4種藥物對烏鱧的急性毒性研究

于振海 朱永安 孟慶磊 朱樹人 王錫榮

摘 要：采用半靜態試驗方法研究了在水溫（28.3±1.5）℃、pH（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L條件下，敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種魚藥對烏鱧魚苗的急性毒性試驗。結果顯示：4種藥物96 h半致死濃度以硫酸銅的最低，為1.586 mg/L；甲醛的最高，為115.159 mg/L；4種藥物毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛；4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）， 其中，敵百蟲、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規用量，按照常規用量進行病害防治是安全的。高錳酸鉀的安全濃度在常規用量范圍內，生產中可按照烏鱧對藥物的安全濃度進行病害防治。

關鍵詞：烏鱧；急性毒性；半致死濃度；安全濃度

中圖分類號：S948文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2016）05-0120-04

Abstract The acute toxicity of four kinds of drugs， dipterex， potassium permanganate， copper sulphate and formaldehyde， to larva of black-spot hybrid snakehead Channa argus were tested with the semi hydrostatic test method at the water temperature of （28.3±1.5）℃， pH of （8.01±0.12） and dissolved oxygen of （4.6±0.5） mg/L. The results showed that the median-lethal concentration （LC50） of copper sulphate for 96 hours was minimum of 1.586 mg/L， while that of formaldehyde was the highest of 115.159 mg/L. The toxicity of four drugs ranked in the order of copper sulphate， dipterex， potassium perman-ganate and formaldehyde. The safe concentration （SC） of four drugs ordered as formaldehyde （35.529 mg/L）， dipterex （1.450 mg/L）， potassium permanganate （1.277 mg/L） and copper sulphate （0.882 mg/L）. The SC of dipterex， formaldehyde and copper sulphate was higher than the conventional dosage， thus they were safe to be used to control corresponding diseases of Channa argus under the conventional dosage. The SC of potassium permanganate was in the conventional dosage range， so it could be used for disease prevention and control in accordance with the SC of Channa argus to drug in production.

Key words Channa argus； Acute toxicity； Median-lethal concentration （LC50）； Safe concentration（SC）

烏鱧（Channa argus）隸屬鱸形目鱧科鱧屬，俗稱有黑魚、孝魚、財魚、生魚 、蛇頭魚等[1]。烏鱧是一種適應性強，對不良水溫、水質及缺氧條件有較強耐受力，兇猛的肉食性名貴經濟魚類，在江河湖塘等自然生態環境中很少發病。隨著烏鱧人工高密度養殖的發展，烏鱧各種疾病頻頻發生，主要病害有細菌性疾病、真菌性疾病和寄生蟲性疾病，常見的有腐皮病、腹水病、水霉病、小瓜蟲病和車輪蟲病，常造成嚴重的經濟損失[2，3]。采用藥物進行病害防治是最直接、最有效和最經濟的辦法[4]，有關水產藥物對魚類急性毒性研究表明，魚的種類不同、規格不同對藥物的安全濃度都存在一定差異[5]。用藥過程中因對藥物的毒性不明、濃度使用不當而造成魚中毒的情況時有發生[6]。

提高自身抵抗力是降低烏鱧發病的選擇之一，通過良種繁育獲得的選育群體能夠提高烏鱧對病害的抵抗力。山東省淡水漁業研究院以微山湖烏鱧為基礎群進行選育繁殖獲得了健康苗種，為研究烏鱧選育群體對常用水產藥物的耐受性，保證選育群體的病害防治過程中合理用藥，安全用藥，開展了烏鱧選育群體的常用水產藥物的急性毒性試驗。試驗針對烏鱧常見病害，如水霉病、小瓜蟲病、車輪蟲病等，選擇4種常用藥物對烏鱧選育群體苗種進行急性毒性試驗，以獲得4種常用藥物的安全濃度和毒性等級，從而確定合適的藥物及用藥濃度。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚體長（5.6±1.1） cm，體重（4.2±0.7） g。身體健康，游泳活潑，無病、無傷、無畸形。在試驗條件下暫養3 d，每天投食1次，試驗開始前24 h停止投食。

試驗用藥、藥品規格及生產廠家等見表1。

1.2 試驗條件

試驗在規格60 cm×40 cm×40 cm的白色塑料箱內進行。時間為2015年9月7～18日，每個周期4 d。試驗用水為養殖場用深井水，水質符合漁業水質標準（GB11607-89），水溫（28.3±1.5）℃、pH值（8.01±0.12）、溶氧（4.6±0.5）mg/L。每箱盛水30 L，魚苗8尾，每日測一次水溫、pH值、溶氧。

1.3 試驗操作

采用半靜態試驗，參照盧玲等[7]的方法在室內進行。試驗期間不投餌，甲醛具有揮發性，為保證藥液質量濃度，每隔24 h 更換一次。試驗開始和結束時，測定試驗容器中受試物濃度。

1.3.1 預試驗 用以確定正式試驗所需濃度范圍。每個濃度組放入5條魚，用靜態方式進行，不設平行組，試驗持續48～96 h。每日至少兩次記錄各容器內的死魚數，并及時取出死魚。

1.3.2 正式試驗 根據預試驗得出的結果，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96 h魚類全部存活的最高濃度之間至少設置5個濃度組，以幾何級數排布，濃度間隔系數為2[8]。根據預試驗結果，得到的4種藥物正式試驗濃度（表2）。每個試驗濃度組設2個平行，每一系列設一個不投放藥物的空白對照。試驗溶液調節至相應溫度后，從馴養魚群中隨機取出魚并隨機迅速放入各試驗容器中。同一試驗，試驗用魚在30 min內分組完畢。

在24、48、72、96 h時檢查受試魚狀況，以試驗對象失去活力、對外界刺激無反應為死亡標準[9]。應在試驗開始后3 h或6 h觀察各試驗組魚苗的狀況，并記錄異常行為。

1.4 數據處理

半致死濃度（LC50）、安全濃度（SC）采用寇氏法計算[10]：

2 結果與分析

2.1 4種藥物對烏鱧魚苗的致死率

整個試驗過程中空白對照組沒有出現死魚現象，即致死率為零。敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅、甲醛4種藥物對烏鱧的毒性試驗見表3。

敵百蟲、高錳酸鉀、硫酸銅和甲醛的最低濃度組96 h致死率分別為25%、6.25%、0、0。敵百蟲和硫酸銅最高濃度組24 h致死率均為18.75%，高錳酸鉀和甲醛最高濃度組24 h致死率均為100%。4種藥物最高濃度組96 h致死率均為100%。高錳酸鉀7.905 mg/L濃度組 和14.057 mg/L濃度組24 h致死率都達到100%（表3）。

烏鱧在敵百蟲藥液中中毒癥狀表現為對外界刺激反應遲緩，上下游竄，逐漸失去平衡，最后死亡沉于箱底。烏鱧在高濃度敵百蟲藥液中開始時反應并不劇烈，隨著時間延長才逐漸出現中毒癥狀，中毒癥狀出現時間相對較晚。死亡的烏鱧體色發白，體表粘液增多。敵百蟲濃度為10.000 mg/L時，烏鱧約6 h出現中毒癥狀，約8 h開始死亡，24 h致死率為18.75%，48 h致死率為87.50%，96 h致死率為100%。濃度為1.000 mg/L時，烏鱧無明顯中毒癥狀，24 h和48 h致死率均為零，96 h致死率為25.00%（表3）。

烏鱧在高錳酸鉀藥液中的中毒癥狀表現為不安，反應比較劇烈，不停游竄，時而躍出水面，后趨于安靜，逐漸失去平衡，直至最后死亡。死亡后的魚體表皮破損，呈絮狀，顏色為紫黑色。高錳酸鉀濃度為25.000 mg/L時，魚苗約10 min即出現中毒癥狀，約0.5 h開始死亡，24 h致死率為100%。7.905、14.057、25.00 mg/L濃度組的24、48 h及96 h致死率均達到100%。2.500 mg/L濃度組24 h和48 h的致死率為零，約75 h出現死亡，96 h致死率為6.25%（表3）。

烏鱧在低濃度硫酸銅藥液中開始時無明顯反應，隨著時間延長逐漸表現出中毒癥狀，逐漸失去平衡，初期能夠自行恢復正常姿態，后期徹底失去平衡，沉于箱底。放入高濃度組中時，需要較長時才出現中毒跡象，反應出竄游不安，逐漸對外界刺激失去反應，最后失去平衡，沉于箱底。當硫酸銅濃度為5.000 mg/L時，約5 h出現中毒癥狀，約9 h開始死亡，24 h致死率僅為18.75%，48、96 h致死率均為100%。0.500 mg/L濃度組24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

烏鱧在高濃度甲醛藥液中表現為焦躁不安，來回游竄，出現浮頭現象，初期對外界刺激能做出反應，后期逐漸失去平衡，沉于箱底。死亡后魚體僵硬，鰓蓋擴張，口張開。低濃度組中烏鱧反應較為平靜，高濃度組反應劇烈，中毒癥狀很快就表現出來。試驗箱中甲醛濃度為300.000 mg/L時，約0.2 h開始出現中毒癥狀，約0.5 h魚苗開始死亡，24 h致死率達100%。191.683 mg/L濃度組24 h致死率也為100%。濃度為50.000 mg/L時，24、48 h和96 h致死率均為零（表3）。

2.2 4種藥物的半致死濃度（LC50）和安全濃度

根據式（1）和式（2）得到4種藥物的半致死濃度和安全濃度（表4）。敵百蟲和硫酸銅半致死濃度均為48 h>96 h>24 h，高錳酸鉀和甲醛半致死濃度均為24 h >48 h>96 h。4種藥物半致死濃度大小依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅。4種藥物的安全濃度大小依次為甲醛（35.529 mg/L）>敵百蟲（1.450 mg/L）>高錳酸鉀（1.277 mg/L）>硫酸銅（0.882 mg/L）。

3 結論與討論

3.1 4種藥物對烏鱧的毒性評價

半致死濃度（LC50）用來衡量藥物對試驗魚毒性的大小，其值越小，藥物毒性越大；其值越大，毒性越低[11，12]。以96 h 為魚類急性毒性分級標準，分為極高毒（<1 mg/L）、高毒（1～10 mg/L）、中毒（10～100 mg/L）和低毒（>100 mg/L）4個等級[8]。本試驗中4種藥物對烏鱧96 h LC50值依次為甲醛>高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸銅，按照藥物對烏鱧毒性大小依次為硫酸銅>敵百蟲>高錳酸鉀>甲醛。4種藥物中硫酸銅、敵百蟲和高錳酸鉀是高毒藥物，甲醛是低毒藥物。

4種藥物24、48 h和96 h致死率與濃度梯度均呈正相關，說明隨藥物濃度增加，藥物對試驗魚的毒性效應也相應增加。隨著試驗進行，魚苗24、48、96 h死亡率依次遞增，說明隨時間延長，4種藥物對試驗魚的毒性效應相應提高。

3.2 4種藥物對烏鱧的用藥安全

敵百蟲為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性點磷酸化而抑制其活性，因其在魚體內殘留量少、殘留時間短而被廣泛用于防治體外寄生甲殼類、單殖吸蟲及腸內寄生的部分蠕蟲，常用劑量為0.2 ～0.5 mg/L[13]。試驗中敵百蟲對烏鱧的安全濃度為1.450 mg/L，高于常用劑量，但其在毒性分級標準中屬高毒，在烏鱧魚苗養殖過程中可選用該藥物進行病害防治，但需精確控制用藥劑量和用藥時間，注意觀察，謹慎使用。

甲醛具有廣譜性殺滅細菌、寄生蟲、真菌、芽孢和病毒的作用，已被廣泛應用于水生動物疾病防治，且使用劑量較大，常規用量為10～30 mg/L[14]。試驗中，甲醛的安全濃度為35.529 mg/L，高于常規用量范圍，其毒性分級屬低毒，因此可以作為生產中病害防治藥物。甲醛使用成本較高，因此生產中一般用浸泡方式防治病害。

高錳酸鉀是一種常用的外用消毒藥物，具有很強的氧化性，一般作為消毒劑用來治療細菌、真菌、寄生蟲類等疾病和設施、工具的消毒，生產上常用遍灑濃度為1～2 mg/L[15] 。試驗中，高錳酸鉀對烏鱧的安全濃度為1.277 mg/L，處于常規用量范圍內，因此高錳酸鉀可以作為烏鱧養殖過程中病害防治藥物，但試驗過程中烏鱧對高錳酸鉀反應較為劇烈，所以注意控制使用劑量。

硫酸銅在生產中主要用于殺滅鞭毛蟲、車輪蟲、斜管蟲等寄生蟲，尤其對殺滅寄生于魚體體表及魚鰓的車輪蟲具有獨特作用[16]。硫酸銅常用潑灑濃度為0.5～0.7 mg/L[17]。試驗中，硫酸銅的安全濃度為0.882 mg/L，稍高于常規用量，因此硫酸銅可以作為烏鱧養殖過程中病害防治的藥物，但硫酸銅屬高毒藥物，使用時需注意觀察，謹慎使用。

4種藥物中敵百蟲、甲醛和硫酸銅的安全濃度要高于常規用量，按照常規用量進行病害防治是安全的，高錳酸鉀在常規用量范圍內，生產中可按照烏鱧對藥物的安全濃度進行病害防治。該結果與徐德平等[18]研究結果不一致，分析原因可能是試驗條件不同、魚苗體質規格差異、藥物有效成分含量以及試驗魚苗本身對藥物耐受性方面存在差異造成的，其中最主要的原因可能是烏鱧選育群體的魚苗對藥物有更強的耐受能力。在生產上選用藥物除了從藥物的半致死濃度和安全濃度上考慮之外，還需結合藥物的常用濃度及用藥時間綜合考慮。

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