不同培養基配方對云芝生長狀態影響的研究

云芝（Coriolus versicolor）狀似云彩狀，故名云芝。云芝有具有較強的保健治病作用，如能夠抑制肝炎病毒的生長、加速受損肝組織的修復、抗氧化、提高機體免疫功能、抑制某些腫瘤細胞的生長等。對云芝的藥理學研究表明：云芝提取物能提高 免疫細胞如NK 細胞、T 細胞、巨噬細胞、 LAK 細胞等殺傷病源微生物的能力，降低腫瘤細胞對免疫細胞的抑制作用。云芝在機體抗輻射能力和降低有害化學物對機體上損害方面也發揮了顯著的作用，它減輕放射性射線對骨髓的傷害，減輕腫瘤化療藥物環磷酰胺對機體的傷害程度，通過抑制腫瘤細胞 DNA和RNA 的合成實現抑制腫瘤生長的作用。目前云芝被廣泛用于臨床，如云芝肝泰等，因此大規模開發云芝能夠為一些以云芝作為原料的藥物和保健品提供原料。而云芝的生長常受各種條件的制約，因此本文通過制備出含有不同配比的花生和大豆的4種培養基，通過觀察云芝在4種不同培養基上的生長狀態，分別對云芝的生長狀態和生物量進行觀察和測定，綜合以上研究結果，最終確定適合云芝生長的培養基配方。

本研究從實際應用的角度，通過對云芝的生長狀態和生物量進行觀察和測定，，對云芝的培養基進行了研究，通過本研究，以期為云芝的液體深層發酵培養提供有價值的參考。

實驗方法

實驗材料。云芝夠自于吉林農業大學菌物研究所

實驗試劑。YPG培養基：胰蛋白胨 10 g/L，酵母提取物 5 g/L，葡萄糖 20 g/L（或麥芽糖15g/L），MgSO4 0.5 g/L，KH2PO4 1g/L。配制固體培養基時加瓊脂粉15 g/L。110℃ 高壓滅菌30min。

實驗方法。

（1）云芝菌絲體的活化。在無菌條件下，用接種針挑取一小塊菌絲體在超凈工作臺中接種于固體YPG培養基中，在26℃培養箱中培養5-7天，挑選出長勢良好無污染的菌絲體作為初級菌種，活化后作為次級菌種保存于4℃冰箱中備用。

（2）配置不同成分配比的花生和大豆培養基

按如上配方配置好不同配比的花生和大豆液體培養基，分裝，每瓶裝250ml，110℃ 高壓滅菌30min。

（3）云芝菌絲體在不同配比花生和大豆液體培養基中搖瓶培養。取上述配置好的4種培養基。將鑷子滅菌后，取出菌絲體小塊加入到不同成分配比的六種花生液體培養基和大豆液體培養基中，（每瓶加3-4塊菌絲體小塊）。將上述接種后的含有云芝菌絲體的花生和大豆液體培養基放置于26℃搖床中， 140rpm振蕩培養5-7天。

（4）云芝菌絲體在4種不同成分配比的液體培養基中鮮重和干重的測定。分別取出4瓶菌絲體發酵液， -4℃，12000rpm離心20mim，棄上清，沉淀為發酵菌體。將菌體用蒸餾水沖洗3-5次，再用潔凈的濾紙吸干多余水分。分別稱取每瓶發酵液菌絲體的總重，求出每種菌種在每一配比的培養基中培養出菌絲體的重量平均值，記為平均鮮重；將上述菌絲體放置于恒溫干燥烘干箱（65℃）進行烘干處理，測出烘干恒重時的重量，求出每種菌種在每一配比的培養基中培養出菌絲體的干重平均值，記為平均干重。

結果與分析

云芝在不同配比培養基中生長狀態的觀察。我們采取相同的培養條件，對云芝菌絲體在花生和大豆固體培養基中的生長狀態進行了觀察，發現云芝在大豆2號和花生2號培養基中的生長優于在1號培養基中生長狀態，（結果如圖1所示）；因此我們選擇了2號培養基繼續進行液體培養，通過比對可以看出云芝菌絲體在大豆液體培養基中生長狀態明顯優于花生液體培養基中生長狀態。（結果如圖2所示）

云芝在不同配比培養基中生物量的測定。我們選取了等量的不同配比的培養基對云芝菌絲體進行培養，我們發現固體培養基的平板培養后的云芝菌絲體的生長比搖瓶培養的生長要好；不同配比的大豆粉和花生粉的培養基中，云芝菌絲體鮮重明顯不同，含大豆粉的培養基得到的菌絲體的鮮重均較高，而且2號培養基獲得的云芝菌絲體的鮮重比1號培養基要高。平板培養獲得的云芝菌絲體的鮮重結果為：大豆一號培養基約為208.67g/L，大豆二號培養基約為272.68g/L，花生一號約為180.88g/L，花生二號約為213.45g/L；搖瓶培養獲得的云芝菌絲體的鮮重結果為：大豆一號培養基約為101.36g/L，大豆二號培養基約為138.65g/L，花生一號約為98.02g/L，，花生二號約為117.25g/L（結果如圖3所示 ）。

實驗結論

培養基的成分對于菌體的生長狀態和生物量均會產生一定的影響，本研究通過加入不同量的大豆粉和花生粉來改變培養基的配方，我們的結果表明：培養基中的氮源配比不同對云芝的生長狀態和生物量均產生了一定的影響，固體培養時得出結論為云芝在大豆2號和花生2號培養基中的生長優于在1號培養基中生長狀態，對選擇2號培養基的液體培養，結果表明云芝菌絲體在大豆液體培養基中生長狀態要優于花生液體培養基中的生長狀態。進一步的生物量測定表明：不同配比的大豆粉和花生粉的培養基中，云芝菌絲體鮮重明顯不同，含大豆粉的培養基得到的菌絲體的鮮重均較高，而且2號培養基獲得的云芝菌絲體的鮮重比1號培養基要高。

作者簡介：宋笛（1982—），女，長春職業技術學院食品生物技術分院講師，碩士研究生，主要研究方向為植物生物技術。