熒光原位雜交法應用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義

吳穎虹 王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨

熒光原位雜交法應用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義

吳穎虹 王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨

目的 探討熒光原位雜交法(FISH)應用于胃癌Her-2基因檢測及其臨床意義。方法 選取54例胃癌組織標本，采用免疫組化法(IHC)及FISH對標本中胃癌Her-2蛋白表達與基因擴增情況進行測定，并比較測定結果。結果 （1）FISH測定結果：14例表現為標本擴增，40例表現為標本無擴增，Her-2基因擴增率為25.93%；（2）IHC測定結果：10例Her-2表達為+++，8例Her-2表達為++，16例Her-2表達為+，20例Her-2表達為0，Her-2蛋白表達率為18.52%；（3）擴增符合率：Her-2蛋白表達為0時，Her-2擴增符合率為5.00%；Her-2蛋白表達為+時，Her-2擴增符合率為6.67%；Her-2蛋白表達為++時，Her-2擴增符合率為37.50%；Her-2蛋白表達為+++時，Her-2擴增符合率為90.00%；總符合率為25.93%，且呈現為正相關（P＜0.05）。結論 在胃癌篩查中，可將IHC作為初步篩查手段，而針對晚期胃癌患者則建議行FISH檢測，以便進一步了解Her-2基因狀態，為臨床靶向治療提供明確信息。

胃癌；Her-2基因；熒光原位雜交法；免疫組化法

胃癌是近幾年來發病率較高的一種腫瘤疾病，并以每年新發

100余萬的速度遞增，而在新發病例中超過42%的病例為中國病例，加之其較高的死亡率，如今，我國已成為了胃癌發病率和死亡率均較高的國家[1]。隨著對胃癌發病原因、機制等研究的深入，人類表皮生長因子受體2（Her-2）隨之成為了胃癌靶向治療的新焦點，Her-2是位于人類染色體17q12-21.3上的原癌基因，是表皮生長因子受體（EGFR）家族中非常重要的成員之一，其在細胞分化、生長以及增殖中均有參與，為此，Her-2基因表達有無表達，直接關系著胃癌靶向治療藥物的選擇，特別是靶向性基因治療。故對胃癌Her-2基因進行測定，了解其表達情況，對臨床治療、預后判斷有著重要意義。鑒于此，本科室在課題研究中，采用免疫組化法(IHC)及熒光原位雜交法(FISH)對胃癌Her-2基因進行測定，并分析其臨床意義。現將有關情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究胃癌組織標本均來自江西省景德鎮市第二人民醫院2013年1月～2015年12月接診的54例胃癌手術患者，其中女21例，男33例，患者年齡55～73歲，平均年齡（65.23±2.15）歲。所有患者術前均未行放化療治療。

1.2 方法

1.2.1 FISH 取17號染色體著絲粒（CEP17），可將其標記為綠色，并將Her-2基因標記為紅色。具體操作步驟為：取組織切片，依次對其進行脫蠟，無水酒精中室溫10min去除二甲苯，梯度酒精脫水后，純化水煮沸處理20min，室溫晾干，在37℃條件下，行200mg/L胃蛋白酶反應，持續消化進行5～15min，多次SSC洗滌，再依次梯度酒精脫水，向其中加入探針混合液

10μL，85℃雜交儀行5min變性處理，37℃環境下行過夜雜交處理。采用0.3%NP-40/0.4×SSC66℃處理1min，采用

0.11 %NP-40/2×SSC室溫環境下行1min處理，采用乙醇進行3min洗片處理，對其進行干燥處理，放置到10μLDAPI復染劑中進行復染處理，封片，靜置于避光處，20min后取出，放置于熒光顯微鏡下觀察。

1.2.2 IHC 取胃癌病理組織標本，采用中性甲醛固定，行常規石蠟包埋處理，切片，厚度4μm，運用IHCEliVision Plus二步法行染色處理，放置于高倍顯微鏡下觀察10個視野，并將Her-2蛋白表達定位在細胞膜，陽性反應物呈現為棕黃色顆粒狀。

1.3 評價標準

1.3.1 FISH評價標準 經熒光顯微鏡下對60個細胞進行計數，并對Ratio值進行統計，若Ratio值低于1.8即可視為陰性，這表明該樣本并不存在Her-2基因擴增；若Ratio值控制在1.8～2.2范圍內，則將細胞計數增加到100個或者再次進行FISH實驗，并根據結果進行判定；若Ratio值超過2.2即可視為陽性，這表明該樣本中存在Her-2基因擴增；若觀察發現，紅色信號點呈現為成簇擴增，同樣也表明該樣本為Her-2基因擴增陽性。

1.3.2 IHC評價標準 （1）0/陰性：細胞膜均未染色或者＜10%腫瘤細胞膜染色；（2）+/陰性：腫瘤細胞超過10%，細胞膜表現不完整，且呈現為弱染色；（3）++/不確定：腫瘤細胞超過10%，細胞膜表現輕度到中度完整；（4）+++/陽性：腫瘤細胞超過10%，細胞膜表現非常完整，且呈現為強染色。

1.4 統計學方法 本研究數據均以統計學軟件SPSS15.0進行分析處理，運用Kendall行相關性分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FISH檢測結果 54例胃癌患者胃癌組織中，14例表現為標本擴增，40例表現為標本無擴增，Her-2基因擴增率為25.93%（14/54）。

2.2 IHC檢測結果 54例胃癌患者胃癌組織中，10例標本測定結果Her-2表達為+++，8例標本測定結果Her-2表達為++，16例標本測定結果Her-2表達為+，20例標本測定結果Her-2表達為0，Her-2蛋白表達率為18.52%（10/54）。

2.3 FISH與IHC測定結果比較 Her-2蛋白表達為0時，Her-2擴增符合率為5.00%(1/20)；Her-2蛋白表達為+時，Her-2擴增符合率為6.67%(1/15)；Her-2蛋白表達為++時，Her-2擴增符合率為37.50%；Her-2蛋白表達為+++時，Her-2擴增符合率為90.00%。兩種方法檢測結果總符合率為25.93%（14/54），且呈現為正相關（r=0.761，P＜0.05）。見表1。

表1 FISH基因擴增與IHC蛋白表達擴增結果比較（n）

3 討論

隨著醫學技術的快速發展，分子生物學技術也日漸成熟，并在生命科學領域得到了廣泛運用，在幫助人類進一步了解細胞生活活動中發揮了重要作用[2]。隨著對細胞生長、分化、增殖以及癌變等認識的逐漸深入，關于參與其變化的調節分子機制的研究也隨之增多，這使得本研究從更新的角度和層面了解胃癌的病變和發展過程，同時也將分子生物學技術逐漸發展到了腫瘤臨床診斷、預后判斷等方面[3]。

自1987年首次報到Her-2過表達的預后意義以來，Her-2基因成為了臨床應用較為廣泛的腫瘤標記物[4]。當人體Her-2基因呈現為大量擴增時，必然會導致蛋白產物P185呈現為過表達，從而致使Her-2受體異源二聚體形成數量快速增多，致使細胞內酪氨酸激酶的活性呈現為快速增多，并致使酪氨酸自身磷酸化，致使多種信號轉導途徑快速激活，出現細胞大量增殖的情況，引起癌變反應[5]。在卵巢癌、肺腺癌以及乳腺癌等惡性腫瘤疾病中，Her-2蛋白或者基因擴增均呈現為過表達。有文獻報道表示[6]，在胃癌中，Her-2基因擴增陽性率為7.1%～42.6%，而過表達率為6.8%～34%。而Her-2基因非常容易接近抗體，故將其作為腫瘤免疫治療靶位是目前學界公認觀點。

目前，在Her-2檢測中，主要采用FISH與IHC兩種方法，其中IHC由于其操作簡單方便，且成本低廉，同時通過顯微鏡能夠觀察到腫瘤組織中Her-2陽性變化，故被視為Her-2檢測的首選方法。但IHC在檢測中極易受到各方面因素的干擾，并且方法相對較為間接，故其準確性和穩定性有待進一步考察[7]。FISH是一種分子遺傳學檢測技術，作為分子生物學技術中逐漸成熟起來的新技術，FISH是一種用于胃癌診斷的分子水平分析技術，其主要通過細胞表型、組織病理學和基因型三方面的結合，來實現對腫瘤疾病的診斷，具有較高靈敏度、準確性和穩定性，其測定結果更為客觀[8]。根據本研究結果顯示，FISH檢測Her-2基因擴增率為25.93%，該結果表明，FISH在Her-2基因擴增陽性率明顯更高，且呈現為正相關。

綜上所述，在胃癌Her-2狀態篩查中，FISH與IHC均具有一定的臨床應用價值，能夠客觀、準確地反應出Her-2狀態，但實際運用中，建議將IHC作為初步篩選方法，針對晚期胃癌患者則建議采用FISH作進一步檢查。

[1] 陽帥，張小麗，李亞菲，等.胃癌中HER2蛋白表達及基因擴增的臨床意義[J].慢性病學雜志，2015，16（3）：277-280.

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[3] 趙亞娟，劉海芳，朱獻斐，等.胃腺癌組織HER-2/neu基因表達及其臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志，2010，16（5）：357-359.

[4] 李明新，于忠和，范晉楠.實時熒光PCR檢測胃癌石蠟組織中Her-2表達的研究[J].醫學綜述，2012，18（9）：1418-1420.

[5] 鐘山，余英豪，黃紅浪，等.熒光原位雜交法對胃癌組織HER-2基因狀態的檢測[J].世界華人消化雜志，2011，18（2）：132-137.

[6] 蘇靜，楊郁，馬曉龍，等.熒光原位雜交檢測乳腺癌人表皮生長因子受體2基因擴增及與臨床病理特征的關系[J].北京大學學報(醫學版)，2011，52（2）：199-203.

[7] 眭維國，歐明林，陳潔晶，等.熒光原位雜交法與免疫組織化學法檢測乳腺癌HER-2基因擴增及蛋白表達的對比研究[J].實驗與檢驗醫學，2010，27（1）：16-18，46.

[8] 何中元，王桂芝，秦文華.胃癌組織HER-2基因的檢測用于靶向治療[J].醫藥論壇雜志，2014，34（9）：36-37.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.22.011

景德鎮市級科技計劃項目（20152SFZC050）

江西 333000 江西省景德鎮市第二人民醫院病理科 （吳穎虹王仁杰 柳萬江 賈志紅 張玨）

王仁杰 E-mail：wlj3526@126.com