自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性

梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明

自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性

梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明

目的 分析自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性。方法 選取26例慢性移植物腎病患者，患者均自愿接受自身骨髓間充質干細胞治療。觀察治療后不良反應，對比治療前、治療后1周、4周、8周、12周時血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、內生肌酐清除率（Ccr）、24h尿蛋白等指標的變化。結果 治療后患者不良反應發生率為30.77%。治療后1、4、8周時患者Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統計學意義,其中，治療前Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白分別為（211.37±48.22）μmol/L、（14.48±4.12）mmol/L、（38.65±9.26）mL/min、（885.69±212.34）mg，治療后12周分別為（215.45±51.62）μmol/L、（14.52±4.20）mmol/L、（38.34±8.93）mL/min、（891.24±205.58）mg。結論 采用自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病可獲得腎功能的改善，不良反應以發熱、瘙癢為主，未見出血、動脈栓塞、假性動脈瘤等嚴重并發癥。

慢性移植物腎??；自身骨髓間充質干細胞；安全性；可行性

腎臟移植是目前臨床治療終末期腎病的有效方法，但腎臟移植后的并發癥是影響移植腎存活時間的常見原因，其中慢性移植物腎病是給患者帶來了較大的困擾。如何延緩慢性移植物腎病的發展、改善移植腎功能一直是臨床工作研究的重點。骨髓間充質干細胞是一種低免疫原性干細胞群，具有易獲取、易擴增、易保存等優點，可誘導免疫耐受、降低免疫反應、促進損傷修復[1]。本研究分析自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年5月～2014年4月26例慢性移植物腎病患者，男18例，女8例；年齡35～60歲，平均（48.12±10.24）歲；體質量51～76kg，平均（63.25±11.43）kg。

患者均為首次接受腎臟移植，在腎臟移植6個月后出現腎功能進行性減退。實驗室檢查結果提示Scr、BUN、24h尿蛋白水平高于正常值。彩色多普勒超聲檢查結果提示移植腎血管阻力指數（RI）＞0.7。移植腎穿刺活檢結果提示發生間質纖維化、腎小管萎縮、腎小球硬化、細胞外基質沉積等病理改變。

1.2 方法

1.2.1 自身骨髓間充質干細胞的制取 患者在簽署知情同意書后接受骨髓穿刺術，抽取自身骨髓50mL，置于低分子肝素鈉抗凝的無菌離心管中，采用適量PBS稀釋后加入裝有淋巴細胞分離液的離心管中，以2000r/min轉速離心20min。吸取單個核細胞層，采用PBS洗滌，以1100r/min轉速離心4min，棄去上清液。沉淀物采用L-DMEM完全培養液重懸，接種于培養瓶，于

37℃的CO2孵箱中孵育。待克隆中細胞完全融合后采用PBS洗滌2次，加入0.25%胰酶消化，取細胞懸液置入離心管內，以1∶3傳代培養。將培養的細胞行常規行病原學檢測，移入液氮罐凍存[2]。

使用前進行復蘇，并進行乙肝抗原、抗體、丙肝抗原、抗體、梅毒、HIV、抗結核抗體-IgG、抗巨細胞病毒抗體-IgM、EB抗體、肺炎支原體、細菌、真菌等病原學檢測和骨髓間充質干細胞的鑒定[3]。

采用Seldinger法自股動脈插入導管，行移植腎動脈造影。插管至移植腎動脈，注入骨髓間充質干細胞，注入量為5×106個/ kg，采用無菌生理鹽水稀釋至20mL。首次輸注骨髓間充質干細胞時不調整神經鈣蛋白阻滯劑類免疫抑制劑的用量[4]。

在首次輸注后1周、4周時經外周靜脈第2次、第3次輸注骨髓間充質干細胞，輸注量為1×106個/kg，采用無菌生理鹽水稀釋至50mL，于30min內緩慢泵入，輸注前靜脈推注地塞米松5mg[5]。

1.3 統計學方法 應用SPSS18.0統計學軟件進行分析，計數資料以百分數和例數表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不良反應分析 26例患者治療后共發生不良反應8例，其中發熱3例、皮膚瘙癢5例，不良反應發生率為30.77%。

2.2 腎功能指標分析 治療后1、4、8周時患者Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統計學意義。見表1。

表1 治療前后腎功能指標比較（n=26，x±s）

3 討論

自身骨髓間充質干細胞具有免疫抑制和組織重塑的特性，在免疫相關性疾病的治療中應用較廣泛。使用自身骨髓間充質干細胞治療移植物抗宿主病具有一定的治療價值[6]。

初次輸注時在數字減影動脈造影引導下經移植腎動脈輸注自身骨髓間充質干細胞可使其更有效地分布于移植腎，避免經靜脈輸注干細胞到達移植腎細胞數量少的缺點，同時不會引起動脈血栓、感染等不良反應[7-8]。但反復進行有創操作會增加患者痛苦，因此在后續第2次、第3次的治療中則采取靜脈輸注法。

本研究結果顯示，患者治療后1、4、8周時Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，這一結果提示采用自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病可獲得腎功能的改善，可行性滿意。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統計學意義，這一結果提示采用自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的長期效果還有待研究。治療期間不良反應為30.77%，以發熱、瘙癢為主，未見出血、動脈栓塞、假性動脈瘤等嚴重并發癥，這一結果提示采用自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性滿意。

[1] 馬帥軍，李智斌，張更，等.慢性移植物腎病的致病因素分析及診治現狀[J].器官移植，2010，1（5）：314-317.

[2] 張磊，陳正，謝斯盛，等.自身骨髓間充質干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性[J].中國組織工程研究，2014，18（32）：5140-5145.

[3] 董秀娟，周凱，焦雪麗，等.異基因造血干細胞移植后膜性腎病1例[J].中國組織工程研究，2012，16（6）：1046-1049.

[4] 黃湘華，秦衛松，張明超，等.移植物抗宿主反應與造血干細胞移植術后膜性腎病[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2010，19（2）：103-110.

[5] 錢葉勇，石炳毅，王科，等.慢性移植物腎病患者外周血淋巴細胞細胞因子表達的研究[J].器官移植，2013，4（1）：19-22.

[6] 李華偉，楊劍英，王京祥.間充質千細胞治療腎移植患者移植物腎病1例[J].中國藥物經濟學，2013，1（5）：407-409.

[7] 余鵬程.供者骨髓間充質干細胞對大鼠腎移植慢性排斥的作用及其免疫調節機制的初步研究[D].南方醫科大學,2011.

[8] 王耀軍.骨髓間充質干細胞(BMSCs)對嵌合體形成及大鼠異體復合組織成活影響的免疫機制研究[D].第四軍醫大學,2013.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.29.026

湖南 418000 懷化第一人民醫院 （梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明）

夏智明 E-mail:781805907@qq.com