藿芪灌注液局部刺激性試驗

王東升+張世棟+苗小樓+董書偉+魏立琴+鄺曉嬌+那立冬+閆寶琪+嚴作廷

摘要：為了評價藿芪灌注液的刺激性，為臨床安全用藥提供依據，采用眼睛刺激性和陰道黏膜刺激性試驗進行局部刺激性研究。眼睛刺激性試驗選擇家兔5只，以左眼為對照結膜囊內滴入生理鹽水0.1 mL，右眼結膜囊內滴入藿芪灌注液0.1 mL，給藥后觀察7 d，考察藿芪灌注液對家兔眼睛的刺激性。陰道黏膜刺激性試驗選擇家兔10只，隨機分為試驗組和對照組，試驗組家兔陰道灌注藿芪灌注液2 mL，對照組家兔陰道灌注生理鹽水2 mL，給藥后24 h處死家兔，對家兔陰道進行病理組織學檢查，評價其對家兔陰道黏膜的刺激性。結果表明，藿芪灌注液對家兔眼睛和陰道黏膜無刺激性，說明藿芪灌注液無刺激性。

關鍵詞：藿芪灌注液；刺激性；陰道；眼睛；家兔

中圖分類號： S858.237.2

文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）04-0303-02

不孕癥是奶牛常見的四大疾病之一，由卵巢疾病引起的不孕癥占35%～55%[1]，有些地區高達78.5%，而且57.3%為持久黃體和卵巢靜止[2]。近年來，奶牛不孕癥尤其是由卵巢疾病引起的不孕癥的發病率呈上升趨勢[3-4]。奶牛卵巢疾病常引起奶牛受胎率下降，造成的經濟損失巨大[5]。目前，治療奶牛卵巢疾病引起的不孕癥主要以激素為主，中藥具有療效確切、無殘留、毒副作用小等優點，對卵巢性不孕癥的療效好，值得開發利用[6]，雖然我國學者已研制出許多中藥制劑，但廣泛用于獸醫臨床的卻甚少[7-9]。藿芪灌注液，別稱催情助孕液，是由淫羊藿、陽起石、丹參等中藥組成的子宮灌注劑，臨床上主要用于治療奶牛卵巢靜止和持久黃體。研究表明，該制劑工藝穩定[10]，能提高雌性小鼠機體雌激素水平和雌孕激素受體基因的表達量，能增強動物發情調節作用[11]。為了研究制劑的局部刺激性，進行藿芪灌注液的家兔眼睛和陰道黏膜刺激性試驗，為該制劑在臨床上的安全應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康新西蘭家兔，15只，無任何眼部疾病，體質量1.7～2.3 kg，由中牧實業股份有限公司蘭州生物制藥廠提供。

1.2 試驗藥品

藿芪灌注液，北京中農勁騰生物技術有限公司生產的中試產品，規格為1 mL相當于原生藥1 g，批號為20121001。

1.3 試驗方法

1.3.1 眼睛刺激性試驗 選取眼睛無異常的家兔5只，右眼結膜囊內滴入0.1 mL藿芪灌注液，左眼結膜囊內滴入 0.1 mL 生理鹽水作為對照，輕輕拉動下眼瞼，使藥液與眼球充分接觸8～10 s，于滴眼前和滴眼后30、60、90、120 min，24、48 h和第7天，觀察記錄雙眼的局部反應情況，主要觀察家兔雙眼角膜是否混濁，虹膜有無充血、出血和腫脹，瞳孔對光有無反應，結膜有無充血、水腫和流分泌物等。按眼刺激反應評分標準對角膜、虹膜及結膜分別進行評分，總和作為綜合評分，計算平均值，對家兔的左右眼評分進行比較，按眼刺激性評價標準作出判定。即0～3.9分為無刺激性，4～8.9分為輕度刺激性，9～12.9分為中度刺激性，13～16分為強度刺激性[12]（表1）。

1.3.2 陰道黏膜刺激性試驗 參照文獻[13]方法。試驗前先檢查家兔陰道口有無充血、水腫、炎癥、分泌物或其他損傷，選取陰道無異常雌性家兔10只，隨機分為2組，每組5只。試驗組將2 mL藿芪灌注液輕輕注入家兔陰道內，保持家兔倒立5 min，使藥液與陰道黏膜充分接觸；對照組同法灌注生理鹽水。24 h后處死家兔，取出陰道組織，觀察黏膜有無充血、出血、紅腫等現象，將陰道組織在10%福爾馬林中固定，做石蠟切片，HE染色，進行病理組織學檢查。

2 結果與分析

2.1 眼睛刺激性試驗

從表1可見，給藥后30、60、90 min家兔眼刺激性反應得分右眼分別為0.6、0.4、0.2，左眼分別為0.4、0.2、0，左、右眼分別在60、90 min內結膜有輕微充血現象，120 min 內恢復正常，按眼刺激性評價標準，藿芪灌注液對家兔眼睛無刺激性。

2.2 陰道黏膜刺激性試驗

24 h后處死家兔，取出陰道組織觀察，結果黏膜無充血、出血、紅腫等現象。陰道組織病理學檢查，黏膜上皮完整，黏膜層、肌層結構清晰，上皮細胞形態正常，無炎性細胞浸潤，血管無充血和水腫，表明藿芪灌注液對家兔陰道黏膜無刺激性（圖1至圖4）。

3 結論與討論

藿芪灌注液對家兔眼睛刺激性和陰道黏膜刺激性試驗表明，藿芪灌注液無刺激性。刺激性是非口服給藥制劑對給藥部位產生的炎癥反應或組織損傷。局部刺激性試驗是考察動物的血管、肌肉、皮膚、黏膜等部位接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應。目前，國際上最常用的家兔眼刺激性試驗為Draize眼部刺激試驗法，常以此為基礎進行單次、多次和持續性刺激試驗，以便全面研究滴眼劑等制劑的刺激性[14]。為此，本試驗先進行了家兔的眼刺激性試驗，通過對試驗家兔7 d的觀察和綜合評分表明，藿芪灌注液對家兔眼睛無刺激性。陰道黏膜既是一道抵御病菌感染的天然屏障，又是長期與細菌、病毒等接觸而成為多種致病因素進入體內的部位，通過陰道刺激性試驗，對與陰道黏膜接觸的物品進行安全性檢驗極其重要[15]。家兔陰道對刺激的敏感性高，符合安全性評價的試驗目的，也是美國食品藥品管理局確定的陰道刺激性試驗的試驗動物，而且操作相對簡便、經濟。試驗中應以組織病理學檢查結果為主要診斷依據進行綜合判斷。藿芪灌注液的給藥方式是子宮灌注，子宮內膜是由黏膜組織構成的。因此，本試驗在對家兔眼睛刺激性試驗研究的基礎上，利用陰道黏膜刺激性試驗進一步評價藿芪灌注液的刺激性，考察陰道黏膜接觸藿芪灌注液后黏膜的充血、炎癥反應等情況，結果藿芪灌注液對家兔陰道黏膜無刺激性，這為該制劑的臨床安全應用提供了依據。

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