原發性肝癌彩色多普勒超聲血流分級與微血管生成的關系

賈叢叢 周瑋 何國濃

[摘要] 目的 探討原發性肝癌彩色多普勒超聲血流分級與肝癌組織血管內皮生長因子（VEGF）、基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、微血管密度（MVD）表達的關系。 方法 選擇2012年1月～2015年8月在我院行手術治療的原發性肝癌患者80例，彩色多普勒超聲檢查采用美國GE v730型超聲診斷儀，采用免疫組化SP法染色，操作按試劑盒操作說明進行，分別進行VEGF、MMP-9、CD31染色，CD31反映MVD。 結果 80例患者，0級12例，Ⅰ級26例，Ⅱ級23例，Ⅲ級19例；Spearman等級相關分析，超聲血流分級與臨床分期呈正相關（r=0.489，P<0.05）。隨著超聲血流分級增加，VEGF、MMP-9、MVD表達呈升高趨勢，各血流分級VEGF、MMP-9、MVD表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05），Spearman等級相關分析VEGF、MMP-9、MVD表達與超聲血流分級均呈正相關性（r=0.521、0.589、0.715，P<0.05）。 結論 超聲血流分級對肝癌病理特征有一定的判斷價值，血流分級與肝癌組織微血管生成密切相關，是一種安全性高的無創輔助檢查方式。

[關鍵詞] 原發性肝癌；血流分級；微血管生成；微血管密度

[中圖分類號] R445.1；R735.7 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）09-0103-03

[Abstract] Objective To explore the relationship between color Doppler ultrasound blood flow liver cancer and liver cancer tissue grading of vascular endothelial growth factor（VEGF）， matrix metalloproteinase-9（MMP-9）， microvessel density（MVD） expression. Methods From January 2012 to August 2015 selected primary liver cancer patients in our hospital surgical treatment of 80 cases， color Doppler ultrasound examination was used by the US GE v730 diagnostic ultrasound， immunohistochemical staining SP was performed， operation press kit operating instructions， respectively VEGF， MMP-9， CD31 stained， CD31 reflected MVD. Results 80 patients， 0 grade 12 cases， Ⅰ grade 26 cases， Ⅱ grade 23 cases， Ⅲ grade 19 cases， Spearman rank correlation analysis， ultrasonic flow grade were positively correlated with the clinical stage（r=0.489， P<0.05）. With the increase of ultrasonic flow grade， VEGF， MMP-9， MVD expression increased， and each flow grade VEGF， MMP-9， MVD expression， the differences were statistically significant（P<0.05）， Spearman rank correlation analysis of VEGF， MMP-9， MVD expression and ultrasonic flow grade were positively correlated（r=0.521， 0.589， 0.715， P<0.05）. Conclusion Ultrasound flow grade pathological features of liver cancer have a certain value judgments， flow grade and tumor tissue angiogenesis is closely related， is a safe， noninvasive examinations way.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Flow grade； Angiogenesis； Microvessel density

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤，由于肝癌早期癥狀無特異性，診斷就診時往往已是晚期，患者預后差。惡性腫瘤對血供有明顯依賴并促進微血管生成，豐富的血供使癌細胞獲得快速生長、轉移的條件，加快病變進展[1]。影像學檢查是發現和診斷肝癌的重要手段，彩色多普勒超聲是一種簡便、快捷、無創、安全的檢查方式，可發現肝臟占位病變，并通過對肝臟占位病灶內血流信號參數的觀察可以了解腫塊血供[2，3]。血管內皮生長因子（VEGF）、基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）參與組織中新生血管形成，VEGF、MMP-9高表達與癌細胞生長和轉移密切相關[4-6]。本研究對原發性肝癌患者彩色多普勒超聲血流分級與肝癌組織VEGF、MMP-9、MVD表達的關系進行分析，探討彩色多普勒超聲在肝癌早期篩查中的作用?，F報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2012年1月～2015年8月在我院行手術治療的原發性肝癌患者80例，均經CT、MRI等影像學檢查、病理活檢或術后病理檢查證實為原發性肝癌，術前均行腹部彩色多普勒超聲檢查，排除彌漫性肝癌及其他惡性腫瘤。男57例，女23例，年齡41～73歲，平均（51.23±8.34）歲；結節型73例，巨塊型7例；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期40例，Ⅲ期19例，Ⅳ期6例。

1.2 方法

彩色多普勒超聲檢查采用美國GE v730型超聲診斷儀進行，采用腹部探頭，探頭頻率為5.0 MHz。檢查前患者至少空腹8 h，檢查時取仰臥位，由專業超聲科醫師行腹部超聲檢查，觀察肝臟大小、形態、回聲，并仔細觀察腫塊位置、大小、形態、邊界、病灶內部回聲和血運情況、病灶周圍回聲等。肝臟病理樣本組織經石蠟包埋，修復后采用免疫組化SP法染色，操作按試劑盒操作說明進行，分別進行血管內皮生長因子（VEGF）、基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、CD31染色，CD31反映微血管密度（MVD）[7，8]。

1.3 觀察指標

觀察患者肝臟腫瘤超聲征象及內部血運分級，血運分級[9]：0級為腫瘤內無明顯血流信號；Ⅰ級為腫瘤內有少量血流信號，信號呈點狀；Ⅱ級為腫瘤內有較豐富血流信號，信號呈條狀；Ⅲ級為腫瘤內血流豐富，存在多條粗大血管。VEGF、MMP-9組織染色結果判定：細胞內有棕黃色顆粒為陽性，在高倍顯微鏡下觀察5個視野，每個視野下計數200個細胞中陽性細胞數量，取平均數，計算平均陽性率[10]。MVD計數，細胞內呈棕黃色為陽性，肝細胞間染色細胞團、血管狀或管腔狀計為1個血管，低倍鏡下選擇染色豐富區域，高倍鏡下進行計數，多個高倍鏡視野計數取平均數[11]。

1.4 統計學處理

數據采用SPSS22.0統計學軟件進行處理，計數資料采用%表示，計量資料采用均數±標準差表示，采用方差分析，相關性采用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 超聲血流分級與臨床分期關系

80例患者中，0級12例，Ⅰ級26例，Ⅱ級23例，Ⅲ級19例，見封三圖5、6。Spearman等級相關分析，超聲血流分級與臨床分期呈正相關（r=0.489，P<0.05），見表1。

2.2超聲血流分級與VEGF、MMP-9、MVD表達的關系

隨著超聲血流分級增加，VEGF、MMP-9、MVD表達呈升高趨勢，各血流分級VEGF、MMP-9、MVD表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05），Spearman等級相關分析VEGF、MMP-9、MVD表達與超聲血流分級均呈正相關（P<0.05），超聲血流分級越高肝癌組織微血管生成越多，見表2。

3討論

新生血管是惡性腫瘤侵襲期重要的表現，惡性腫瘤通過釋放大量促血管生成相關因子，誘導腫瘤內及周圍形成大量微血管，從而為其快速生長侵襲提供豐富營養，而癌細胞可通過血液循環進行轉移播散，可見早期發現腫瘤組織中新生血管及其分布有利于判斷病變性質及進展程度，積極采取治療措施[12]。肝癌屬高血管實性腫瘤，對血供需求高，因此，肝癌組織內微血管密度可以反映肝癌組織侵襲性[13]。新生血管的形成需要血管內皮細胞增殖、遷移、管腔形成及外基質重塑，在此過程中VEGF促進血管內皮細胞增殖、遷移，增加血管通透性，促進新生血管形成；MMP-9促進細胞外基質重塑，并釋放VEGF，促進新生血管形成及癌細胞轉移[14，15]。

MVD是組織中微血管形成情況最準確的指標，通過對組織中微血管密度的觀察，了解血管分化程度是高血管實性腫瘤預后的重要指標，然而MVD需要進行有創操作，在惡性腫瘤早期檢查中應用受到一定限制[16，17]。病灶內的大量新生血管使其內部充滿豐富血流，彩色多普勒超聲可通過無創、安全的方式觀察血流速度、流量、方向等血流信號，從而較為直觀地觀察到肝癌組織中的血運，有助于判斷病變進展程度[18]。通過對血流進行分級可對病灶內血流進行半定量分析。血運分級：0級為腫瘤內無明顯血流信號；Ⅰ級為腫瘤內有少量血流信號，信號呈點狀；Ⅱ級為腫瘤內有較豐富血流信號，信號呈條狀；Ⅲ級為腫瘤內血流豐富，存在多條粗大血管，逐步提高的分級反映病灶內血運豐富程度的提高，超聲檢查有很好的重復性。

本研究對80例不同臨床分期的肝癌患者彩色多普勒超聲檢查血流分級與肝癌臨床分期進行分析，結果顯示，早期肝癌血流分級明顯較低，說明腫瘤仍處于侵襲前期，但已有部分Ⅱ期腫瘤出現了豐富的血流信號，分級在Ⅱ、Ⅲ級已有可探測的新生血管形成，進入侵襲活躍階段，提示腫瘤處于較為旺盛的生長、侵襲過程，病情進展迅速；晚期肝癌普遍存在豐富血供，惡性程度及轉移風險高，符合肝癌生長、侵襲、轉移的病理過程[19]。統計學分析顯示，超聲血流分級與肝癌臨床分期呈正相關，說明通過彩色多普勒超聲檢查血流分級可以反映肝癌病理特征及進展程度。通過超聲血流分級與VEGF、MMP-9、MVD表達分析，結果顯示，血流分級越高，VEGF、MMP-9、MVD表達越高，均呈正相關性，反映肝癌組織通過促進VEGF、MMP-9高表達，實現新生血管生成，增加微血管密度和通透性，獲取更多的營養物質達到快速生長、侵襲，癌細胞更容易游離進入血液循環而轉移，也與肝癌臨床分期特征相符[20-22]。高密度微血管形成密集血管網絡，彩色多普勒超聲獲取更多、更強血流信號。

綜上所述，彩色多普勒超聲血流分級可對肝癌血供豐富程度進行半定量判斷，反映肝癌組織侵襲性及病變進展程度，具有無創、安全、高效、可重復檢查、操作簡便、費用低等優勢，在肝癌早期篩查及診斷、治療中有較高的應用價值。

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（收稿日期：2015-12-25）