解凍溫度對農藥殘留的影響探究

張娟 王蒂 唐堂

摘 要：通過添加相同標樣的平行樣在不同的溫度下解凍對比研究，發現解凍溫度對于所檢測大部分的參數沒有影響，但對甲胺磷、氧化樂果、百菌清、三唑酮、氟蟲腈這5種農藥的影響較大，在實際工作中，可以根據具體情況進行選擇，從而提高工作效率。

關鍵詞： 解凍溫度；農藥殘留

中圖分類號： S481.8 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20160532015

在實際工作中，制備好的樣品常常被放置在-18℃的冰箱里保存，待用時，需出解凍。而放置在常溫下解凍的樣品，常需要2～3h左右，影響工作效率，故本實驗設置樣品在不同溫度下解凍，并對結果進行對比分析，探究解凍溫度對結果是否會有影響。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

供試農藥標樣：農業部農藥檢定所提供；

試劑：正己烷（色譜純）、丙酮（色譜純）、乙腈（色譜純）、氯化鈉（分析純）；

主要儀器：氣相色譜儀（Agilent 7890A）、氮吹儀、勻漿機等；

分析項目：甲胺磷、甲拌磷、樂果、地蟲硫磷、馬拉硫磷、對硫磷、水胺硫磷、三唑酮、百菌清、氟蟲腈、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、乙烯菌核利、腐霉利、異菌脲、聯苯菊酯、氯氟氰菊酯、噠螨靈、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯；

標樣濃度：濃度均為1000mg/L，配成32mg/L的混標溶液備用。

1.2 實驗設計

實驗分為3組，A組、B組、C組，每組為3個平行樣，解凍溫度分別為A組室溫（20～25℃）、B組50℃、C組80℃。本次試驗為確保結果的準確性，由同一人做3次的平行試驗、及由3名不同的實驗人員各做1次試驗，最后的結果是由6次試驗的平均數值得出。

1.2.1 試料制備

取黃瓜可食用部分，用干凈紗布輕輕擦去樣品表面的附著物，采用對角線分割法，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣，分別放入塑料容器中，編號，備用。

分別稱取9份25.0g的試料放入三角瓶中，各添加32mg/L的混標溶液0.08L，搖勻封上封口膜后，放置冰箱中于-18℃保存，過夜。注意，有機磷類的農藥對在ECD上出峰的時間與三唑酮有相重復的地方（具體見圖1），故加標時，需分開。

第2天，取出，分別放置在室溫（A組）、50℃的水浴鍋（B組）、80℃的水浴鍋（C組）中解凍。當解凍至90%左右時，可以取出，利用余溫解凍完全。其中A組解凍時間為1h，B組解凍時間為0.5h，C組解凍時間為0.2h。

1.2.2 提取

待完全解凍后，再分別加入50.0mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有5～7g氯化鈉的100mL具塞量筒中，收集濾液30～40mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫條件下靜止30min，使乙腈和水相分層。

1.2.3 凈化

有機磷類：從100mL具塞量筒中吸取10.0mL乙腈溶液，放入150mL燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，杯內緩緩通入氮氣流，蒸發近干。加入2.0mL丙酮溶解，完全轉移至10mL刻度試管，定容至5.0mL，搖勻待測。

有機氯、擬蟲菊酯類：從100mL具塞量筒中吸取10.0mL乙腈溶液，放入150mL燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，杯內緩緩通入氮氣流，蒸發近干，加入2.0mL正己烷。將弗羅里硅土柱依次用5.0mL丙酮和正己烷（10+90）、5.0mL正己烷預淋洗，條件化，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用15mL刻度離心管接收洗脫液，用5mL丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里硅土柱，并重復1次。將盛有淋洗液的離心管置于氮吹儀上，在水浴溫度50℃條件下，氮吹蒸發至小于5mL，用正己烷定容至5.0mL，在漩渦混合器上混勻，裝入小瓶中，待測。

1.2.4 標準溶液的配制

有機磷、有機氯及擬蟲菊酯類定量采用校準線外標法定量。準確移取65μL標樣液于10mL容量瓶中，再分別配制成濃度為0.208mg/L、0.156mg/L、0.104mg/L、0.078mg/L、0.052mg/L 的標樣標準曲線。其中，有機磷標樣用黃瓜基質配制。以標樣進樣濃度C（ug/L）為橫坐標，對應單離子色譜峰面積A為縱坐標繪制標準曲線，相關系數R2 在（0.9993～0.9999）范圍內，均呈現正相關系。

1.3 測定

1.3.1 上機測定參考條件

FPD檢測器：

色譜柱：75%苯基-25%甲基聚硅氧烷（Agilent生產的 DB-17）柱，30m×320um×0.25um；

進樣口溫度：250℃ 檢測器溫度：250℃；

柱溫：90℃-1min-1min；10℃/min-180℃-0min-1min； 1℃/min -205℃-0min-35min；10℃/min-255℃-10min-50min；

氣體及流量：氮氣（60mL/min，純度≥99.999%） 氫氣（75mL/min，純度≥99.999%） 標準空氣（100mL/min）；

進樣方式：自動進樣 進樣量：1μL。

ECD檢測器：

色譜柱：苯基甲基二甲基聚硅氧烷（Agilent生產的HP-5）柱，30m×320um×0.25um；

進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：300℃；

柱溫：90℃-1min-1min；30℃/min-170℃- 1min- 4.6667min；8℃/min-230℃-0min-12.167min；2℃/min-

250℃-0min-22.167min ；3℃/min- 275℃- 5min -35.5min；

氣體及流量：氮氣（30mL/min，純度≥99.999%）；

進樣方式：自動進樣 進樣量：1μL。

1.3.2 色譜分析

分析吸取標準溶液和樣品溶液1μL，以柱保留時間定性，以分析柱獲得的樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積定量。每個平行樣前后各進一針標準溶液進行計算，以減少偏差。

表1 有機磷不同解凍溫度下的添加回收結果（×10-2）

編號 甲拌磷 甲胺磷 氧化

樂果 地蟲

硫磷 馬拉

硫磷 對硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 樂果 甲基

對硫磷 毒死蜱 殺螟

硫磷 甲基

異柳磷 丙溴磷

空白/（mg/kg） 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

A-1/（mg/kg） 8.0 9.0 9.3 10.7 11.2 12.1 11.0 6.2 7.1 8.9 8.9 8.8 9.0 8.8

A-2/（mg/kg） 7.0 9.5 9.7 10.7 11.4 11.3 11.6 7.4 7.6 8.9 8.9 8.2 9.4 7.9

A-3/（mg/kg） 8.2 9.5 9.8 11.1 10.4 10.7 11.1 7.0 7.5 8.3 8.9 9.8 8.8 10.5

A/（mg/kg） 7.7 9.3 9.6 10.8 11.0 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1

編號 甲拌磷 甲胺磷 氧化

樂果 地蟲

硫磷 馬拉

硫磷 對硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 樂果 甲基

對硫磷 毒死蜱 殺螟

硫磷 甲基

異柳磷 丙溴磷

RSD/% 8.3 6 3.1 2.1 4.8 6.2 2.9 8.9 3.6 3.7 0 9.0 3.4 14.6

B-1/（mg/kg） 7.5 7.4 7.6 10.8 11.0 10.7 10.0 6.4 8.8 8.1 8.4 8.0 8.8 9.0

B-2/（mg/kg） 7.6 7.7 8.4 11.2 9.8 10.3 11.0 6.8 8.9 7.8 8.7 8.0 8.5 8.5

B-3/（mg/kg） 7.4 7.8 6.7 10.8 10.4 11.5 10.2 6.9 8.3 9.6 8.7 8.8 93 9.4

B/（mg/kg） 7.4 7.6 7.6 10.9 10.4 10.8 10.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9.0

RSD/% 2.8 2.8 11.2 2.1 5.8 5.6 5.1 3.9 11.2 11.3 2.0 5.6 4.6 5

C-1/（mg/kg） 6.7 6.6 5.1 10.5 8.9 10.0 11.0 5.4 6.8 7.7 8.7 7.7 9.2 8.1

C-2/（mg/kg） 6.4 7.0 5.5 10.4 9.5 10.5 9.4 6.8 7.1 9.0 7.9 8.2 8.0 7.6

C-3/（mg/kg） 6.7 6.4 6.1 10.2 9.4 10.2 9.9 6.4 7.4 8.3 9.0 8.2 8.8 9.5

C/（mg/kg） 6.6 6.7 5.6 10.4 9.3 10.2 10.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8.0 8.7 8.4

RSD/% 2.5 4.6 9.0 1.5 3.5 2.5 8.1 11.6 4.2 7.8 6.7 3.6 7.0 11.7

表2 有機磷類農藥三組結果的比較（×10-2）

序列 甲拌磷 甲胺磷 氧化

樂果 地蟲

硫磷 馬拉

硫磷 對硫磷 水胺

硫磷 乙酰

甲胺磷 樂果 甲基

對硫磷 毒死蜱 殺螟

硫磷 甲基

異柳磷 丙溴磷

A/（mg/kg） 7.7 9.3 9.6 10.8 11.0 11.3 11.2 6.9 7.4 8.7 8.9 8.9 9.1 9.1

B/（mg/kg） 7.4 7.6 7.6 10.9 10.4 10.8 10.4 6.7 7.3 8.5 8.6 8.3 8.9 9.0

C/（mg/kg） 6.6 6.7 5.6 10.4 9.3 10.2 10.1 6.2 7.1 8.3 8.5 8.0 8.7 8.4

RSD/% 8 16.7 26.3 4.0 8.4 3.9 5.4 4.4 5.5 2.1 1.1 5.4 2.1 4.3

表3 有機氯、擬蟲菊酯類農藥在不同解凍溫度下的添加回收結果（×10-2）

序列 百菌清 三唑酮 甲氰

菊酯 氟蟲腈 氯氰

菊酯 氰戊

菊酯 溴氰

菊酯 乙烯

菌核利 腐霉利 異菌脲 聯苯

菊酯 氯氟

氰菊酯 噠螨靈 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯

空白/（mg/kg） 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

A-1/（mg/kg） 8.0 8.4 10.0 10.2 10.0 10.6 10.0 8.0 8.4 8.9 9.0 9.8 9.0 9.9 10.0 11.0

A-2/（mg/kg） 8.0 8.5 11.0 9.7 11.0 10.3 10.5 8.6 7.8 8.6 8.2 9.8 8.8 9.6 10.0 11.0

A-3/（mg/kg） 8.6 9.0 12.0 9.5 10.0 10.5 10.4 8.5 7.9 8.4 8.6 10.0 8.9 9.8 10.0 11.0

A/（mg/kg） 8.2 8.6 11.0 9.8 10.3 10.5 10.4 8.4 8.0 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 10.0 11.0

RSD/% 4.2 3.7 9.1 3.7 5.6 1.5 2.6 3.8 4.0 2.9 4.7 6.0 1.1 1.6 0 0

B-1/（mg/kg） 7.2 8.6 10.0 9.0 10.1 10.5 10.0 7.7 8.7 9.4 8.8 9.3 8.4 9.5 8.9 8.8

B-2/（mg/kg） 7.7 8.1 11.0 7.2 10.3 10.0 10.1 8.4 8.4 8.6 8.6 8.9 8.3 8.3 9.5 10.0

B-3/（mg/kg） 7.8 8.0 11.0 7.8 10.4 9.8 9.9 8.0 8.4 8.7 8.7 9.1 8.5 8.9 9.8 10.0

B/（mg/kg） 7.6 8.2 10.7 8.0 10.3 10.1 10.0 8.0 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6

RSD/% 4.2 3.9 5.4 11.5 1.5 3.4 1.0 4.4 2.0 1.1 1.1 2.2 1.2 6.7 4.9 7.2

C-1/（mg/kg） 5.6 4.9 10.5 6.8 10.0 10.2 9.9 8.0 8.1 8.1 8.8 9.5 8.7 8.6 9.1 10.0

C-2/（mg/kg） 5.8 4.2 10.2 7.2 10.0 9.8 9.8 7.1 7.0 8.7 7.9 8.2 7.9 8.6 7.9 9.0

C-3/（mg/kg） 5.0 4.9 10.4 5.8 10.3 9.9 10.0 7.4 7.7 8.7 8.4 8.9 8.4 8.9 9.0 10.0

C/（mg/kg） 5.5 4.7 10.4 6.6 10.1 10.0 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 7.7 9.7

RSD/% 7.6 8.7 1.5 10.9 1.7 2.1 1.0 6.1 7.3 4.1 5.5 7.3 4.9 2.0 7.7 6.0

表4 有機氯、擬蟲菊酯類農藥三組結果的比較（×10-2）

序列 百菌清 三唑酮 氟蟲腈 甲氰

菊酯 氯氰

菊酯 氰戊

菊酯 溴氰

菊酯 乙烯

菌核利 腐霉利 異菌脲 聯苯

菊酯 氯氟氰菊酯 噠螨靈 氟氯氰菊酯 氟氰戊菊酯 氟胺氰菊酯

A/（mg/kg） 8.2 8.6 9.8 11.0 10.3 10.5 10.4 8.4 8.0 8.6 8.6 9.9 8.9 9.8 10.0 11.0

B/（mg/kg） 7.6 8.2 8.0 10.7 10.3 10.1 10.0 8.0 8.5 8.7 8.7 9.1 8.4 8.9 9.4 9.6

C/（mg/kg） 5.3 4.7 6.6 10.4 10.1 10.0 9.9 7.5 7.6 8.5 8.3 8.8 8.3 8.7 8.7 9.7

RSD/% 21.8 29.9 19.7 2.8 1.1 2.6 2.6 7.1 5.6 1.2 2.4 1.7 3.8 6.4 7.1 7.7

2 結果與分析

2.1 有機磷的結果分析

根據GB/T27404-2008 《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》，添加值在0.1～1mg/kg時，平行樣的RSD小于15%，則說明3個樣的差異較小，結果可信。由此，可以認定3組值的RSD小于15%時說明解凍溫度對其無影響，若大于15%時，則說明解凍溫度對檢測結果有影響。從表2可以看出，3組結果差異最小的是毒死蜱，相對標準偏差（RSD）為1.1%；差異最大的為氧化樂果，為26.3%。相對標準偏差超過15%的參數有甲胺磷、氧化樂果，說明解凍問題對其檢測結果有影響。

2.2 有機氯、擬蟲菊酯類的結果分析

從表4中可以看出，3組中結果差異最小的是氯氟氰菊酯，相對標準偏差為1.1%；差異最大的為三唑酮，相對標準偏差（RSD）為29.9%。相對標準偏差（RSD）超過15%的參數有百菌清、三唑酮、氟蟲腈，說明解凍溫度對其檢測結果有影響；對其他參數則無明顯影響。

2.3 影響的規律分析

通過表1、表3可以看出，對于被影響的參數（百菌清、三唑酮、氟蟲腈、甲胺磷、氧化樂果），發現有一規律，3組回收率均小于100%且A組>B組>C組，即在80℃條件下解凍，回收率較低，最不好；50℃次之；常溫下，回收率最高，結果最理想。

3 討論

從上面數據中可以發現，解凍溫度對有機磷、有機氯擬蟲菊酯類的農藥均有負向影響。所以在實際工作中不可僅僅為了提高解凍速率，對樣品直接加熱。要具體情況具體分析，如果僅測其他不受影響的參數，可以對樣品進行適當加熱；而所測的參數中有易受影響的參數，則不可對樣品進行加熱。主要是因為，當溫度升高時，有些熔沸點低的農藥容易揮發，不穩定的農藥極容易分解，導致回收率低。進一步可以推出，在前處理的提取、蒸發步驟，水浴鍋的溫度可以調至低于標準中的“80℃”，有助于提高農藥的回收率。

參考文獻

[1] NY/T761-2008蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬蟲菊酯類和氨基甲酸酯類農藥殘留的測定[S].

[2] GB/T27404-2008實驗室質量控制規范 食品理化檢測[S].