反相高效液相色譜法測定盤龍七中w(巖白菜素)*

張 韞，高蘇亞，唐一梅

(西安醫學院 藥學院，陜西 西安 710021)

盤龍七(RhizomaBergeniaeScopulosae)為虎耳草科巖白菜屬植物秦嶺巖白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang的根莖[1]，在陜西眉縣及秦嶺地區稱為盤龍七。盤龍七作為“太白七藥”之一[2]，具有滋補強壯、止血、祛痰止咳、補益脾胃、收澀固腸、利水活血、活血化瘀、祛風除濕、消腫止痛等功效[3]。通過對盤龍七進行提取、分離、純化及結構鑒定，確定巖白菜素(Bergenin)為盤龍七的有效成分之一[4]。巖白菜素屬于異香豆素類化合物，又名矮茶素，佛手配質，鬼燈檠素，Bergenit，Vakerint，Arolisicacid B，Cuscutin，Peltaphorin[5]，具有止咳祛痰、抗炎、護肝、抗潰瘍和提高免疫力等作用[6]。

采用高效液相色譜法測定巖白菜素已有文獻報道。由于文獻所用方法實驗操作較為復雜[7-8]，故作者提出一種操作簡便、重復性好、回收率高的測定盤龍七中巖白菜素含量的反相高效液相色譜法，為盤龍七這一陜西地方藥材的充分利用和質量控制提供實驗參考。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

盤龍七藥材：分別購自陜西鎮安縣、勉縣、戶縣藥材市場，經西安醫學院藥學院生藥教研室汪興軍老師鑒定為虎耳草科秦嶺巖白菜BergeniaScopulosaT.P.Wang；巖白菜素對照品：批號477907，質量分數98%，上海士鋒生物科技有限公司；乙腈、甲醇：色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司；其余試劑均為市售分析純；實驗所用水為超純水。

高效液相色譜儀：配置為P680四元泵、真空在線脫氣機、UVD170U紫外檢測器、Chromeleon數據處理軟件，美國戴安公司；KLZ-UV艾柯超純水機：成都唐氏康寧科技發展有限公司；KQ5200DE型數控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；R201L旋轉蒸發儀：上海申生有限公司；FW200A高速萬能粉碎機：北京科偉永興儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱Agilent TC-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-φ(磷酸)=0.2%溶液(體積比為10∶90)；UV檢測波長275 nm；流速1.0 mL/min；柱溫為室溫；進樣量為20 μL。在該色譜條件下，巖白菜素與盤龍七中其它成分得到較好的分離，無干擾，專屬性強，結果見圖1。

t/mina

t/minb圖1 巖白菜素對照品(a)和盤龍七供試品(b)色譜圖

1.2.2 對照品溶液配制

精密稱取巖白菜素對照品5.2 mg于10 mL容量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度；經0.45 μm微孔濾膜過濾，即得0.52 mg/mL儲備液，置于4 ℃冰箱備用。精密吸取儲備液0.2、0.4、0.6、1.0、1.2和2.0 mL于10 mL容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，配制成一系列濃度的對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液配制

取盤龍七藥材，于60 ℃下烘干，打成粗粉，過孔徑0.25 mm的篩網，稱取上述粉末約2 g置于具塞錐形瓶，加入16 mL體積分數50%乙醇溶液；采用超聲提取法，提取3次，每次30 min；將提取液分別抽濾，合并濾液，用旋轉蒸發儀濃縮至10 mL；精密移取1.0 mL于25 mL容量瓶，加甲醇稀釋，定容搖勻，經0.45 μm微孔濾膜過濾即得供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 方法學考察

根據《中國藥典》2015版(四部)藥品質量標準分析方法驗證指導原則，考察樣品的線性關系、精密度、重復性、加樣回收及含量測定等。

2.1.1 線性關系考察

將上述對照品溶液按1.2.1項下色譜條件進行測定，以巖白菜素峰面積為縱坐標(Y)，巖白菜素對照品質量濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線，見圖2。所得線性回歸方程為Y=251.26X-1.368 6，相關系數r=0.999 7。結果表明ρ(巖白菜素)在1.04×10-2～0.104 mg/mL范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系。

ρ(巖白菜素)/(mg·mL-1)圖2 ρ(巖白菜素)的標準曲線圖

2.1.2 精密度實驗

配制ρ(巖白菜素)=0.052 mg/mL對照品溶液，按1.2.1項下的色譜條件重復進樣6次，測定色譜峰面積，得w(巖白菜素)，并計算RSD=1.8%，見表1，結果表明精密度符合要求。

表1 巖白菜素的精密度實驗(n=6)

2.1.3 重復性實驗

精密稱取同一批樣品粉末6份，每份約2 g，按1.2.3項下的方法制備6份供試品溶液，按1.2.1項下的色譜條件分別進樣，測定色譜峰面積，得w(巖白菜素)，并計算RSD=0.9%，見表2，結果表明重復性符合要求。

表2 巖白菜素的重復性實驗(n=6)

2.1.4 穩定性實驗

精密吸取同一供試品溶液，按1.2.1項下色譜條件分別于0、2、4、6、8和10 h進樣，測定色譜峰面積，并計算得RSD為1.3%，見表3。結果表明供試品溶液10 h內穩定，實驗應在巖白菜素穩定時間內完成。

表3 巖白菜素的穩定性實驗(n=6)

2.1.5 加樣回收實驗

取同一批樣品9份，約2 g，其中m(巖白菜素)=0.208 0 g，按1.2.3項下的方法制備供試品溶液，分別精密加入質量濃度為0.104、0.260和0.350 mg/mL對照品溶液，定容搖勻，按1.2.1項下的色譜條件分別進樣測定，計算得高、中、低3個濃度的平均回收率依次為101.1%、100.3%、101.0%，RSD為0.6%，見表4。結果表明該方法具有良好的回收率。

表4 巖白菜素的加樣回收實驗(n=9)

2.2 w(巖白菜素)測定

取陜西省3個產地的盤龍七藥材粉末各3份，每份約2 g，按1.2.3項下的方法制備供試品溶液，按1.2.1項下的色譜條件測定w(巖白菜素)，結果見表5。

表5 盤龍七中w(巖白菜素) (n=3)

3 結 論

采用反相高效液相色譜法測定了盤龍七中有效成分w(巖白菜素)。操作簡便、專屬性強、重復性好、回收率高、結果可靠，為陜西地方藥材盤龍七建立科學合理的質量控制方法提供了一定依據，為其進一步開發應用提供實驗參考。

參 考 文 獻：

[1] 馮永輝，李鵬，汪興軍，等．盤龍七中兒茶素的含量測定[J]．安徽農業科學，2011,39(28):17235-17236．

[2] 宋小妹，劉海靜．太白七藥研究與應用[M]．北京：人民衛生出版社，2011：82．

[3] 馮永輝，郭耀武，李蔓鷺，等．盤龍七的質量標準研究[J]．藥物分析雜志，2014,34(4):74-77．

[4] 崔瑩．盤龍七化學成分的研究(Ⅰ)[J]．中草藥，2012,43(9):1704-1707．

[5] 國家醫藥管理局中草藥情報中心.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛生出版社，1986:124．

[6] 劉海周，孫海林，李文軍，等．巖白菜中巖白菜素的純化及提取工藝研究[J]．云南中醫學院學報，2011,34(2):22-25．

[7] 馮永輝，賀利娜，張博，等．HPLC法測定盤龍七中巖白菜素的含量[J]．安徽農業科學，2011,39(26):15973-15974．

[8] 索建蘭，林宏領．HPLC法測定盤龍七中巖白菜素的含量[J]．陜西中醫，2011,32(3):353-355．