貴州短翅豆芫菁體內不同部位斑蝥素分布研究

2016-05-03 16:24:16楊鳳軒欽忠周建威

江蘇農業科學 2016年3期

楊鳳軒+欽忠+周建威

摘要：貴州短翅豆芫菁是貴州地區特有的藥用昆蟲，體內含有斑蝥素，但成蟲體內不同部位斑蝥素含量不同。采取索氏提取法提取短翅豆芫菁不同部位的斑蝥素，用氣相色譜儀定量測定。結果表明：（1）成蟲不同部位所需提取時間不同：頭部、四肢、翅膀需要12 h提取，胸部需要20 h提取，腹部需要40 h進行提取。（2）成蟲的腹部斑蝥素含量最多，其次是胸部，再次之為頭部、四肢和翅膀。（3）自然死亡的成蟲體內總斑蝥素的百分含量比活體成蟲體內的高。

關鍵詞：短翅豆芫菁；斑蝥素；含量；不同部位；提取時間

中圖分類號： R282.74 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）03-0310-02

貴州短翅豆芫菁[1-2]是貴州地區獨有一種斑蝥類藥用昆蟲[3-4]，也是中國特有的19種斑蝥類昆蟲之一。貴州短翅豆芫菁體內所含斑蝥素[5]，是芫菁科昆蟲特有的一種單萜類防御攻擊物質，治療肝癌，療效顯著，從而引起醫藥界的密切關注。斑蝥素的化學立體構型屬于外型，1，2-順-二甲基-3，6-氧橋六氫化鄰苯二甲酸酐，是白色的片狀結晶物質，是斑蝥酸的內酐。近年來，對斑蝥素的研究主要集中在生物合成[6-7]、功能、毒性[8]、生理、抗癌機制[9]、藥理學[10]和應用[11]，而對斑蝥素在成蟲蟲體不同部位的分布研究較少。本研究通過對貴州短翅豆芫菁成蟲不同部位斑蝥素含量的測定[12-14]，確定斑蝥素在短翅豆芫菁體內的分布情況，為進一步認識短翅豆芫菁提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1 測定儀器與試劑

（1）日本島津GC-14C氣相色譜儀。色譜條件：色譜柱是OV-17填充柱[苯基（50%）甲基硅氧烷，最高使用溫度340 ℃，擔體80～100目]；氫氣壓力60 kPa；空氣壓力40 kPa；儀器靈敏度為1；載氣為高純氮氣；檢測器（FID）溫度為230 ℃；色譜柱溫度為165 ℃；進樣口溫度為230 ℃；進樣量 2 μL。（2）質譜儀為島津GC-MS2010。1701柱，進樣口溫度250 ℃，離子源溫度250 ℃，進樣量0.5 μL，氮氣流速20 mL/min，分流比20 ∶ 1。（3）核磁共振儀INVOA-400。共振頻率：（OBSERVE）H-1，399.9 MHz；溶劑：CDCl3（氘代三氯甲烷）。測試條件：弛豫時間5.0 s，脈沖角45.0度，采樣時間5.122 s，譜寬3 679.9 Hz，累加次數32次。（4）分析天平（上海精科分析儀器廠）。（5）分析純三氯甲烷，分析純丙酮，分析純鹽酸；氘代三氯甲烷，氮氣。（6）斑蝥素標準品，由北京中國生物制品檢定所提供。（7）短翅豆芫菁成蟲采自貴州省貴陽市花溪區及惠水地區，采后在貴州師范大學自然科學應用研究所內飼養。

1.2 短翅豆芫菁來源與鑒定

成蟲采自貴州省貴陽、惠水等地區，經貴陽醫學院昆蟲學專家陳漢彬教授鑒定，鑒別結果為短翅豆芫菁，隸屬鞘翅目芫菁科。

1.3 斑蝥素的定性鑒定

純品制備：取自然風干的短翅豆芫菁成蟲用丙酮、三氯甲烷（體積比為1 ∶ 10）及少量濃鹽酸的混合溶液（pH值在 0.5～1.0）于索氏提取器上沸騰回流12 h，濾去殘渣，將溶液濃縮近干，用石油醚和無水乙醇洗滌重結晶法制得白色片狀結晶物質。用質譜及核磁共振譜儀進行定性分析。

1.4 成蟲體內不同部位斑蝥素的提取方法

取200只短翅豆芫菁活體，按頭、胸、腹、四肢、翅膀等不同身體部位用100 mL丙酮、三氯甲烷及少量濃鹽酸的混合溶液（pH值在0.5～1.0）于索氏提取器上沸騰回流提取。過濾，洗滌，將濾液定容至100 mL。

2 結果與討論

2.1 斑蝥素的定性分析

2.1.1 質譜用離子源直接進樣分析斑蝥素，質譜分析數據如下：128（100），110（10. 42），96（67.13），70（38.89）（圖1），與譜庫中斑蝥素標準圖譜相符。

2.1.2 核磁共振譜（H1NMR）核磁共振圖譜是：1 237（s，6H，CH3×2）；4 717（m，2H，CHOHC）；1 730～1 811（d，4H，CH2×2），與譜庫中斑蝥素標準圖譜相符（圖2、圖3）[15]。由提取物的質譜及核磁共振譜可知，此提取物就是斑蝥素，即短翅豆芫菁體內亦可分泌有效成分斑蝥素。

2.2 氣相色譜分析

由斑蝥素提取物的氣相色譜譜圖可知，保留時間tR=10.015 min，與斑蝥素標準品氣相色譜譜圖上的保留時間 tR=10.019 min相符（圖4、圖5）。

2.3 成蟲體內不同部位提取時間比較

由表1、圖6知，對頭部、四肢、翅膀的提取，12 h后斑蝥素的含量已經趨于恒定，無需延長提取時間；胸部的提取需要20 h，腹部的提取需要40 h。以下提取試驗均按照頭部、四肢、翅膀12 h提取，胸部20 h提取，腹部40 h提取。

2.4 成蟲體內不同部位斑蝥素含量的比較

2.4.1 活體成蟲各部位斑蝥素含量的比較由表2得出，活體成蟲中腹部斑蝥素的含量最高，其次是胸部，最少的是翅膀。提取得到短翅豆芫菁體內斑蝥素的總質量為 279 975 μg，占蟲體質量為1.15%。

2.4.2 自然死亡的成蟲各部位斑蝥素含量的比較由表3得出，自然死亡的成蟲中腹部斑蝥素的含量最高，其次是胸部，最少的是翅膀。提取得到短翅豆芫菁體內斑蝥素的總質量為179 446 μg，占蟲體質量為2.70%。

3 結論

（1）貴州短翅豆芫菁體內含有斑蝥素。中國藥典以南方大斑蝥（大斑蝥）Mylabris phalerata Pall和黃黑小斑蝥（小斑蝥）Mylabris cichorii 入藥。隨著人們對斑蝥素需求的增長，對

上述2種芫菁昆蟲野生資源的過量采集，將導致其種群數量急劇減少，生態平衡遭到破壞。從貴州短翅豆芫菁體內提取斑蝥素，可以緩解藥用斑蝥素緊張的市場需求，造福人類健康。（2）提取過程中，不同的部位所需提取時間不同：頭部、四肢、翅膀需要12 h提取，胸部需要20 h提取，腹部需要40 h進行提取。短翅豆芫菁的腹部斑蝥素含量最多，其次是胸部，再次之為頭部、四肢和翅膀。（3）試驗室喂養過程中死去的蟲子身體各部位總斑蝥素含量（2.70%）比活體身體各部位總斑蝥素含量（1.15%）高，主要是因為提取之前蟲體已經風干。

致謝：貴陽醫學院昆蟲學專家陳漢彬教授進行了昆蟲種類鑒定，特致謝忱。

參考文獻：

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