全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100的性能驗(yàn)證與評價(jià)

張巧云，彭　華，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院暨柳州市工人醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，柳州545005)

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全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100的性能驗(yàn)證與評價(jià)

張巧云，彭華，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院暨柳州市工人醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，柳州545005)

【摘要】目的對全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100的性能進(jìn)行驗(yàn)證與評價(jià)。方法用高低濃度混合血漿驗(yàn)證批內(nèi)精密度，用高低濃度質(zhì)控品驗(yàn)證日間精密度，用高濃度混合血漿分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例稀釋后對儀器進(jìn)行線性驗(yàn)證，用接近預(yù)期檢測限的低/高濃度血漿樣本來驗(yàn)證可報(bào)告范圍，通過檢測定值質(zhì)控品和儀器比對來驗(yàn)證正確度，用正常體檢血漿驗(yàn)證參考區(qū)間，用高低濃度血漿標(biāo)本驗(yàn)證攜帶污染率。結(jié)果Sysmex CS-5100檢測PT、APTT、FIB批內(nèi)CV<3.0%；TT、D-二聚體、FDP批內(nèi)CV<4.0%；PT、APTT、FIB日間CV<5.0%；TT、D-二聚體、FDP日間CV<6.0%；FIB、D-二聚體、FDP的可報(bào)告范圍分別是：0.21～24.6 g/L，0.06～89.6 mg/L，0.09～2001.28 μg/ml；各項(xiàng)目相對偏差均在10.5%以內(nèi)；95%以上樣本處于引用參考區(qū)間內(nèi)，攜帶污染率均<2.5%。結(jié)論Sysmex CS-5100全自動血凝分析儀性能良好，可用于檢測臨床樣本。

【關(guān)鍵詞】Sysmex CS-5100；血凝分析儀；性能驗(yàn)證

ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求明確指出必須對儀器進(jìn)行性能驗(yàn)證，新引進(jìn)的儀器須通過性能驗(yàn)證方可用于臨床檢測。全自動血凝分析儀Sysmex CS-5100是一款新儀器，引進(jìn)該儀器的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室還不是很多，對其性能驗(yàn)證的相關(guān)資料很少。本文介紹了一種性能驗(yàn)證方法，對驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行闡述，并給出了結(jié)論，以期為其他醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行該儀器的性能驗(yàn)證提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試劑日本希森美康公司(Sysmex)生產(chǎn)的CS-5100全自動血凝分析儀。日本Sysmex配套試劑和質(zhì)控品：凝血酶時(shí)間(Test Thrombin Reagent，TT)，LOT：504477；活化部分凝血活酶時(shí)間(Action-APTT),LOT：547177；凝血酶原時(shí)間(Thromborel S，PT),LOT：545578；纖維蛋白原(Thrombin Reagent，F(xiàn)IB)，LOT：538079；D-二聚體(INNOVANCE D-Dimer，D-二聚體):Reagent LOT：560181/Diluent LOT:560280/Buffer LOT：560382/Supplement LOT：560479；CLEAN-Ⅰ,LOT：A4156；CLEAN-Ⅱ,LOT：A4014；質(zhì)控1(Dade ci-Trol 1),LOT：528157；質(zhì)控2(Dade ci-Trol 3),LOT：548438；質(zhì)控3(D-二聚體低濃度質(zhì)控),LOT：560774；質(zhì)控4(D-二聚體高濃度質(zhì)控),LOT：560675；日本積水醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的纖維蛋白/纖維蛋白原降解產(chǎn)物試劑(Nanopia P-FDP)和質(zhì)控品：FDP緩沖液，LOT：815RFL；FDP膠乳液，LOT：817RFL；質(zhì)控5(FDP低濃度質(zhì)控),LOT：805RKK；質(zhì)控6(FDP高濃度質(zhì)控),LOT：805RKK。

1.2標(biāo)本來自本院正常體檢者和患者血漿。空腹抽血1.8 ml，0.109 mol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝。其中用于參考區(qū)間驗(yàn)證的體檢個(gè)體需滿足以下條件：無飲酒、吸煙史，血壓正常，未服用藥物，近期無住院、手術(shù)及輸血史，無系統(tǒng)性疾病，女性未在妊娠期或哺乳期，無家族遺傳性疾病。

1.3方法

1.3.1批內(nèi)精密度驗(yàn)證每個(gè)項(xiàng)目取2個(gè)濃度水平(包括正常低值、異常高值)的臨床樣本各1支，每支樣本重復(fù)檢測11次，計(jì)算后10次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算變異系數(shù)(CV)。異常樣本的濃度水平要求大于儀器檢測結(jié)果參考區(qū)間中位值的2倍；FIB異常樣本的濃度大于6.0 g/L或小于1.5 g/L。

1.3.2日間精密度按說明書要求復(fù)溶質(zhì)控1、質(zhì)控3、D-二聚體質(zhì)控品和FDP質(zhì)控品，并各分裝20支，共20組，-20℃冷凍保存，每次取一組置室溫解凍后上機(jī)檢測，每天檢測4次，每次間隔2個(gè)小時(shí)，共檢測5天，得到20組數(shù)據(jù)，分別計(jì)算各項(xiàng)目20次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算CV。

1.3.3線性選取一份接近預(yù)期上限的高值樣本(H)，分別按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度重復(fù)測定2次，計(jì)算均值。將實(shí)測值與理論值作比較，并計(jì)算回歸方程 y=bx+a，及相關(guān)系數(shù)(R2)。

1.3.4可報(bào)告范圍[1]取接近預(yù)期檢測限的低/高濃度血漿樣本，分別按照Sysmex CS-5100儀器設(shè)置的濃縮/稀釋倍數(shù)進(jìn)行檢測，每個(gè)濃縮/稀釋度連續(xù)檢測2次，計(jì)算2次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值作為實(shí)測值，并計(jì)算回收率,回收率(%)=實(shí)測值/理論值×100%。

1.3.5最小檢測限[1]取接近預(yù)期的接近最小檢測限的低濃度血漿樣本，連續(xù)檢測10次，計(jì)算10次檢測結(jié)果的算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算CV。

1.3.6準(zhǔn)確度使用5份配套質(zhì)控品分別進(jìn)行單次檢測，計(jì)算每份檢測結(jié)果與靶值(廠家參考值)的相對偏差。

1.3.7儀器之間結(jié)果的比對[1]各項(xiàng)目選用患者標(biāo)本20份，其中包含正常、異常各10份，也覆蓋黃疸、脂血和溶血標(biāo)本。分別用Sysmex CS5100和Sysmex CA7000對每份標(biāo)本的相應(yīng)項(xiàng)目各檢測1次，比較兩組數(shù)據(jù)的相對偏倚(%)，統(tǒng)計(jì)相對偏倚符合要求的例數(shù)(PT、APTT:正常≤6%，異常≤10%;FIB、TT:正常≤7%，異常≤10%;D-二聚體、FDP:正常≤10%，異常≤10%)，計(jì)算比對通過率(%)。其中Syemex CA7000定期校準(zhǔn)和維護(hù)保養(yǎng)，每天監(jiān)測室內(nèi)質(zhì)控，2014全年室間質(zhì)評結(jié)果合格，以此為靶儀器。

1.3.8參考區(qū)間驗(yàn)證[1]選擇10名正常男性和10名正常女性新鮮血漿標(biāo)本檢測，統(tǒng)計(jì)各參考個(gè)體檢測值，與引用的參考區(qū)間比較，處于引用區(qū)間內(nèi)的樣本為有效樣本，并計(jì)算有效樣本比率(%)=參考個(gè)體落在引用區(qū)間的個(gè)數(shù)/總的參考個(gè)體數(shù)×100%。

1.3.9攜帶污染率驗(yàn)證

1.3.9.1高值樣本對低值樣本的污染將低值樣本置樣本架1和3位置，高值樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測定3次，記錄結(jié)果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。按以下公式計(jì)算：k1=[N4-Mean(N1，N2，N3)]/Mean(N1，N2，N3)。

1.3.9.2低值樣本對高值樣本的污染將高值樣本置樣本架1和3位置，低值樣本置于2位置，每個(gè)樣本分別測定3次，記錄結(jié)果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。按以下公式計(jì)算：k2=[A4-Mean(A1，A2，A3)]/Mean(A1，A2，A3)。

2結(jié)果

2.1批內(nèi)精密度經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證批內(nèi)精密度PT、APTT、FIB均滿足CLIA’88的質(zhì)量要求，TT、D-二聚體、FDP均滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，驗(yàn)證結(jié)果見表1。

2.2日間精密度經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證日間精密度PT、APTT、FIB均滿足CLIA’88的質(zhì)量要求，TT、D-二聚體、FDP均滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，驗(yàn)證結(jié)果見表2。

2.3線性運(yùn)用線性回歸方程對實(shí)測值與理論值進(jìn)行直線擬合，斜率均在(1±0.05)范圍內(nèi)，且各項(xiàng)均滿足R2≥0.95，各項(xiàng)目線性良好,驗(yàn)證結(jié)果見圖1A～C。

表1　CS-5100批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果

表2　CS-5100日間精密度驗(yàn)證結(jié)果

A:FIB線性驗(yàn)證;B:D-二聚體線性驗(yàn)證;C:FDP線性驗(yàn)證。圖1CS-5100線性驗(yàn)證結(jié)果

2.4可報(bào)告范圍試劑說明書及相關(guān)資料介紹樣本經(jīng)稀釋后實(shí)際檢測值與理論值的偏差應(yīng)滿足:FIB≤20%，回收率應(yīng)在80%～120%之間[2]，D-二聚體、FDP≤15%，回收率應(yīng)在85%～115%之間，據(jù)此驗(yàn)證FIB、D-二聚體、FDP的最大稀釋倍數(shù)分別是4倍、20倍、16倍，其中FIB的最大濃縮倍數(shù)為2倍。

2.5最小檢測限最小檢測限 D-二聚體、FDP的低值濃度的樣本重復(fù)檢測10次，CV≤20.0%，二者最小檢測限分別為：0.06 mg/L FEU，0.09 μg/ml。

2.6準(zhǔn)確度各批號質(zhì)控品的實(shí)測值和參考靶值的相對偏差(%)滿足PT≤15%，APTT≤15%，F(xiàn)IB≤20%，D-二聚體≤20%，F(xiàn)DP≤20%均滿足我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，驗(yàn)證結(jié)果見表3。

2.7儀器之間結(jié)果的比對PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項(xiàng)目比對通過率分別為：95%、100%、90%、90%、90%、90%，均≥80%,比對通過。

2.8參考區(qū)間驗(yàn)證PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項(xiàng)目有效樣本比率分別是：100%、100%、95%、100%、100%、100%，均大于90%，滿足(NCCLS)C28-A2的要求，當(dāng)前參考區(qū)間可用。

2.9攜帶污染率驗(yàn)證PT、APTT、FIB、D-二聚體、FDP高值對低值的攜帶污染率分別為：0.3%、1.64%、1.11%、1.56%、2.38%，低值對高值的攜帶污染率分別為：1.26%、0.95%、1.53%、2.35%、0.6%，均<2.5%，滿足要求，儀器自動清潔效果較好。

表3　CS-5100準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

3討論

本實(shí)驗(yàn)對Sysmex CS-5100的性能驗(yàn)證是按照國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)制定的評價(jià)內(nèi)容，參照我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和CLIA’88有關(guān)凝血項(xiàng)目的質(zhì)量要求，以及有關(guān)項(xiàng)目試劑廠家的性能參數(shù)來制定判斷標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)驗(yàn)步驟。

PT、APTT、FIB精密度均能滿足CLIA’88的質(zhì)量要求(批內(nèi)精密度<1/4 CLIA’88規(guī)定的最大允許誤差，日間精密<1/3 CLIA’88規(guī)定的最大允許誤差)，TT、D-二聚體、FDP能滿足試劑廠家的質(zhì)量要求，Sysmex CS-5100精密度符合要求。本實(shí)驗(yàn)中FIB的病理濃度只有一個(gè)高濃度水平，有報(bào)道FIB在低濃度水平CV>5.0%[3]，故后續(xù)應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證低濃度水平的批內(nèi)精密度。此外，采用凝固法檢測的項(xiàng)目影響因素較多[4]，故實(shí)驗(yàn)過程中質(zhì)控品和血漿的復(fù)溶及保存方法應(yīng)相同，復(fù)溶后盡快上機(jī)檢測，以減少人為因素造成的結(jié)果偏差。

FIB、D-二聚體、FDP的線性范圍分別是：FIB 0.62～6.15 g/L，D-二聚體 0.22～4.48 mg/L FEU，F(xiàn)DP 6.25～125.08 μg/ml，與試劑說明書基本相符。其中試劑說明書介紹FDP的低值線性范圍可以達(dá)到2.5 μg/ml，可考慮分別用濃度接近低值濃度水平和高值濃度水平的血漿配比稀釋以達(dá)到線性范圍的濃度。本實(shí)驗(yàn)中FIB、D-二聚體、FDP的臨床可報(bào)告范圍(CRR)分別是：0.21～24.6 g/L、0.06～89.6 mg/L、0.09～2001.28 μg/ml，可覆蓋臨床大多數(shù)樣本。其中，F(xiàn)IB的可報(bào)告范圍基本全部覆蓋臨床樣本，故未驗(yàn)證其最小檢測限。在一些動靜脈血栓患者的溶栓治療過程中，溶栓效果好的患者FDP、D-二聚體明顯上升[5]，準(zhǔn)確測定FIB、D-二聚體、FDP在溶栓治療過程中可以判斷疾病發(fā)展、預(yù)測出血風(fēng)險(xiǎn)，具有重要的監(jiān)測價(jià)值[6，7]。故驗(yàn)證其最大稀釋倍數(shù)，精確檢測高濃度水平樣本，對臨床有重要意義。此外，本實(shí)驗(yàn)由于儀器參數(shù)設(shè)置的限制，D-二聚體在20～64倍之間的稀釋倍數(shù)沒有得到驗(yàn)證，應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證。

根據(jù)NCCLS頒布的EP15-A,正確度的驗(yàn)證采用了兩種簡便方案來驗(yàn)證,即分別用檢測規(guī)定靶值的質(zhì)控品和通過儀器比對來驗(yàn)證[1]。Sysmex CA-7000和Sysmex CS-5100兩臺儀器檢測原理基本相同，已有報(bào)道二者結(jié)果的相關(guān)性良好[8，9],本實(shí)驗(yàn)僅從兩臺儀器的結(jié)果偏倚進(jìn)行分析，以驗(yàn)證新進(jìn)儀器結(jié)果的可靠性。同一臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用檢測原理相同的血凝分析儀，否則極有可能出現(xiàn)檢測結(jié)果一致性不佳，對臨床造成困惑，也不符合《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的要求[10]。

Sysmex CA-7000與Sysmex CS-5100的檢測系統(tǒng)相近，檢驗(yàn)服務(wù)對象相同，且分析前和分析后各因素均一致，故本實(shí)驗(yàn)中參考區(qū)間的驗(yàn)證屬于具有可比性的分析系統(tǒng)之間參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移。按照CLSI EP9-A2文件要求，用20個(gè)健康參考個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，PT、APTT、FIB、TT、D-二聚體、FDP各項(xiàng)目20個(gè)參考值均未超出2例的觀測值在原始的參考區(qū)間外，二者參考區(qū)間可通用[1]。另外，兩臺儀器檢測系統(tǒng)大致相同，且參考區(qū)間一致，結(jié)果可比，故可以用同一個(gè)PT的Normal值，在實(shí)際工作中可以繼續(xù)跟蹤驗(yàn)證二者INR有無差異。

攜帶污染率是具體的量化的攜帶污染，其值越小說明儀器檢測過程樣本相互影響越小，本實(shí)驗(yàn)中各項(xiàng)目的攜帶污染率均小于2.5%，證明Sysmex CS-5100有較好的自潔系統(tǒng)，為檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性提供保障。

本實(shí)驗(yàn)初步確定Sysmex CS-5100全自動血凝分析儀有較好的批內(nèi)精密度和日間精密度，線性良好，準(zhǔn)確度和儀器比對合格，參考區(qū)間與Sysmex CA-7000具有通用性，儀器自潔系統(tǒng)較好，故可以用于檢測臨床樣本。此外，本實(shí)驗(yàn)未進(jìn)行干擾試驗(yàn)的驗(yàn)證，需要進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

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(編輯：潘明志)

Performance verification and evaluation of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer

ZHANGQiaoyun,PENGHua,LIANGWeijun

(DepartmentofClinicalLaboratory,TheFourthAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity—LiuzhouWorker’sHospital,Liuzhou545005,China)

【Abstract】ObjectiveTo verify and evaluate the performance of Sysmex CS-5100 automatic coagulation analyzer.MethodsIn-run precision was verified by high/low concentration mixed blood plasma, between-day precision was verified by high/low concentration quality control sample, high concentrations of mixed plasma was used to verify the linear with the dilution ratio of 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, 10% and 5%, respectively. High/low concentration close to expected detection limit was used to verify reportable range, accuracy was verified by detecting fixed value quality control sample and equipment comparison, normal physical examination plasma was carried on to verify reference range, and high/low concentration blood plasma was used to verify contaminative rate. Results The in-run precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 3.0%, TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 4.0%. The between-day precision of PT, APTT and FIB detection were all less than 5.0%, and TT, D-Dimer, FDP detection were all less than 6.0%. The reportable range of FIB, D-Dimer, FDP were 0.21～24.6 g/L, 0.06～89.6 mg/L and 0.09～2001.28 μg/mL, respectively.The bias of each items were within 10.5%, more than 95% of the sample in quoting reference range, contaminative rate was all<2.5%.ConclusionSysmex CS-5100 show a good performance,and can be used for detection of clinical samples.

【Key words】Sysmex CS-5100 show a good performance, so it can be used for detection of clinical samples

(收稿日期：2015-11-27修回日期：2016-02-26)

中圖分類號：R318.6；TH776

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.01.021

作者簡介：張巧云，女，初級技師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究與工作。E-mail：zhangqiaoyun1984@126.com