IEC與UV測(cè)定黃豆芽和綠豆芽中亞硝酸鹽含量

蘇曉燕，馬光路，張海芳（內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010070）

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IEC與UV測(cè)定黃豆芽和綠豆芽中亞硝酸鹽含量

蘇曉燕，馬光路，張海芳
（內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010070）

摘要：對(duì)市場(chǎng)上豆芽進(jìn)行亞硝酸鹽含量測(cè)定。采用離子色譜法和分光光度法比較測(cè)定樣品中的亞硝酸鹽含量。黃豆芽和綠豆芽中亞硝酸鹽含量各不相同。離子色譜作為一種新型的色譜分離技術(shù)，比分光光度法更適合于亞硝酸鹽的檢測(cè)，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：離子色譜法；分光光度法；豆芽；亞硝酸鹽

豆芽是老百姓餐桌上不可或缺的一種蔬菜，近年來“問題”豆芽的出現(xiàn)，使人們對(duì)豆芽望而卻步。豆芽中6-腺基嘌呤，尿素，亞硝酸鹽和硝酸鹽成了關(guān)注的焦點(diǎn)。亞硝酸鹽能引起組織缺氧，而且是劇毒物質(zhì)，成人攝入0.2 g～0.5 g即可引起中毒，3 g即可致死，同時(shí)還是一種致癌物質(zhì)[1-9]。

本文采用離子色譜法和分光光度法比較測(cè)定黃豆芽和綠豆芽中的亞硝酸鹽含量，方法參考GB 5009.33-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》，并對(duì)其中的一些方法及用量進(jìn)行了改進(jìn)，結(jié)果表明離子色譜作為一種新型的色譜分離技術(shù)，比分光光度法更適合于亞硝酸鹽的檢測(cè)，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)。

1　試劑和材料

1.1試劑

純化水，乙酸，氫氧化鉀，亞硝酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mg/L），亞鐵氰化鉀，乙酸鋅，硼酸鈉，鹽酸萘乙二胺，對(duì)氨基苯磺酸，亞硝酸鈉（均為分析純）：天津大茂化學(xué)試劑廠。

農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采購(gòu)的黃豆芽、綠豆芽，共60個(gè)樣品（均為新鮮樣品）。

1.2儀器

ICS-1600型離子色譜儀：美國(guó)戴安公司；JYL-C010型多功能料理機(jī)：九陽股份有限公司；PS-1001型超聲波清洗機(jī)：合肥攀升超聲波科技有限公司；FA2004N型電子天平：上海菁海儀器有限公司生產(chǎn)；TD5M型臺(tái)式離心機(jī)：上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；T6S紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2試樣預(yù)處理及溶液的配制

將豆芽樣品用去離子水洗凈，晾干后，去根切碎混勻。將切碎的豆芽樣品用食物粉碎機(jī)制成勻漿備用。

乙酸溶液（3 %）：取乙酸3 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。

亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液（供離子色譜使用）：準(zhǔn)確移取亞硝酸根離子的標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。

亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）：稱取106.0 g亞鐵氰化鉀，用水溶解，并稀釋至1 000 mL。

乙酸鋅溶液（220 g/L）：稱取220.0 g乙酸鋅，先加30 mL冰醋酸溶解，用水稀釋至1 000 mL。

飽和硼砂溶液（50 g/L）：稱取5.0 g硼酸鈉，溶于100 mL熱水中，冷卻后備用。

鹽酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：稱取0.2 g鹽酸萘乙二胺，溶于100 mL水中，混勻后，置棕色瓶中，避光保存。

對(duì)氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：稱取0.4 g對(duì)氨基苯磺酸，溶于100 mL 20 %（體積分?jǐn)?shù)）鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。

亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液（供分光光度法使用）：吸取亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液（供離子色譜使用）1 mL，于500 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻備用。

2　試驗(yàn)與方法[10]

2.1離子色譜法

2.1.1提取

稱取豆芽試樣勻漿5 g，加入50 mL，到入100 mL試劑瓶中，用超聲波超聲提取30min。在80℃水浴中放置5min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾取部分溶液于10 000r/min離心機(jī)上離心20min，取上清液備用。

取備用的上清液約15 mL，通過0.22 μm水性濾膜針頭濾器、C18柱，棄去前面5 mL，收集后面洗脫液待測(cè)。

2.1.2色譜條件

色譜柱：氫氧化物選擇性，Dionex IonPac AS11-HC，4 mm×250 mm；淋洗液：氫氧化鉀溶液，濃度為6 mmol/L～70 mmol/L；洗脫梯度為6 mmol/L、35min，70 mmol/L、5min，6 mmol/L、5min；流速：0.8 mL/min；抑制器：連續(xù)自動(dòng)再生膜陰離子抑制器或等效抑制裝置；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器，檢測(cè)池溫度為35℃；進(jìn)樣體積：50 μL。

2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線

移取亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液，加水逐級(jí)稀釋，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，從低到高濃度依次進(jìn)樣，得到上述各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。以亞硝酸根離子的濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算線性回歸方程為y=0.792 4x-0.008，R2=0.999 6。

2.1.4精密度

精密吸取黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液分別進(jìn)樣5次，結(jié)果計(jì)算RSD范圍為0.8 %～1.4 %，均小于5 %。

2.1.5穩(wěn)定性

將亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液與黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液在測(cè)試條件下每隔15min檢測(cè)吸光度值，計(jì)算待測(cè)成分的含量，RSD范圍為2.5 %～3.1 %，均小于5 %，表明各溶液在1 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.1.6樣品測(cè)定

分別吸取空白和試樣溶液50 μL，在相同工作條件下，依次注入離子色譜儀中，記錄色譜圖。

2.1.7回收率

黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液，分別加入高、中、低濃度的亞硝酸鹽標(biāo)液，測(cè)定吸光度，并計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果回收率在99.8 %～105.6 %之間。

2.2分光光度法

2.2.1提取

稱5 g制成勻漿的豆芽試樣于50 mL燒杯中，加12.5 mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻之后用70℃左右的水200 mL將試樣洗入500 mL容量瓶中，在沸水浴中加熱30min，取出冷卻放置至室溫。

2.2.2提取液凈化

在振蕩上述提取液時(shí)加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，并加入5 mL乙酸鋅溶液，加水至刻度，搖勻，放置30min，除去上層脂肪，上清液用濾紙過濾，棄去初濾液50 mL，濾液備用。

2.2.3精密度

精密吸取黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液分別進(jìn)樣5次，結(jié)果計(jì)算RSD范圍為1.5 %～2.6 %，均小于5%。

2.2.4穩(wěn)定性

將亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液與黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液在測(cè)試條件下每隔15min檢測(cè)吸光度值，計(jì)算待測(cè)成分的含量，RSD范圍為2.7 %～3.4 %，均小于5 %，表明各溶液在l h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.5測(cè)定

吸取40.0 mL上述濾液于50 mL具塞比色管中，另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL具塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2 mL對(duì)氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置大約5min后各加入1 mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，搖勻，并靜置30min，于波長(zhǎng)538 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為y=0.015 7 x+0.018 2，R2=0.999 0。

2.2.6回收率

黃豆芽1號(hào)和綠豆芽1號(hào)的待測(cè)液，分別加入高、中、低濃度的亞硝酸鹽標(biāo)液，測(cè)定吸光度，并計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果回收率在96.3 %～98.7 %之間。

3　結(jié)果與討論

離子色譜法與紫外分光光度法分別測(cè)定豆芽中亞硝酸鹽含量結(jié)果見表1。

表1　樣品中亞硝酸鹽含量測(cè)定結(jié)果Table 1 Samples by nitrite content determination results

從表1中可知，測(cè)定30個(gè)黃豆芽樣品中亞硝酸鹽的含量均符合要求，沒有超過原農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY5317-2006《無公害食品芽類蔬菜》中規(guī)定，亞硝酸鹽的含量≤4mg/kg。其中離子色譜法測(cè)定30個(gè)黃豆芽中亞硝酸鹽的含量范圍為0.146 5 mg/kg～3.732 mg/kg，最高的為17號(hào)黃豆芽樣品，最低的為11號(hào)黃豆芽樣品，30個(gè)黃豆芽樣品中亞硝酸鹽含量平均值1.407 mg/kg；分光光度法測(cè)定30個(gè)黃豆芽中亞硝酸鹽的含量范圍為0.145 4 mg/kg～3.701 mg/kg，30個(gè)黃豆芽樣品中亞硝酸鹽含量平均值1.348 mg/kg。

從表1中可知，分光光度法測(cè)定30個(gè)綠豆芽樣品中亞硝酸鹽的含量均符合要求，沒有超標(biāo)。其中離子色譜法測(cè)定30個(gè)綠豆芽中亞硝酸鹽的含量范圍為0.012 36 mg/kg～0.753 9 mg/kg，最高的為25號(hào)綠豆芽樣品，最低的為5號(hào)綠豆芽樣品，30個(gè)綠豆芽樣品中亞硝酸鹽含量平均值0.116 8 mg/kg；分光光度法測(cè)定30個(gè)綠豆芽中亞硝酸鹽的含量范圍為0.012 31 mg/kg～0.748 6 mg/kg，30個(gè)綠豆芽樣品中亞硝酸鹽含量平均值0.113 5 mg/kg。

整體而言，60個(gè)豆芽樣品中的亞硝酸鹽含量均未超標(biāo)，符合要求，30個(gè)綠豆芽樣品中的亞硝酸鹽含量明顯低于30個(gè)黃豆芽中的亞硝酸鹽含量。離子色譜法測(cè)定的60個(gè)豆芽中的亞硝酸鹽含量均高于分光光度法測(cè)定的亞硝酸鹽含量，可知，離子色譜法是一種新型的分析方法，具有快速、敏捷、靈敏度高等特點(diǎn)，比分光光度法更適合離子的分析檢測(cè)。

4　結(jié)論

采用離子色譜法和分光光度法對(duì)市場(chǎng)上30個(gè)黃豆芽樣品和30個(gè)綠豆芽樣品進(jìn)行亞硝酸鹽檢測(cè)，樣品中亞硝酸鹽的含量均符合要求，沒有超標(biāo)，綠豆芽中亞硝酸鹽均值含量低于黃豆芽中的亞硝酸鹽含量。從試驗(yàn)可以看出，離子色譜法的精密度、穩(wěn)定性以及回收率結(jié)果均高于紫外分光光度法，結(jié)果表明離子色譜作為一種新型的色譜分離技術(shù)，比分光光度法更適合于亞硝酸鹽的檢測(cè)，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)。仍然建議相關(guān)部門應(yīng)采取有效的預(yù)防措施，來保障廣大人民群眾的菜籃子工程的安全。

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Determination of Nitrite Content in Yellow Bean Sprouts and Mung Bean Sprouts by Ion Chromatography and Spectrophotometry

SU Xiao-yan，MA Guang-lu，ZHANG Hai-fang
（Inner Mongolia Vocational College of Chemical Engineering，Hohhot 010070，Inner Mongolia，China）

Abstract：The bean sprouts on the market were determined by nitrite content.The contents of nitrite in the samples were determined by ion chromatography and spectrophotometry.The contents of nitrite in yellow bean sprouts and mung bean sprouts were different.Ion chromatography is a new type of chromatographic separation technology，and it is more suitable for the detection of nitrite，which is characterized by rapid，simple，sensitive and selective.

Key words：ion chromatography；spectrophotometry；bean sprouts；nitrite

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.05.029

作者簡(jiǎn)介：蘇曉燕（1982—），女（漢），講師，本科，研究方向：食品分析、儀器分析。

收稿日期：2015-10-30