流動注射化學發光法測定醋氯芬酸

劉　歡，張琰圖，雙海軍，宋馥馨

(延安大學　化學與化工學院，陜西　延安　716000)

流動注射化學發光法測定醋氯芬酸

劉歡，張琰圖*，雙海軍，宋馥馨

(延安大學化學與化工學院，陜西延安716000)

摘要：基于酸性條件下醋氯芬酸對高錳酸鉀氧化甲醛產生微弱化學發光反應體系具有很強的增敏作用，且增強的發光強度在一定范圍內與醋氯芬酸濃度呈良好的線性關系，結合流動注射分析技術，建立了測定醋氯芬酸的化學發光新方法。該法測定醋氯芬酸的線性范圍為0.08～ 5.0 mg/L，檢出限(3σ)為3.0×10-2mg/L，相對標準偏差(RSD)為1.7%(n=11，c=0.50 mg/L)，回收率為98.1% ～ 104.6%。該法已用于片劑和膠囊中醋氯芬酸含量的測定。

關鍵詞：流動注射；化學發光；醋氯芬酸；高錳酸鉀

圖1　醋氯芬酸的化學式Fig.1　Chemical structure of aceclofenac(ACF)

醋氯芬酸(Aceclofenac,ACF，結構如圖1所示)別名乙酰氯芬酸，學名為2-(2,6-二氯苯胺基)苯乙酰氧基乙酸，是一種新型苯乙酸類非甾體抗炎鎮痛藥物，可選擇性地抑制環氧化酶活性并減少前列腺素的合成，在臨床上被用于治療骨關節炎、類風濕性關節炎、強直性脊柱炎等多種疾病[1]，但長期或大劑量服用往往會使人體出現腹痛、胃腸道系統失調、肝酶升高甚至引發中樞和外周神經系統疾病[2]。故建立快速、準確、靈敏的ACF含量檢測方法在臨床醫學及藥理學研究方面具有重要意義。

ACF的測定方法主要有高效液相色譜法[3-4]、氣相色譜法[5]、分光光度法[6-7]、電化學法[8-9]及毛細管電泳法[10]等。東磊磊等[10]從優缺點、適用條件及專屬性等方面對這些方法作了詳細的評述。化學發光法具有簡單、快速、靈敏以及線性范圍寬等優點，在藥物分析領域內的應用十分活躍[11-12]，其中高錳酸鉀作為氧化劑，可氧化眾多有機物產生化學發光[13-14]，作為一個重要的化學發光反應體系，已應用于萘普生[15]、阿莫西林[16]、 吡羅昔康[17]等非甾體類藥物和多種有機化合物含量的分析，但尚未見應用于ACF測定的報道。

本研究發現，酸性條件下，在高錳酸鉀氧化甲醛產生微弱化學發光信號的溶液中加入一定濃度的ACF可以產生很強的化學發光信號，且增強的化學發光強度與ACF濃度在一定范圍內呈良好的線性關系。據此，結合流動注射分析技術，提出了一種簡單、靈敏的測定ACF化學發光的新方法，并將該方法成功用于藥物制劑中ACF含量的分析。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

IFFM-E型流動注射化學發光分析儀(西安瑞邁公司)；AUY220電子分析天平(日本島津公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(上海精密儀器儀表有限公司)；CJB型磁力攪拌器(西安安泰公司)。實驗數據采集及處理由IFFM-E分析系統控制軟件完成。

0.1 g/L醋氯芬酸(中國藥品生物制品檢定所)標準溶液：準確稱取10.0 mg ACF標準品置于100 mL 棕色容量瓶中，加適量甲醇溶解，用磷酸鹽緩沖溶液(pH 7.4)稀釋定容，搖勻，并儲存于4 ℃冰箱中備用，使用時逐級稀釋至所需濃度。0.01 mol/L KMnO4儲備液：準確稱取0.395 1 g KMnO4，用水溶解并定容至250 mL棕色容量瓶中，避光保存；H2SO4、甲醛等試劑均購于西安化學試劑廠。所用試劑均為分析純，實驗用水為超純水。

1.2實驗方法

實驗裝置如圖2所示，分別將載液(水)、甲醛、H2SO4、KMnO4通過相應的管道泵入分析系統，待基線穩定后，通過進樣閥注入100 μL ACF標準液，記錄化學發光信號，以化學發光強度差值(ΔI=IS-I0)進行定量分析，其中IS為加入ACF后產生的化學發光強度值，I0為空白溶液的化學發光強度值。

圖2　流動注射化學發光分析法測定醋氯芬酸流路圖

圖3　KMnO4-甲醛-醋氯芬酸體系的化學發光反應動力學曲線Fig.3　Kinetic curves of CL reactions for KMnO4-HCHO-ACF systemcKMnO4=1.0×10-4 mol/L；cH2SO4=2.0 mol/L；φHCHO=1.5%；cACF=1.0 mg/L

2結果與討論

2.1化學發光反應的動力學曲線

在靜態條件下，分別研究了KMnO4-甲醛、KMnO4-甲醛-ACF混合溶液的化學發光動力學曲線(圖3)。由圖3可以看出，在KMnO4-甲醛的混合溶液中注入ACF溶液，可使反應發光強度顯著增強(約10倍)，且在3.5 s發光強度達到最大值，隨后反應完成回到基線，由此可知該反應為快速發光反應。

圖4　反應介質對相對化學發光強度的影響Fig.4　Effect of reaction medium on relative CL intensitycKMnO4=2.0×10-5 mol/L；cAcid=1.0 mol/L ；φHCHO=0.3%；ρACF=1.0 mg/L

2.2化學發光條件的優化

2.2.1反應介質的選擇KMnO4-甲醛化學發光體系在測定有機化合物時，一般采用H3PO4，HCl，HNO3，H2SO4等作為反應介質[18-19]。本文分別以1.0 mol/L的H3PO4，HCl，HNO3，H2SO4作為反應介質，測定了ACF的化學發光強度值，發現H2SO4作為反應介質時ACF的ΔI最大(見圖4)，這可能與4種酸的酸性強弱及其氧化還原性有關，從而影響KMnO4的氧化性所致。因此本文選擇H2SO4作為反應介質。保持其它條件不變，在0.4～2.8 mol/L范圍內考察了H2SO4濃度對ACF化學發光強度的影響。結果表明，ΔI隨著H2SO4濃度的增大而增大，當H2SO4濃度為2.0 mol/L 時達到最大，隨后化學發光強度趨于平緩。因此實驗選擇2.0 mol/L H2SO4作為反應介質。

2.2.2KMnO4濃度的選擇KMnO4作為該化學發光體系的氧化劑，其濃度對ACF化學發光強度有著直接的影響?？疾炝薑MnO4濃度對ACF化學發光強度的影響，結果表明，在2.0×10-5～ 1.4×10-4mol/L范圍內，隨著KMnO4濃度增大，ACF的ΔI值增大，當KMnO4濃度為1.0×10-4mol/L時，ACF具有最大的ΔI值，此后ΔI值隨KMnO4濃度的增大而減小。這可能是KMnO4溶液自身吸收光輻射所致。故選擇KMnO4的最佳濃度為1.0×10-4mol/L。

2.2.3甲醛濃度的選擇以2.0 mol/L的H2SO4作為反應介質，在1.0×10-4mol/L KMnO4的條件下，考察了甲醛濃度在0.3% ～ 2.1%(體積分數)范圍內變化時對ACF的ΔI值的影響。結果表明，ACF的ΔI值隨著甲醛濃度的增大而增大，當甲醛濃度為1.5%時達到最大，隨后繼續增大甲醛濃度，則基線變得不穩定，ΔI值逐漸減小。因此實驗選擇甲醛濃度為1.5%。

2.2.4反應試劑流速的選擇考察了化學反應試劑的流速(0.8 ～ 2.8 mL/min)對ACF化學發光強度的影響。結果表明，流速太小會使ACF的最大發光發生在流通池之前，流速太大又會導致最大發光在流通池之后。實驗發現，在0.8 ～ 2.0 mL/min范圍內，ΔI隨反應試劑流速的增大而增大，當流速為2.0 mL/min 時達到最大，此后繼續增大反應試劑的流速，則ΔI降低。因此實驗選擇反應試劑的最佳流速為2.0 mL/min。

2.3線性范圍、精密度與檢出限

在上述選定實驗條件下，ACF濃度在0.08～ 5.0 mg/L范圍內與其相對化學發光強度ΔI呈良好的線性關系，其回歸方程為ΔI=4 426ρ(mg/L)+ 449，r=0.999 6。對濃度為0.50 mg/L 的ACF標準溶液連續平行測定11次，計算得相對標準偏差(RSD)為1.7%。根據IUPAC建議，計算得本法檢出限(3σ)為3.0×10-2mg/L。

2.4干擾試驗

2.5樣品的測定

分別取ACF片劑和膠囊10片(粒)，準確稱量求得平均片(粒)重，將其研細混勻，精密稱取適量(相當于ACF 10 mg)，溶解、過濾、定容，配成一定濃度的待測液，在上述最佳條件下按圖2所示流路進行樣品分析，并用HPLC法[20]進行對照，其結果如表1所示?？梢钥闯?，本法所測得的結果與HPLC法所測結果相吻合。為了進一步驗證該法的準確度，取適量相當于含ACF 10 mg的片劑(膠囊)溶液，分別加入0.1，1.0，5.0倍的ACF，按照本實驗方法進行回收率實驗，計算表明：片劑和膠囊中的回收率分別為98.1%～100.3%和99.6%～104.6%(見表1)，結果滿意。

表1　片劑和膠囊中醋氯芬酸的測定結果(n=5)

3結論

本文基于酸性條件下，醋氯芬酸對高錳酸鉀氧化甲醛產生的微弱化學發光增敏作用，結合流動注射技術，建立了一種測定醋氯芬酸的新方法。該方法成功用于片劑和膠囊中醋氯芬酸的測定，為醋氯芬酸的快速測定提供了一種簡單、高效的方法。

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Determination of Aceclofenac by Flow Injection Chemiluminescence Method

LIU Huan，ZHANG Yan-tu*，SHUANG Hai-jun，SONG Fu-xin

(College of Chemistry and Chemical Engineening,Yan'an University,Yan'an716000，China)

Abstract：A novel chemiluminescence method for the determination of aceclofenac was developed,based on the fact that aceclofenac could enhance the chemiluminescence intensity from the reaction of potassium permanganate with formaldehyde in acidic medium.The experiments indicated that under optimum conditions,the enhanced intensity of chemiluminescence was linearly related to the concentration of aceclofenac in the range of 0.08-5.0 mg/L with a detection limit(3σ) of 3.0×10-2mg/L.The relative standard deviation(RSD) was 1.7% for 0.50 mg/L aceclofenac solution in 11 repeated measurements.The method was successfully applied in the determination of aceclofenac in the tablets and capsules with recoveries of 98.1%-104.6%.

Key words：flow injection;chemiluminescence;aceclofenac;potassium permanganate

收稿日期：2015-11-04；修回日期：2015-11-28

基金項目：陜西省高水平大學建設專項資金(2013SXTS03);延安大學重點自然科學基金項目( YD2014-06);延安市科技創新團隊項目( 2015-08)

*通訊作者：張琰圖，博士，教授，研究方向：化學發光分析，Tel：0911-2333193，E-mail：zhyt1969@163.com

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.04.022

中圖分類號：O657.3;TQ460.72

文獻標識碼:A

文章編號：1004-4957(2016)04-0497-04