鹽生海蘆筍抗菌內生細菌的篩選與鑒定

冉火苗，孔望君，蔣會芳，史雅凝，辛志宏

(南京農業大學 食品科技學院，江蘇 南京，210095)

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鹽生海蘆筍抗菌內生細菌的篩選與鑒定

冉火苗，孔望君，蔣會芳，史雅凝，辛志宏*

(南京農業大學 食品科技學院，江蘇 南京，210095)

摘要以抗菌活性為指標，從野生海蘆筍中篩選與鑒定具有抗菌活性的內生細菌。采用平板分離與斜面純化的方法，從海蘆筍中分離到13株內生細菌，經過對8株病原菌抗菌活性測試，菌株HLS-7和HLS-8對大腸桿菌(Escherichia coli)、金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)和白假絲酵母(Candida albicans)均顯示了較強的抑制活性，其抑菌圈直徑均>10 mm；對枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、產氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、單增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella penumoniae)均顯示了中等抗菌活性，表現出廣譜的抑菌活性。PCR擴增這2株菌的16S rDNA區域，單克隆后測序進行同源性分析，構建系統發育樹，結合形態學觀察和生理生化實驗，將菌株HLS-7和HLS-8分別鑒定慶生芽孢桿菌(Bacillus qingshengii)和甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)。通過電噴霧質譜分析這2株菌的發酵產物，結果顯示,菌株HLS-7可產生脂肽類化合物Fenycin和Iturin，菌株HLS-8可產生脂肽類化合物Iturin，提示這2株菌的抗菌活性可能源于脂肽化合物。

關鍵詞海蘆筍；內生細菌；抑菌活性；篩選鑒定；脂肽化合物

植物內生菌是天然生物活性物質的資源寶庫，特別是食藥兩用植物。研究表明，植物內生菌與宿主植物長期的生活過程中，形成了互惠互利的共生關系，能夠產生與宿主植物相似或相同的生物活性物質，如環肽類抗生素、皂苷、生物堿等。這為發現新型活性物質，保護稀有野生植物與可持續發展提供了有效途徑。MILLER等[1]從草本植物葉子和組織內發現了對微莢膜新隱球酵母(Cryptococcusneoformans)和白色念珠菌(Candidaalbicans)等病原菌有較強抑制作用的黃綠假單胞菌(Pseudomonasviridiflava)。該菌能產生兩種新型的脂多肽類抗生素Ecomycins，分子質量分別為1 153 Da和1 181 Da。何紅等[2]從辣椒體內分離到1株能在辣椒、白菜等植物體內定殖傳導并對多種植物病原真菌具有較強拮抗作用的枯草芽孢桿菌。該菌能夠產生一種環脂類抗菌肽，對多種植物病原真菌和細菌有較強的拮抗作用。因此，植物內生細菌是一類亟待開發的微生物資源，在生物防控、食品、制藥、農業生產等領域具有潛在的應用價值。

海蘆筍(Salicornia bigelovii Torr.)又稱海蓬子、海鹿茸、海蟲草、富貴菜等，為藜科鹽角草屬的1年草本鹽生植物，在我國、韓國和歐美均有分布[3]。海蘆筍有莖無葉耐鹽能力極強，其內莖的可溶性鹽分含量高達37%[4]。研究表明，海蘆筍營養豐富，含有多種必需氨基酸、維生素、微量元素、植物堿和植物鹽[5]。食用后其中的植物堿可與人體血液中的脂肪酸中和，能夠清除血管壁上的膽固醇，具有降血脂作用[6-8]。特別有趣的是海蘆筍不被蟲子捕食，提示其中可能含有較強的抗菌活性物質。

本研究以野生鹽生海蘆筍為研究對象，從中分離內生細菌，篩選具有抑菌活性的內生細菌，進一步探索海蘆筍內生菌與宿主之間的關系并深入挖掘具有抗菌活性的物質。

1材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1材料、試劑與培養基

野生鹽生海蘆筍，采自新疆鹽湖。

Taq酶及PCR相關試劑(包括dNTP與PCR Buffer等)，天根生化科技(北京)有限公司；Omega真菌基因組試劑盒(Fungal DNA Kit 50)及引物(16S F/16S R)，上海捷瑞生物工程有限公司；其他分析純試劑，南京壽德試劑器材有限公司。大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)、產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)、單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapenumoniae)和白假絲酵母(Candidaalbicans)，均購自于中科院微生物菌種保藏中心。

LB固體培養基：NaCl 10 g，酵母提取物5 g，胰蛋白胨10 g，瓊脂20 g，pH自然，蒸餾水1 000 mL。

牛肉膏蛋白胨培養基(NA培養基)：牛肉浸膏3 g，蛋白胨5 g，葡萄糖2.5 g，pH (7.0±0.1)，蒸餾水1 000 mL。

1.1.2儀器與設備

Microfuge 22R臺式微量冷凍離心機，美國Beckman公司；TP600型梯度PCR儀，日本TaKaRa公司；DYCP-31DN電泳儀，北京市六一儀器廠；JS-380C全自動數碼凝膠成像分析儀，上海培清科技有限公司；Agilent 5975C型MS儀，美國安捷倫科技有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1內生細菌的分離純化

在無菌操作下，取1根野生海蘆筍，依次經過75%乙醇、1%次氯酸鈉和75%乙醇各浸泡1 min，然后用無菌水漂洗3次，無菌吸水紙干燥。用滅菌后的剪刀將其剪成7～9 mm小段，放在LB平板上，每板3～5根，于37 ℃恒溫培養至莖末端長出菌落，將細菌轉移到新的平板培養基上劃線分離得到單個菌落，然后轉移到LB斜面試管中，4 ℃保存，備用。

1.2.2抑菌活性測定(濾紙片法)

將分離得到的菌株活化后挑取單菌落接種于NA培養基中，37 ℃，120 r/min下振蕩發酵培養6 d。將發酵液用80%丙酮-水(v/v)溶液浸泡提取1 h，過濾后的菌絲體再用丙酮-水溶液重復提取2次后，合并提取液，減壓濃縮至不含丙酮后，用蒸餾水溶解，過濾后測試抑菌活性，平行重復3次，同時，分別以制霉素和鏈霉素作為陰性對照及陽性對照，將上述平板于37 ℃培養24 h 后觀察并測量抑菌圈的直徑。

1.2.3形態學觀察

從保藏菌種的斜面培養基中挑取菌落轉接到LB平板培養基中間位置，37 ℃培養1～3 d，觀察菌落大小、顏色、質地等形態特征。

1.2.4菌株生理生化特性測定

參考文獻([9-11])測定菌株的生理生化特征。

1.2.5基因組DNA的提取

挑單菌落接種到10 mL LB培養基中37 ℃振蕩過夜培養。取2 mL培養液到2 mL Eppendorf管中，8 000 r/min離心2 min后倒掉上清液。加140 μL TE打散細菌，再加入60 μL 10 mg/mL的溶菌酶。37 ℃放置10 min。加入400 μL Digestion Buffer，混勻。再加入3 μL Protein K，混勻，55 ℃溫育5 min。加入260 μL乙醇，混勻，全部轉入UNIQ-10柱中。10 000 r/min離心1 min，倒去收集管內的液體。加入500 μL 70%乙醇(Wash Solution)，10 000 r/min離心0.5 min。重復上一步驟。再10 000 r/min離心2 min徹底甩干乙醇。吸附柱轉移到一個新的1.5 mL的離心管。加入50 μL預熱(60 ℃)的洗脫緩沖液，室溫放置3 min。12 000 r/min離心2分鐘，收集DNA 濾液。提取的基因組DNA 在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測(120 V，30 min)，EB(溴化乙錠)染色。4 ℃保存備用，或于-20 ℃環境下長期保存。

1.2.616S rRNA基因片段的PCR擴增

16S區域的擴增選擇細菌16S rRNA的通用擴增引物16S(F)(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’) /16S(R)(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)，PCR反應條件為預變性94 ℃ 3 min，變性94 ℃ 30 s，退火45 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 1 min 40 s，共35個循環，最后延伸72 ℃ 7 min[12]。

1.2.716S rRNA序列克隆測序

采用TaKaRA DNA提取試劑盒Ver 3.0回收PCR產物，純化的PCR產物與pMD19-T載體連接，然后轉化至大腸桿菌DH5α制備的感受態細胞中。在-70 ℃保存的100 μL感受態細胞E.coli DH5α中加入10 μL連接產物，冰中放置30 min，取出后42 ℃熱激90 s，加入890 μL LB液體培養基37 ℃振蕩培養1 h。菌液涂布于含氨芐青霉素AMP(100 μg/mL)的LB培養基平板，倒置過夜培養，挑取白色單菌落培養。取0.5 μL菌液直接做PCR，引物為M13RV和M13-47，電泳檢測是否含有目的片段。PCR采用25 μL的反應體系，包括13.75 μL ddH2O，7.5 μL PCR Buffer(10×，Mg+plus)，2 μL dNTP(2.5 mmol/L each)，0.5 μL Primer-F(20μmol/L)，0.5 μL Primer-R(20μmol/L)，0.5 μL DNA，0.25 μL Taq polymerase(5U/μL)。

1.2.8目的DNA序列的測序和系統發育學分析

PCR擴增菌株的16S r DNA，切膠回收目的條帶與載體連接后于感受態細胞中表達，挑取陽性克隆子送上海美吉生物有限公司測序。將獲得的序列于EzTaxon[13](http://eztaxon-e.ezbiocloud.net)數據庫中進行同源性搜，下載同源性最高的基因序列，利用ClastalX(1.83)軟件[14]進行多重比對分析，使用MEGA6.0軟件[15]和Neighbor-Joining(N-J)法[17]構建系統發育樹，自展值1 000。

1.2.9質譜測定方法

將分離得到的菌株發酵7 d，丙酮提取發酵產物，過濾后直接進樣分析。質譜參數：電噴霧離子源(ESI)，離子源溫度500 ℃，氣簾氣25.0 psi，噴霧電壓5 500.0 V，離子源氣1: 55.0 psi，離子源氣2: 50.0 psi。

2結果與分析

2.1海蘆筍內生菌分離及抑菌活性篩選結果

采用表面消毒方法從海蘆筍植株樣本中分離出13株內生細菌，用濾紙片法[18]對內生細菌次生代謝產物的抑菌活性進行測試，結果如表1所示。在13株測試菌株中，菌株HLS-7和HLS-8對大腸桿菌、金色葡萄球菌、恥垢分枝桿菌和白假絲酵母表現出較強的抑制活性，其抑菌圈直徑均>10 mm(圖1)，提示這2株菌可能產生具有抗菌作用的活性物質。

2.2菌株形態學鑒定

菌株HLS-7幼齡菌落為圓形，表面和邊緣光滑，呈白色不透明狀。30 ℃培養3d后，菌落呈凸狀隆起，顏色仍為白色。菌株HLS-8幼齡菌落為圓形，表面和邊緣光滑，呈白色，不透明，37 ℃培養3d后，菌落形狀不規則，邊緣不整齊，表面干燥褶皺，菌落顏色略微變黃(見圖2)。

表1　海蘆筍內生細菌抑菌試驗結果(n=3)

注: A-大腸桿菌; B- 枯草芽孢桿菌; C- 金色葡萄球菌; D-恥垢分枝桿菌; E-產氣腸桿菌; F-單增李斯特菌; G-肺炎克雷伯菌; H-白假絲酵母;- : 無活性; + : 抑菌圈直徑< 10 mm; + + : 抑菌圈直徑10 ～ 15 mm; + + + : 抑菌圈直徑> 15 mm。

a-大腸桿菌; b-金色葡萄球菌; c-恥垢分枝桿菌; d-白假絲酵圖1　內生細菌的抗菌活性Fig.1　Antibacterial activity of the fermentation broth of endophytic bacteria

圖2　內生細菌的菌落特征Fig.2　The morphological characters of the endophytic bacteria

2.3菌株生理生化特性

2.3.1碳源的利用

菌株HLS-7、HLS-8對碳源的利用情況如表2所示。從中可見菌株HLS-7能利用D-葡萄糖、蔗糖、甘露醇、D-乳糖和D-木糖，不能利用D-果糖和半乳糖。菌株HLS-8能利用D-葡萄糖、蔗糖、甘露醇、D-果糖、半乳糖和D-木糖，不能利用D-乳糖。通過與文獻比較，發現菌株HLS-7和HLS-8分別與B. qingshengii[19]和B. methylotrophicus[20—21]的碳源的利用情況基本一致。

2.3.2理化指標

菌株HLS-7、HLS-8的生理生化實驗結果如表3所示。從中可見菌株HLS-7為革蘭氏陽性菌，無運動性，最適生長溫度為30 ℃，最適pH為7，耐鹽范圍為2%～10%；氧化酶、接觸酶、酪素水解、淀粉水解、檸檬酸利用和明膠液化反應均為陽性；甲基紅、V-P試驗和硝酸鹽還原反應為陰性。菌株HLS-8為革蘭氏陽性菌，有運動性，最適生長溫度為30 ℃，最適pH為7，耐鹽范圍為2%～7%；氧化酶、接觸酶、酪素水解、淀粉水解、明膠液化反應、V-P試驗和硝酸鹽還原均為陽性，甲基紅、檸檬酸利用反應為陰性。通過與文獻比較，發現菌株HLS-7 和HLS-8分別與B. qingshengii[19]和B. methylotrophicus[20-21]的生理生化指標基本一致。

表2　菌株HLS-7和HLS-8與模式菌株B. qingshengii和

注“+”表示利用；“-”表示不利用；“NR”表示未見報道。

表3　菌株HLS-7和HLS-8與模式菌株B. qingshengii和

注“+”表示陽性反應；“-”表示陰性反應；“NR”表示未見報道。

2.4菌株 HLS-7、HLS-8 的16S rDNA 基因序列

擴增菌株 HLS-7、HLS-8的 16S rDNA 基因序列，得到了長度約 1.5 kb 的擴增片段，其電泳結果如圖 3 所示。目的片段經克隆后測序，測得菌株 HLS-7的16S rDNA為1392 bp，菌株 HLS-8的16S rDNA為1583 bp，與普通細菌的16S rDNA 基因片段大小基本一致。將二者序列分別于GenBank數據庫中注冊，獲得序列號分別為KT999392和KT999393。

圖3　菌株HLS-7、HLS-8的16S rRNA基因片段擴增圖譜Fig.3　PCR production of a fragment of 16S rRNA from HLS-7，HLS-8

2.5系統發育學分析

將菌株HLS-7的16S rRNA序列在EzTaxon數據庫中進行同源性搜索，下載同源性較高菌株的16S rRNA基因序列，使用ClustalX (1.83) 軟件進行多序列分析，并通過MEGA 6.0 軟件構建系統進化樹(圖4)。從系統發育樹中可以看出，菌株HLS-7與B.qingshengiiG19T(JX293295)聚為一枝，表現出較近的親緣關系，相似度為100%。因此將其初步鑒定為慶生芽孢桿菌(B. qingshengii)。

圖4　基于16S rRNA 基因序列構建的系統發育樹Fig.4　Neighbor-Joining phylogenetic tree based on partial 16S rRNA sequences

將菌株HLS-8的16S rRNA序列在EzTaxon數據庫中進行同源性搜尋，下載同源性較高菌株的16S rRNA基因序列，使用ClustalX (1.83) 軟件進行多序列分析，利用MEGA 6.0 軟件構建系統進化樹(圖5)。從系統發育樹中可以看出，菌株HLS-8與B. methylotrophicus CBMB205T(EU194897)聚為一枝，表現出較近的親緣關系，相似度為100%。因此將其初步鑒定為甲基營養型芽孢桿菌(B. methylotrophicus)。

綜合形態學鑒定、生理生化特征和16S rDNA序列分析結果，將菌株HLS-7鑒定為細菌界Bacteria、厚壁菌門Firmicutes、細菌綱Bacilli、芽孢桿菌目Bacillales、芽孢桿菌科Bacillaceae、芽孢桿菌屬Bacillus、慶生芽孢桿菌B. qingshengii；將菌株HLS-8鑒定為細菌界Bacteria、厚壁菌門Firmicutes、細菌綱Bacilli、芽孢桿菌目Bacillales、芽孢桿菌科Bacillaceae、芽孢桿菌屬Bacillus、甲基營養型芽孢桿菌B. methylotrophicus。

2.6抗菌產物成分初步分析

將株菌HLS-7和HLS-8發酵7 d后，丙酮提取發酵產物濃縮蒸干后，用適量蒸餾水溶解，于ESI-MS進行分析，結果如圖6所示。從圖6A中可見，菌株HLS-7的粗提物在m/z 1 135.7、1 020.9、1 034.9、1 035.9處出現碎片離子峰，為Iturin類化合物的特征分子離子質量，提示發酵產物中可能存在Iturin類化合物，另外，在m/z 1 480.9處出現碎片離子峰，可能是Fenycin的分子離子質量，提示發酵產物中可能存在Fenycin類化合物。從圖6B中可見，菌株HLS-8的發酵產物在m/z 1 020.9、1 034.9、1 035.9 處出現碎片離子，為Iturin類化合物的特征分子質量，提示發酵產物中可能存在Iturin類化合物。

3討 論

內生菌能夠產生結構新穎、活性多樣的生物活性物質，這為利用微生物培養與發酵技術挖掘新型活性物質提供了有效途徑。1993年STIERLE[24]首次從短葉紅豆杉(Taxusbreviflia)中分離得到1株能合成抗癌物質紫杉醇的內生真菌Taxomycesandreanae，從其發酵產物中提取到紫杉醇。這為解決紅豆杉生長緩慢且紫杉醇產量低的問題提供了新的途徑。WICKLOW等[24]從玉米種分離得到1株內生真菌Acremoniumzeae，首次從該菌中分離出抗菌物質pyrrocidines A和B。此類抗生素對黃曲霉和枯萎病菌有抗菌活性，可防止霉菌污染，有效提高玉米產量。張俊楠等[24]從鹽生海蘆筍中分離得到1株具有抑菌活性的內生真菌Fusariumtricinctum，對其發酵產物進行分離提取，從中得到化合物fusartricin(1)、fusarielin B(2)和enniatin B(3)，其中fusartricin(1)是一種新型的倍半萜醚類化合物，對E.aerogenes，M.tetragenu和C.albicans有較強的抑制活性，fusarielin B(2)和enniatin B(3)也均顯示出廣譜抑菌活性，這為挖掘對人體有益的活性物質提供了理論基礎。因此，從植物中分離內生菌，挖掘活性次級代謝產物已經成為農業、生物制藥與功能食品研究領域的熱點。

從植物內生菌分離出的生物活性物質中約有51%的新型化合物，其中多種化合物具有廣譜抑菌活性，這對開發新型抗菌物質極具研究價值[26]。芽孢桿菌作為一種常見的植物內生細菌，也是活性化合物的重要來源。芽孢桿菌能夠對熱、紫外線、鹽堿環境和某些化學藥品產生強抗性的芽孢，因此能夠忍受很多不良的生長環境[27]。由于這些特殊的生物學特征，芽胞桿菌能夠產生多種活性物質，如多肽、環肽、脂肽、脂肽抗生素、蛋白酶類、大環內酯類及香豆素類等，其中，有些活性物質已廣泛應用于醫藥業及工農業[28]。

本研究從野生海蘆筍中分離純化得到13株內生細菌。采用濾紙片法對內生細菌次生代謝產物的抑菌活性進行評價，篩選得到2株對8種受試致病菌具有較強抑制活性的內生細菌HLS-7和HLS-8，通過培養特征、生理生化特征觀察與分子生物學相結合的方法，對分離自海蘆筍的2株具有廣譜抑菌活性的內生細菌進行鑒定。提取菌株基因組DNA后，擴增16S rDNA基因片段并測序，測序結果在EzBioCloud數據庫進行有效種的序列相似性搜索，構建16S rDNA基因序列進化樹。根據進化樹結果，結合培養特征、生理生化特征，將菌株HLS-7鑒定為慶生芽孢桿菌B.qingshengii，HLS-8鑒定為甲基營養型芽孢桿菌B. methylotrophicus。但目前國內外對于這兩類菌株的報道均較少。

圖5　基于16S rRNA 基因序列構建的系統發育樹Fig.5　Neighbor-Joining phylogenetic tree based on partial 16S rRNA sequences

圖6　HLS-7 (A)和HLS-8 (B)發酵產物質譜圖Fig.6　Mass spectrum diagram for HLS-7 (A) and HLS-8(B)

B.qingshengii是XI等[19]在2014年從風化巖(凝灰巖)表面分離出1株芽孢桿菌屬的新成員，該菌株為需氧菌，呈革蘭氏陽性，棒狀，形成內生孢子，表現為過氧化氫酶和氧化酶陽性。目前該菌種僅在巖石表面分離得到[19]，本研究首次以鹽生海蘆筍為來源分離出該菌，發現其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等多株病原菌有良好的抑菌活性，通過對其發酵產物的初步鑒定，推測該菌株能夠產生具有顯著抗菌活性的脂肽類化合物Fenycin和Iturin，提示B.qingshengii的抗菌活性可能源于抗菌脂肽。

B.methylotrophicus是1株極具開發前景的微生物菌株，近年來受到廣泛關注。研究發現該菌具有特殊的代謝機制，能夠產多種抑菌活性物質。姜云等[29]發現B.methylotrophicus能夠產生一種具有抗紫外線、耐熱、耐酸堿和耐蛋白酶降解的抗菌蛋白，而且，該蛋白對人參銹腐病菌有較強拮抗作用，能夠有效防治人參銹腐病。呂倩等[30]從南海深海中分離出1株B.methylotrophicus，該菌能夠產生多種抗菌脂肽，具有較強抑制黃瓜炭疽病菌、立枯絲核菌、黃瓜枯萎病菌等植物病原真菌的作用。本研究首次從鹽生海蘆筍中分離鑒定到該菌，發現其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等多株病原菌有較強的抑菌活性，通過對其代謝產物初步分析，推測該菌能夠產生脂肽類化合物Iturin，提示B.methylotrophicus的抗菌活性可能源于抗菌脂肽。

海蘆筍內生細菌由于生活在高鹽環境，在長期的進化過程中，形成了獨特的代謝機制，能夠產生具有特殊生物活性的酶類，催生結構新穎、活性獨特的次級代謝產物。本研究以抑菌活性為指標，對鹽生海蘆筍中的內生細菌發酵液進行抑菌作用研究，其目的在于篩選出能夠產生較強抑菌活性物質的菌株HLS-7和HLS-8。今后將這2株菌的次級代謝產物進行大量發酵，通過分離純化技術，進一步研究其中的單體化合物結構，為深入揭示內生細菌和宿主海蘆筍之間的關系以及挖掘新型抗菌活性物質提供理論依據。

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Isolation and identification of endophytic bacteria fromSalicorniabigeloviiTorr. and their antimicrobial activities

RAN Huo-miao, KONG Wang-jun, JIANG Hui-fang, SHI Ya-ning, XIN Zhi-hong*

(College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

ABSTRACTBased on the antimicrobial bioassay-guided screening, 13 endophytic bacteria were isolated from Salicornia bigeloviiTorr. by spread plate and slant culture methods. The antimicrobial activities of these isolates were tested against 8 strains of pathogens. Among the 13 tested isolates, the isolate HLS-7 and HLS-8 showed strong inhibitory activities against E. coli, S. aureus, M. smegmatis and C. albicans with the inhibition zone diameters more than10 mm, meanwhile showed a broad-spectrum antimicrobial activities against B. subtilis, E. aerogenes, L. monocytogenes and K. penumoniae. The 16S rDNA region of these two isolates were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and were subjected to monoclone，sequencing and homology analysis， their phylogenetic trees were established as well. Combined with physiological and biochemical experiments, these two isolates were identified as B. qingshengii and B. methylotrophicus, respectively. The electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) analysis of the fermentant products indicated that the isolate HLS-7 could highly produced cyclic lipopeptides Fengycin and Iturin，whereas the strain HLS-8 produced Iturin，suggesting that the antimicrobial activities of these two isolates probably derived from cyclic lipopeptides．The current study lays the foundation for further revealing of the relationship between the endophytes and its host as well as mining of active components with antimicrobial activities.

Key wordsSalicornia bigelovii Torr.; endophytic bacteria; antimicrobial activity; identification; lipopeptide

收稿日期：2015-10-21，改回日期：2015-12-03

基金項目：2015年農產品質量安全風險評估項目(GJFP2015012)

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201603014

第一作者：碩士研究生(辛志宏教授為通訊作者，E-mail：xzhfood@njau.edu.cn)。