N—氨甲酰谷氨酸的急性毒性試驗

洪偉鳴+曹飛+徐懿+宋亮+左偉勇

摘要： 根據《獸藥試驗技術規范匯編》的要求觀察了自行合成的N-氨甲酰谷氨酸對小白鼠和肉雞的安全性。對小白鼠和肉雞采用經口灌胃法進行了急性毒性試驗。試驗結果表明，N-氨甲酰谷氨酸對小鼠和肉雞沒有毒性作用。

關鍵詞： N-氨甲酰谷氨酸；小鼠；肉雞；急性毒性試驗；安全性

中圖分類號：S853.74 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2016）03-0252-02

N-氨甲酰谷氨酸（N-carbamylglutamate，NCG）是N-乙酰谷氨酸（N-acetylglutamate，NAG）的結構類似物，能激活動物體內氨甲酰磷酸合成酶-Ⅰ（carbamyl phosphate synthetase Ⅰ，CPS-Ⅰ）和二氫吡咯-5-羧酸合成酶（pyrroline-5-carboxylate synthetase，P5CS），促進動物內源精氨酸的生成[1-2]。NCG作為精氨酸內源激活劑以提高機體精氨酸含量和改善動物生產與健康為目的，作為飼料添加劑加入日糧中對哺乳動物機體內源性氨基酸的調控具有明顯的效果[3]。為全面了解NGG安全性和為臨床安全科學飼喂家禽提供依據，根據《獸藥試驗技術規范匯編》的要求[4]，以靶動物小白鼠和肉雞為對象進行了急性毒性試驗；同時也為后續深入探討N-氨甲酰谷氨酸對家禽的作用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康清潔級昆明系小白鼠50只，雌雄各半，體質量（20±2）g，購自揚州大學比較醫學中心，預飼3 d后開展試驗；1日齡京海黃肉仔雞30羽，公、母各半，購自江蘇省家禽研究所，預飼20 d后開展試驗。

1.2 試驗藥物

N-氨甲酰谷氨酸（純度≥95%）由江蘇省獸用生物制藥高技術研究重點實驗室自行研制合成。臨用前用純水將其配制成0.15%（稱取150 mg定容至100 mL）的溶液后按劑量灌胃。

1.3 小鼠灌胃

選取50只精神狀態良好的小白鼠，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，其中第Ⅰ～Ⅳ組為試驗組，第Ⅴ組為空白對 照組，正式給藥前禁食12 h，不禁水。根據預試驗的劑量，分別按小白鼠體質量以0.015、0.020、0.030、0.040 mL/g等4個不同劑量組進行灌胃，空白對照組按0.040 mL/g灌服生理鹽水。一次劑量直接灌入，灌胃后每天觀察小鼠的精神狀況和死亡情況，并及時記錄。7 d時剖檢存活小鼠，觀察主要臟器是否有病變[4-6]。

1.4 肉雞灌胃

選取精神狀態良好的肉雞30羽，隨機分為5組，每組6羽，公母各半，其中第Ⅰ～Ⅳ組為試驗組，第Ⅴ組為空白對照組，正式給藥前禁食12 h，不禁水。根據預試驗的劑量，分別按小白鼠體質量以0.02、0.03、0.04、0.05 mL/g等4個不同劑量組進行灌胃，空白對照組按0.05 mL/g灌服生理鹽水。一次劑量直接灌入，灌胃后每天觀察肉雞的外觀、行為活動、呼吸、分泌物、排便、死亡和出現的癥狀，并及時記錄。觀察 7 d 后剖檢存活肉雞，觀察主要臟器是否有病變[4，7-8]。

2 結果與分析

2.1 小鼠灌胃試驗結果

經一次劑量直接灌服不同濃度的藥液后，各組小鼠未見死亡。小劑量組灌胃后小鼠采食和精神狀態良好，最大劑量組灌胃后小鼠經短暫休息和調整，均能恢復正常活動，次日觀察采食量和精神狀態均正常。整個試驗過程中未見小鼠出現明顯的中毒癥狀，7 d時剖檢存活小鼠，主要內臟器官均未出現肉眼可見的明顯病變。試驗結果詳見表1。

2.2 肉雞灌胃試驗結果

經一次劑量直接灌服不同濃度藥液后，各組肉雞未見死亡（表2）。給藥后雞的精神狀態稍顯萎靡、喜臥，糞便顏色正常。經過3～5 h休息后均能恢復正常，次日觀察采食量和活動均良好，眼、鼻和口腔均無異常分泌物，未出現任何不良狀況。7 d時處死存活肉雞后剖檢觀察內臟未發現病變。

3 討論

灌胃劑量較大時易造成小鼠的胃腸道功能發生紊亂，故小鼠易出現采食量和精神狀態下降等癥狀。伴隨時間的推移，上述情況逐漸好轉，并在隔日后均能恢復正常。剖檢存活小鼠后未見心、肝、脾、肺、腎等主要內臟器官出現肉眼可見的病變，由此證明N-氨甲酰谷氨酸短期內對小鼠安全。

對肉雞灌服N-氨甲酰谷氨酸溶液后，由于應激導致肉雞出現了短暫的精神沉郁和不愛活動，經數小時休息后很快恢復正常。剖檢后觀察各試驗組雞的肝、腎、胸腺、脾、法氏囊等主要器官的形態、質地和色澤均無異常，經HE切片鏡檢后仍未見異常病理組織學變化。

急性毒性試驗研究是評價藥物安全性的一項重要指標，本試驗通過經口灌服給藥的急性毒性試驗觀察了N-氨甲酰谷氨酸的急性毒性。對小鼠的灌胃最大劑量達到 0.040 mL/g，對肉雞的灌胃最大劑量達到0.05 mL/g，試驗結果表明沒有對小鼠和肉雞造成任何可見的毒性反應。根據我國農業部《獸藥試驗技術規范匯編》中結果評定標準應判定為實際無毒[4]。因此，在肉雞養殖過程中將N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑是安全可靠的。

根據現有文獻報道[1-3]，目前對于N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑的研究主要以哺乳類動物為主，在家禽上未見報道。通過本試驗的研究，旨在為下一步將N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑應用到家禽生產過程中提供理論依據。

參考文獻：

[1]彭 瑛，楊煥勝，吳 信，等. N-氨甲酰谷氨酸在豬營養中應用的研究進展[J]. 動物營養學報，2013（6）：1131-1136.

[2]Wu G Y，Knabe D A，Kim S W. Arginine nutrition in neonatal pigs[J]. The Journal of Nutrition，2004，134（10）：2783-2790.

[3]吳 信，高運苓，伍國耀，等. N-甲酰谷氨酸對仔豬內源性精氨酸的合成調控[J]. 飼料工業，2009，37（4）：56-58.

[4]農業部獸藥審評委員會辦公室.獸藥試驗技術規范匯編[S]. 2001.

[5]郁 杰，洪偉鳴，王妲妲，等. 仔豬痢清口服液的急性毒性和抗炎活性研究[J]. 廣東農業科學，2010（1）：115-116，123.

[6]郁 杰，葛竹興，邢曉玲，等. 仔豬痢清口服液的急性毒性實驗研究[J]. 中國獸藥雜志，2009，43（3）：29-30.

[7]徐麗蘭，單安山，陳志輝，等. 女貞子萃取物對肉雞的急性毒性試驗[J]. 中國獸醫科學，2010，40（12）：1312-1315.

[8]蘇 強，朱連勤，朱風華，等. 三聚氰胺對肉雞的急性口服毒性和蓄積毒性[J]. 中國獸醫雜志，2012，48（9）：61-63.