。

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The expression of Fascin-1 in colorectal cancer and its clinical significance

Kong Fanliang,Hu Lixia,Li Chengfa,Huang Mengqin,Jiang Yingjun,Miao Huawei,Wu Yan,Wang Fengyun

(Department of Hematology and Oncology,the Second People′s Hospital of Hefei,Hefei,Anhui 230011,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of Fascin-1 in colorectal cancer (CRC) and its clinical significance.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin-1 in 87 CRC tissues and 28 para-cancer tissues,and analyzed the expressions of them and the relations to clinicopathologic characteristics.Kaplan-Meier plots and Cox proportional hazards regression model were used to analyze the prognostic value of Fascin-1 expression.ResultsThe positive rates of Fascin-1 expression in CRC tissues and para-cancer tissues were 43.7%(38/87) and 7.1%(2/28) respectively,with significant difference (P<0.05).Fascin-1 expression was correlated with age,TNM staging,regional lymph node metastasis and distant metastasis,with significant difference (P<0.05),whereas it was not correlated with gender,tumor location,pathologic differentiation and pathology type,with no statistical difference(P>0.05).In the Kaplan-Meier analysis,patients with Fascin-1 over-expression had significantly shorter overall survival than those patients with negative Fascin-1 expression (P=0.009).Multivariable analysis by Cox regression model further showed that Fascin-1 over-expression was a significantly independent predictor of poorer overall survival (HR=2.087;95%CI:1.196-3.642,P=0.010).ConclusionThe expression of Fascin-1 is high and its related to the long-term survival time of patients with CRC.It is an independent prognostic factor for CRC.

[Key words]Fascin-1;colorectal neoplasms;immunohistochemistry;long-term survival time

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.023

作者簡介：孔凡良(1963-)，副主任醫師，本科，主要從事血液腫瘤方向研究。

[中圖分類號]R73-31

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)11-1519-03

(收稿日期：2015-10-26修回日期：2016-01-10)