免疫比濁法測定D-二聚體抗脂濁能力

陜西省咸陽市第一人民醫院檢驗科(咸陽 712000)

薛　偉

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·臨床檢驗·

免疫比濁法測定D-二聚體抗脂濁能力

陜西省咸陽市第一人民醫院檢驗科(咸陽 712000)

薛偉

摘要目的： 分析免疫比濁法測定D-二聚體及其抗脂濁的能力，了解該種方法的特點和脂血在其測定中的干擾程度。方法： 根據NCCLS文件，對免疫比濁法測定D-二聚體進行正確性實驗、血漿樣本測定和抗脂濁實驗。結果： 在D-二聚體水平<1.5μg/ml時D/C、D/3兩種檢測模式結果具有統計學差異(P?0.05)；乳糜1200濁度對D-D濃度的免疫比濁結果具有負干擾且濁度在1200～4800范圍內其負干擾成一次線性趨勢。 結論： 免疫比濁法測定D-二聚體具有較好的效果，但在樣本乳糜濁度較大時應充分考慮到甘油三酯對檢測結果的影響并采取措施進行校正以保證結果的準確性。

主題詞免疫法@D-二聚體 @抗脂濁能力

D-二聚體作為纖溶酶水解交聯纖維蛋白后形成的特異性降解產物，其高敏感和高預測性使得它成為體內高凝狀態和纖溶亢進、體內血漿凝血因子活化和纖維蛋白溶解系統作用啟動的首選分子標記物[1]。免疫比濁法作為測定D-二聚體血漿水平的檢測方法獲得了廣泛的應用[2]，但有研究表明此種方法易受脂血干擾。因此本研究根據NCCLS文件對免疫比濁法測定D-二聚體及其抗脂濁的能力進行了分析以了解該種方法的特點和血脂在其測定中的干擾程度。

材料與方法

1儀器與試劑選用法國Stago STA-R全自動血凝儀，配套D-二聚體試劑。

2分析樣本質控定值血漿為法國Stago公司生產的原裝正常和病理(STA-Liatest control N+P)質控血漿；患者血漿樣本根據實驗設計選取本院門診、住院患者及健康體檢者新鮮抗凝全血100例，血樣用3.2% 109mmol/L枸緣酸鈉抗凝，以3000r/min，離心10min分離出血漿。

3方法

3.1正確性實驗:根據NCCLS EP15-A2文件對于精密度評價的要求，使用N值和P值的質控定值血漿連續測定10次并計算均值，觀察結果是否在廠家提供的質控參考范圍內。

3.2血漿樣本測定:利用STAGO血凝分析儀的2種免疫比濁測量模式定量測量本研究收取的100份標本的D-二聚體水平。

3.3抗脂濁實驗：根據NCCLS EP7-A文件，將包含甘油三酯的干擾血漿按100%、80%、60%、40%和20%稀釋后與待測樣本血漿進行1∶9比例的混合，重復3次測定樣本的均值。

4統計學方法應用SPSS19.0進行統計學分析，分析方法包括t檢驗、線性回歸分析，P?0.05表示差異具有統計學意義。

結果

1正確度質控定值血漿經測定后，正常水平(N值)的均值為0.28μg/ml，病理水平(P值)的均值為1.98μg/ml，結果在廠家提供的質控參考范圍內，即N值0～0.5μg/ml，P值1.65～2.45μg/ml。

2血漿測定D/C模式對正常水平血漿的D-二聚體測定結果為0.71±0.091μg/ml，對病理水平血漿的D-二聚體測定結果為2.51±0.159μg/ml；用D/3模式進行檢測時，正常水平血漿的D-二聚體測定結果為0.31±0.038μg/ml，對病理水平血漿的D-二聚體測定結果為2.9±0.096μg/ml。以D-二聚體水平1.5μg/ml為界，對100例數據進行t檢驗，結果顯示，在D-二聚體水平<1.5μg/ml時兩種檢測模式的結果是有統計學差異的(t=8.46，P?0.05)，而D-二聚體水平>1.5μg/ml時兩種檢測模式的結果不具有統計學差異(t=0.22，P<0.05)，具體見表1。

表1　兩種檢測模式對兩水平D-二聚體的檢測結果

3抗脂濁實驗不同乳糜濃度對D-二聚體的測定結果為，對照樣本三次D-二聚體濃度分別為1.635、1.598和1.619μg/mL，均值為1.617±0.186；乳糜濁度為1200時，本三次D-二聚體濃度分別為1.529、1.438和1.517μg/mL，均值為1.495±0.049，乳糜1200濁度對D-D濃度的免疫比濁結果具有負干擾，具體結果見表2。根據研究結果，對不同乳糜濃度對D-二聚體測定的干擾影響進行回歸分析成一次線性趨勢，線性方程結果為：Y=1.596-0.0006694X。

表2　不同乳糜濃度對D-二聚體測定的干擾影響

討論

血漿D-二聚體是交聯纖維蛋白在纖溶酶作用下的降解產物，它在臨床上有著廣泛的應用[3]。測定血漿D-二聚體的方法目前應用最多的就是免疫比濁法[4]，它把D-D的單克隆抗體包被于乳膠顆粒上與樣本中的抗原特異性結合從而使濁度增加，通過測定濁度的變化就能獲得D-二聚體的濃度[5]。免疫比濁法具有高敏感性、較高特異性、較好陰性預測值、定量測量、快速穩定等優點，已被美國食品藥品管理局批準用于肺栓塞、深靜脈血栓性疾病排除診斷[6]。

本研究從正常和病理兩個水平的質控定值血漿進行正確度實驗，結果表明該方法的正確性較高；運用D/3、D/C兩種模式測定D-二聚體水平，結果顯示在D-二聚體水平<1.5μg/ml時兩種檢測模式的結果是有統計學差異的，而D-二聚體水平>1.5μg/ml時兩種檢測模式的結果不具有統計學差異；實驗結果表明乳糜1200濁度對免疫比濁法檢測有負干擾影響。隨著濁度的升高，當乳糜濁度<4800時，不同乳糜濃度對D-二聚體測定的干擾成線性回歸趨勢，線性回歸方程為Y=1.596-0.0006694X，提示用免疫比濁法測定D-二聚體時要考慮高血脂等患者脂濁對測定結果的影響。

免疫比濁法測定D-二聚體其結果可直接影響臨床疾病判斷，其中D/3模式為血凝分析儀的標準測定模式，而D/C模式是專業人員根據本院實際疾病情況設定的模式，主要用于標本的稀釋[7]。在實際檢測過程中，可以根據D-二聚體濃度，以1.5μg/ml為界，靈活選用兩種模式以充分利用儀器檢測特性、節約試劑成本[8]。此外，要考慮到乳糜對免疫比濁法測定D-二聚體的線性負干擾影響，通過完善標本采集運送及保存程序、嚴格甄別抗凝劑的選擇與運用、對高濁度樣本進行甘油三酯濃度檢測并對相應D-二聚體結果進行校正等方法減少脂濁對免疫比濁法測定D-二聚體濃度結果的影響。

參考文獻

[1] 官燕飛,彭建明,劉樹沅,等.STA-R凝血分析儀檢測D-二聚體的性能驗證[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(14):1875-1877.

[2] 馬升俊.免疫比濁法檢測血漿D-二聚體的性能評價[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(5):602-604.

[3] 張勇，吉海明，王芳云,等.急性冠脈綜合癥患者血清脂聯素、纖維蛋白原和D-二聚體的變化及臨床意義[J].陜西醫學雜志,2014,43(8):1044.

[4] 崔巍.從 D-二聚體檢測體系的變更談檢驗與臨床溝通[J].檢驗醫學,2015,30(4):311-313.

[5] 周靜,孫家瑜,孫加冠.五種D-二聚體檢測方法用于排除可疑靜脈血栓栓塞癥的臨床評價[J].四川大學學報：醫學版,2009,40(6):1078-1081.

[6] 許俊.膠乳凝集比濁法與熒光偏振免疫法檢測卡馬西平血藥濃度的相關性分析[J].實驗與檢驗醫學,2014,32(4):453-454.

[7] 封莉,吳興福,王鳳平.淺析提高免疫比濁法測定D二聚體的準確性[J].血栓與止血學,2012,18(5):224-226.

[8] 聶濱,陶天陸.應用 EP7-A2文件評價免疫比濁法測定 D-二聚體抗脂濁能力[J].檢驗醫學,2015,30(4):324-326.

(收稿：2015-11-28)

Evaluation on the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry

Department of Clinical Laboratory,the First People's Hospital of Xianyang(Xianyang 712000)

Xue Wei

ABSTRACTObjective：To analysis immune turbidimetric method determination of plasma D-dimer levels and the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry, in order to understand the characteristics and blood lipid in the determination of the degree of interference. Methods：According to NCCLS documents, use correct experiment, plasma sample determination and anti-lipid turbidity experiment on the immune turbidimetric method determination of D -dimer. Results： When the D-dimer levels <1.5μg/ml, the difference between detection mode D/C and detection mode D/3 are statistically significant difference (t=8.46,P< 0.05); chylous turbidity of 1200 has negative interference on the immune turbidimetric method determination of plasma D-D, when turbidity within 1200-4800, the scope of the negative interference show a linear trend. Conclusion：The immune turbidimetric method determination of D-dimer has a good effect, but if turbidity chyle is larger in sample, we should fully take into account the effects of hypertriglyceridemia on the test results and take measures to ensure the accuracy of the correction.

KEY WORDSImmunization@D-dimer@Anti-turbidity ability

【中圖分類號】R392

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.057