E-選擇素在大腸癌組織腫瘤細胞中的表達及其臨床病理意義

黃　琴，黃炳臣，陳家興，黃　芳，黃照權，謝　亮，龍艷丹，羅春英

(右江民族醫學院1.2011級臨床醫學本科，2.臨床醫學院，3.2012級臨床醫學本科，

4.廣西高校桂西地區高發病防治研究重點實驗室，百色 533000)

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E-選擇素在大腸癌組織腫瘤細胞中的表達及其臨床病理意義

黃琴1，黃炳臣2，陳家興3，黃芳3，黃照權2，謝亮3，龍艷丹3，羅春英4▲

(右江民族醫學院1.2011級臨床醫學本科，2.臨床醫學院，3.2012級臨床醫學本科，

4.廣西高校桂西地區高發病防治研究重點實驗室，百色 533000)

【摘要】目的探討E-選擇素蛋白在大腸癌組織腫瘤細胞中的表達及其臨床病理意義。方法運用免疫組織化學法，采用E-選擇素抗體檢測116例大腸癌組織和57例癌旁正常腸黏膜組織E-選擇素的表達情況，分析比較E-選擇素在大腸癌腫瘤細胞和正常腸黏膜中的表達差異及其臨床病理意義。結果E-選擇素在大腸癌腫瘤細胞、血管內皮細胞均有表達，其在腫瘤細胞中陽性表達率(38.8%，45/116)明顯高于癌旁正常腸黏膜腺體組織上皮細胞E-選擇素的陽性表達率(5.3%，3/57)，兩者差異有統計學意義(χ2=21.4335，P<0.001)。但腫瘤細胞E-選擇素陽性率在不同腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移間差異無統計學意義(40.3% vs 37.0%、37.0% vs 42.9%、31.4% vs 44.6%、32.7% vs 43.8%，P均>0.05)。結論大腸癌組織腫瘤細胞表達E-選擇素，但腫瘤細胞的這一分子特征在不同生物學行為的大腸癌病例間無顯著差異。

【關鍵詞】E-選擇素；大腸癌；免疫組織化學

近十年來，我國大腸癌的發病率和死亡率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅人類健康[1]。近年研究發現，E-選擇素是黏附分子受體，能介導腫瘤細胞與血管內皮細胞之間的相互作用，從而影響腫瘤的生物學行為，在腫瘤的侵襲轉移中起著非常重要的作用[2]。也有文獻報道E-選擇素在結直腸癌腫瘤患者血清中檢測水平較高，與該腫瘤的惡性生物學行為及預后關系密切[3]。為探討E-選擇素在大腸癌腫瘤組織中的表達情況及其臨床意義，我們采用免疫組織化學法檢測116例大腸癌組織和57例癌旁正常腸黏膜組織E-選擇素蛋白的表達情況，分析E-選擇素在大腸癌組織中癌細胞的表達情況及其臨床病理意義。

1材料與方法

1.1材料選取右江民族醫學院附屬醫院2011年1月～2012年1月間，病理確診為大腸癌的手術切除標本116例和癌旁正常腸黏膜組織57例，所有標本經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋。所有病例術前均未接受放、化療或免疫治療，116例病例中男89例，女27例，年齡22～92歲，平均(56.7±4.9)歲；≥60歲58例，<60歲58例；腫瘤直徑<5 cm的62例，≥5 cm的54例；高分化腺癌81例，中-低分化腺癌35例；腫瘤浸潤肌層51例，浸潤至漿膜層65例；淋巴結轉移52例，無淋巴結轉移 64例。

1.2試劑及方法E-選擇素單克隆抗體購于R&D Systems公司，二抗、DAB 染色劑購于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組化En Vision兩步法檢測，其主要操作步驟：(1)石蠟切片，脫蠟至水。(2)抗原修復，采用枸櫞酸緩沖液高壓抗原修復，高壓鍋噴氣2 min，放置冷卻至室溫。(3)3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化酶活性。(4)切片滴加非免疫牛血清室溫下存放10 min，以封閉非特異性抗原反應。(5)滴加 25 mg/L鼠抗人E-選擇素單克隆抗體，4 ℃下孵育過夜，然后用PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。(6)每張切片滴加二抗多聚復合物，室溫下孵育15 min，PBS沖洗3次，每次3 min。(7)DAB顯色、蘇木素復染及中性樹脂封片。用已知陽性切片作陽性對照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判斷光鏡下組織細胞結構清晰，在細胞胞漿、胞膜中出現棕黃色顆粒，且染色明顯高于背景，判讀為陽性。根據病變區域陽性細胞所占百分比記分：隨機選取5個高倍視野，分別計數100個細胞，陽性細胞計數26%～50%記為1分，51%～75%記為2分，>75%記為3分。根據病變區域的普通染色強度記分:1分：無著色或淡黃色；2分：棕黃色；3分：明顯著色為棕褐色。綜合細胞著色強度及陽性細胞數判定陽性強度和陽性率，取兩項評分的乘積為最終綜合評分，評分1～3分判定為陰性表達， 4～9分判定為陽性表達[4]。

1.4統計學方法采用SPSS 17.0統計學軟件進行統計學分析，兩樣本間率的比較采用四格表資料的χ2檢驗或Fisher精確概率法，相關分析采用列聯表資料的χ2檢驗,檢驗水準：α=0.05。

2結果

2.1E-選擇素在大腸癌組織和癌旁正常腸黏膜組織的表達E-選擇素陽性信號定位于細胞質和/或細胞膜，呈棕黃色顆粒，其在腫瘤細胞、血管內皮細胞均有表達(圖1A、B)。E-選擇素在腫瘤細胞中陽性表達率(38.8%，45/116)明顯高于癌旁正常腸黏膜腺體中的陽性表達率(5.3%，3/57)，差異有統計學意義(χ2=21.4335，P<0.001)。

2.2大腸癌組織中腫瘤細胞E-選擇素蛋白表達及其與大腸癌患者臨床病理特征的關系應用單因素χ2檢驗分析，腫瘤細胞E-選擇素陽性率在不同腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移間差異無統計學意義，且E-選擇素表達與患者性別、年齡無關(P>0.05)。見表1。

A:在中分化腺癌組織中腫瘤和血管呈陽性;B:在腺癌組織腫瘤細胞中呈陽性。 圖1 E-選擇素在大腸癌組織中的陽性表達(EnVision兩步法:×200)

表1　E-選擇素在大腸癌組織中腫瘤細胞的表達情況及其與臨床病理特征的關系(n,%)

3討論

E-選擇素是黏附分子選擇素家族成員之一，在炎癥反應、血液凝固、免疫、識別、腫瘤的浸潤和轉移中起重要的作用[4]。靜息狀態下E-選擇素僅在內皮細胞表達且含量甚微。內皮細胞受炎性因子、IL-1、腫瘤壞死因子、細菌脂多糖等刺激后，E-選擇素作為誘導性黏附分子與其配體結合后介導細胞黏附和組織特異性招募，從而促進炎癥的發展和腫瘤的轉移[5～7]。Ye CL等[4]研究發現結腸癌原發灶及轉移灶鄰近的小血管內皮細胞表面表達E-選擇素，為癌細胞分泌的刺激因子所誘導，表達程度與血管和癌灶的距離呈負相關，且發現E-選擇素的表達在轉移灶強于原發灶。一般認為，腫瘤細胞激活內皮細胞表達的E-選擇素能特異性識別腫瘤細胞表面選擇素配體并與之結合，從而實現腫瘤細胞與血管內皮細胞的識別和黏附，在腫瘤轉移中發揮重要作用。Liu FR等[8]發現西咪替丁可以通過抑制E-選擇素受體sLe-X，阻礙胃癌細胞與血管內皮細胞的黏附，從而抑制腫瘤的轉移。Min TJ等[9]研究發現嗎啡緩釋劑和LPS合用可以稀釋血管內皮細胞表達的E-選擇素，從而抑制腫瘤的轉移。

本研究發現，在大腸癌組織中，E-選擇素不僅在血管內皮細胞表達，而且在腫瘤細胞也有表達，陽性表達率為38.8%(45/116)，高于癌旁正常腸黏膜組織腺上皮細胞E-選擇素的陽性表達率(5.3%，3/57)，兩者差異顯著。提示大腸癌組織中腫瘤細胞表達E-選擇素是不可忽視的分子特征。進一步分析發現腫瘤細胞表達E-選擇素在不同患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度和有無淋巴道轉移病例間的差異無顯著性。張勇超[10]研究報道血清可溶性E-選擇素水平與腫瘤部位及組織學分型也無明顯相關。而安萍等人[11]檢測結直腸癌患者可溶性E-選擇素血清水平，發現E-選擇素檢測的特異性和敏感性高于CA19-9、CEA、CA724等傳統的消化道腫瘤標志物。張梁等人[3]報道隨著臨床分期的上升，E-選擇素水平顯著升高，其水平與淋巴結轉移和Dukes分期呈正相關。關于大腸癌組織中癌細胞表達的E-選擇素確切的臨床病理意義有待進一步探索研究。

綜上所述，E-選擇素是一種表達在內皮細胞表面的細胞黏附分子，但在大腸癌組織腫瘤細胞中有較明顯的表達，其表達在不同患者年齡、性別、腫瘤直徑大小、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移病例間差異無顯著性。關于腫瘤組織中癌細胞表達的E-選擇素對腫瘤和機體的影響、意義和作用機制需要進一步實驗研究和探討，為預測大腸癌腫瘤的生物學行為和防治提供新思路和方法。

參考文獻

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(編輯：潘明志)

Expression of E-selectin protein in tumor cells of the colorectal cancer tissue and its clinical pathological significance

HUANGQin1,HUANGBingchen1,CHENJiaxing1,HUANGFang1,HUANGZhaoquan1,XIELiang1,LONGYandan1,LUOChunying2▲

(1.UndergraduatesofClinicalMedicineinGrade2011, 2.ClinicalMedicineCollege, 3.UndergraduatesofClinicalMedicineinGrade2012,YoujiangMedicalUniversityforNationalities;4.KeyLaboratoryofControlandPreventionofHighIncidenceofDiseaseinWesternGuangxiamongGuangxiUniversities,Baise533000,China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of E-selectin protein in tumor cells of the colorectal cancer tissue and its clinical pathological significance. MethodsThe protein expressions of the E-selectin in 116 cases of colorectal cancer tissues and 57 cases of normal intestinal mucosa tissue adjacent to carcinoma were detected by immunohistochemistry. Meanwhile, differences of expression and clinical pathological significance of E-selectin in tumor cells of the colorectal cancer tissue and normal intestinal mucosa were analyzed and compared. Results The protein of the E-selectin expressed not only in vascular endothelial cells but also in colorectal cancer cells. The positive expression rates of E-selectin(38.8%, 45/116) in colorectal cancer cells was apparently higher than that(5.3%，3/57)in normal mucosa adjacent to carcinoma, so difference was statistically significant (χ2=21.4335,P<0.001). However, differences of E-selectin in intestinal colorectal cancer cells and different tumor diameter, differentiation degree, infiltration depth and with or without lymph node metastasis was not statistically significant(40.3% vs 37.0%, 37.0% vs 42.9%, 31.4% vs 44.6% and 32.7% vs 43.8%, P all >0.05).ConclusionTumor cells of colorectal cancer can express E-selectin, but this molecular characteristic is not significantly different among different colorectal cancer cases with different biological behavior.

【Key words】E-selectin; colorectal cancer; immunohistochemistry

(收稿日期：2016-01-06修回日期：2016-02-26)

中圖分類號：R735.3+4

文獻標識碼：A

DOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2016.01.002

作者簡介：黃琴，女，本科在讀。E-mail：969554744@qq.com▲通信作者：羅春英。E-mail:chun2005008@163.com

基金項目：廣西自然科學基金資助項目(2012GXNSFBA053121)；廣西壯族自治區級大學生創新創業訓練計劃立項項目(201410599017)；廣西高校重點實驗室開放課題(gxzdsysyy2015204)