慶城縣秋季牛口蹄疫免疫抗體水平檢測與分析

李靜靜　高技科

摘 要：為準確掌握2015年慶城縣秋季牛口蹄疫防疫工作成效，客觀評價防疫質量，確保全縣養牛業健康、穩定、持續發展，在慶城縣17個鄉鎮隨機采集部分牛血清，用間接血凝方法檢測牛口蹄疫免疫抗體。結果表明，慶城縣秋季牛口蹄疫整體免疫水平較好，但各鄉鎮散養牛免疫抗體水平不均衡，免疫效果差距明顯，仍存在發生流行口蹄疫疫情的隱患。通過分析個別鄉鎮免疫質量不佳的原因，對提高牛口蹄疫免疫水平措施進行了探討，以期能為有效提高牛口蹄疫免疫抗體水平提供依據。

關鍵詞：牛口蹄疫；間接血凝試驗；免疫抗體水平；慶城縣

中圖分類號 S855.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）07-109-03

Abstract：In order to accurately grasp the effectiveness of the autumn bovine foot-and-mouth disease prevention，evaluate the quality of immunization，and ensure the healthy，stable and sustainable development of cattle industry，some bovine serum were collected randomly in 17 townships of Qingcheng County，with indirect hemagglutination method for detecting bovine foot-and-mouth disease immune antibody.The results showed that the whole immune level of the cattle foot-and-mouth disease was better，but scattered cattle antibody level was not balanced，the gap between the immune effect was obvious，there still existed the epidemic of foot-and-mouth disease risks.By analyzing the causes of the poor quality of immunity in individual villages and towns，the measures to improve the level of immune bovine FMDV were discussed in order to provide some reference for the research of improve immunity the antibody level of foot-and-mouth disease in cattle.

Key words：Bovine foot-and-mouth disease；Indirect hemagglutination test；Immune antibody level；Qingcheng County

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染性疫病，其易感動物多達70多種，主要以牛、豬、羊等偶蹄動物為主，發病率和死亡率均非常高，經濟損失巨大，是目前危害養殖業健康發展的主要疫病之一[1]。近年來通過貫徹實施預防為主的防制策略，牛口蹄疫大面積流行和暴發流行已經得到了有效控制。慶城縣以春秋集中免疫和適時補針相結合，規模場按程序免疫等方法對健康成年牛每頭2mL肌注進行免疫接種，達到預防為主，控制口蹄疫疫情發生的目的。接種疫苗為口蹄疫O型、亞洲I型二價滅活疫苗（生產廠家為中農威特生物科技股份有限公司，生產批號為N150504J，2～8℃保存）。為掌握基層秋季集中免疫效果，慶城縣預防控制中心于2015年10月在慶城縣17個鄉鎮隨機采集部分牛血清，用間接血凝方法檢測牛口蹄疫抗體，旨在為今后防疫決策提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源 牛血清335份（其中散養戶170份，養殖場165份），隨機采集于慶城縣17個鄉鎮的農村散養戶和3個規模養殖場（其均用口蹄疫O型、亞洲I型二價滅活疫苗免疫。血清無膠凍、無溶血、血清經離心吸取上層血清液備用。

1.1.2 診斷液 口蹄疫O型間接抗體檢測試劑盒（口蹄疫O型血凝抗原、口蹄疫O型陽性對照血清、口蹄疫O型陰性對照血清、稀釋液、封板膜），購自于中國農業科學院蘭州獸醫研究所。生產批號：20150924201。

1.1.3 試驗器材 96孔110°V型血凝板、單道移液器及槍頭、8道移液器及槍頭、離心機、微量振蕩器等。

1.2 方法 根據《口蹄疫診斷技術》（GB/T18935—2003），嚴格按照說明書操作，室溫靜置觀察結果。

1.2.1 加稀釋液 在96孔110V型血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和5～7孔，加稀釋液50μL/孔。

1.2.2 稀釋待檢血清 取經56℃水浴滅活30min滅活的待檢血清樣品50μL，分別加入反應板1～6排的第一孔中，與稀釋液混勻后，吸取50μL，加于第2孔中，以此做2倍系列稀釋至第10孔，第10孔混勻后取出50μL棄去。

1.2.3 稀釋陽性對照血清 在血凝板的第7排第1孔加陽性血清50μL，2倍系列稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出50μL丟棄。此時被檢血清和陽性血清的稀釋倍數依次為1∶2～1∶1 024。

1.2.4 稀釋陰性對照血清 在血凝板的第8排第1孔加陰性血清50μL，對倍稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50μL丟棄。此時陰性血清的稀釋倍數依次為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，第5～7孔為稀釋液對照，每孔加入50μL稀釋液。

1.2.5 加血凝抗原 血清稀釋孔和對照孔加血凝抗原（充分搖勻，瓶底應無血球沉淀）25μL/孔。將反應板置微型振蕩器上震蕩2～3min，直至血球分布均勻。封板膜封板，室溫下靜置2～3h，在對照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，記錄各孔凝集情況。

1.2.6 判定標準 將血凝板放在白紙上，陽性血清抗體效價≥1∶256、陰性血清≤1∶16、稀釋液對照孔無自凝現象時，試驗成立。觀察待檢血清各孔，以呈現“++”血凝反應的血清最高稀釋度作為該份血清的間接血凝抗體效價。接種牛口蹄疫免疫效價≥1∶256為免疫合格。

2 結果與分析

2.1 各鄉鎮牛口蹄疫免疫抗體水平不均衡，免疫效果差距明顯 由表1可以看出，慶城縣整體牛口蹄疫免疫抗體水平較好，達到77.65%，高于農業部規定的70%標準；驛馬、赤城、桐川和南莊4個鄉鎮免疫抗體合格率達到100%，馬嶺、玄馬、熊家廟3個鄉鎮免疫合格率達到90%以上，但太白梁、卅鋪、葛崾峴、蔡家廟4個鄉鎮抗體合格率未達到國家規定標準，而慶城鎮牛口蹄疫免疫水平只有30%的合格率。由此可以看出，各鄉鎮之間牛口蹄疫抗體免疫水平不均衡，免疫效果差距明顯，抗體水平低的鄉鎮仍然存在發生流行牛口蹄疫疫情的風險。

2.2 規模養殖場存在安全隱患 從表2可以看出，2個養殖場免疫合格率達到國家規定標準以上，麗園和慶賢養殖場達到100%和80%以上，而越達合格率僅僅只有40%，表明部分養殖場仍然存在發牛口蹄疫疫情的隱患。

2.3 慶城縣牛口蹄疫檢測抗體免疫效價分析 從表3可以看出，牛口蹄疫抗體效價≥1∶256的有176份，占82.39%，說明秋季集中牛口蹄疫免疫效果較好；抗體效價≤1∶64的有36份，占10.75%，1∶128的有23份，占6.87%。說明部分鄉鎮免疫效果依然很差，需要進一步采取補免等措施，提高免疫抗體水平，確保免疫效果。

3 討論與建議

3.1 討論 通過本次調查研究表明，慶城縣大部分鄉鎮抗體免疫效果均較好，但仍存在個別鄉鎮免疫效果較差的情況，其免疫抗體效果與質量需進一步加強與提高。究其原因：（1）疫苗因素：疫苗運輸、貯藏等不符合要求，造成疫苗失效，從而降低免疫質量；（2）接種人員因素：集中免疫期間，防疫員少、養殖分散、工作任務大，免疫操作不規范，例如疫苗接種劑量、“打飛針”、注射部位不正確、注射部位未消毒等因素影響免疫質量；（3）免疫程序不合理，未制定正確免疫程序，不進行二次加強免疫等導致免疫效果差；（4）動物因素：免疫時動物本身不健康，有病或免疫力低下導致免疫不成功。

3.2 建議

3.2.1 堅持集中免疫與適時補針相結合，切實提高免疫密度 慶城縣牛養殖方式目前仍以農戶散養為主，必須提高散養牛群口蹄疫免疫密度與質量，才能有效地控制該疫病的發生與流行，尤其是新補欄、免疫不合格和漏免牛，一定要落實村級防疫員“適時補針”政策。狠抓春秋兩防，及時掌握集中免疫進展情況，各鄉鎮要認真填寫《動物免疫進度表》，每周星期四向市獸醫局上報一次免疫進展情況，直至春秋防疫工作結束為止。同時，做到常年免疫、定期補針，必要時二次加強免疫，使免疫真正達到“村不漏戶，戶不漏畜，畜不漏針”。

3.2.2 全面規范免疫檔案管理，積極推行疫病可追溯制度 要認真推行動物標識制度，建立健全免疫檔案，嚴格按照《慶陽市重大動物疫病免疫檔案》的規范要求，認真填寫免疫信息，切實做好免疫檔案的規范管理。作好養殖場戶和養殖小區的養殖檔案管理，指導畜禽養殖場戶全面、準確地記錄養殖信息，努力實現“全程監管、有據可查”，從源頭上保證牛及其產品質量安全。

3.2.3 加強技術培訓，加大投入力度 各鄉鎮在春季集中免疫開始前，必須對村級防疫員進行崗前培訓，采取集中培訓和現場演示相結合的方法，就各類疫苗的稀釋比例、注射劑量、注射部位、保存要求、耳標佩帶、檔案填寫、注意事項等方面進行詳細的培訓和演示，直到防疫員全部熟練掌握為止，以保證集中免疫實現高密度、高質量。同時，加大對基層防疫工作的投入，增加財政預算，落實經費，完善鄉鎮、村級防疫冷鏈設備，使疫苗貯藏與運輸都要按規定的要求進行，保證疫苗質量。

3.2.4 加強動物疫情監測和報告工作，及時掌握疫情動態 堅持日常監測與應急監測相結合，全面監測和定點監測相結合的方法，進一步加強對口蹄疫的監測工作，加大對規模養殖戶、養殖小區、活畜交易市場、定點屠宰場等重點部位和區域的監測頻次，客觀評價免疫效果，及時掌握牛流行動態，及時補免和消除疫情隱患，并指導養殖戶制定切實有效的免疫程序[2]。

3.2.5 加強動物檢疫工作，嚴格監督執法檢查 落實基層檢疫人員開展散養與規模場的產地檢疫工作，從源頭上遏制未經免疫、免疫不合格的牛流入市場。對沒有執行國家重大動物強制免疫政策或免疫抗體水平檢測不達標牛，要嚴格按照“不出證、不容許流通、不容許屠宰”的原則嚴把檢疫關口，促使牛養殖戶全面落實免疫，達到“以檢促防”的目的[3]。

參考文獻

[1]董志強，張志，李曉成，等.口蹄疫檢測技術研究進展[J].中國動物檢疫雜志，2007，24（3）.

[2]王輝，劉偉，賈松濤，等.對動物免疫抗體檢測工作的幾點建議[J].中國動物檢疫雜志，2014，31（8），63-64.

[3]李常挺，牛金濤，彭群明，等.2009年隆安縣春防豬瘟抗體水平監測[J].廣西農業科學，2010，41（1），74-76.

（責編：張宏民）