藥食兼用植物白苞蒿莖段的組培快繁途徑

班加駿+劉洋+李程+李保國+齊國輝+顧玉紅+舒榮志+顧仁菲

摘要： 為縮短白苞蒿的繁殖周期、提高增殖系數，以白苞蒿帶芽莖段為外植體，運用組織培養技術，從培養基的配方、生根方法、移栽等環節進行優化，建立周期短、繁殖系數高的2條快速繁殖途徑：途徑一，在MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+GA 0.5 mg/L上初代培養20 d，在MS+6-BA 1 mg/L上繼代培養10 d，在MS+NAA 1 mg/L或MS+6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L+GA 0.5 mg/L上生根培養7 d，將生根組培苗移栽到濕沙中在培養箱內培養2 d后，移栽到大田蔭棚中7 d的成活率為100%；途徑二，繼代培養后的莖段用誘導生根的試劑處理，扦插到濕沙中，在培養箱內培養10 d，生根率為90%，移栽到大田中，成活率為100%。2條快繁途徑的繁殖周期為1.5～2.0個月，莖段增殖系數為6，成活率為100%。

關鍵詞： 白苞蒿；莖段；組織培養；激素；移栽；快速繁殖

中圖分類號： S188；Q943.1 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2016）03-0069-03

白苞蒿（Artemisia lactiflora Wall）別稱明日葉、白花苞、四季菜等，系菊科（Compositae）蒿屬多年生草本植物[1]，主要分布于我國秦嶺以南各省區的中、低海拔地區的山坡、路旁、林緣等地[2]，收載于《中國藥典》2010年版一部附錄中，是劉寄奴的基原藥材之一[3]，以全草入藥，具有清熱、解毒、止咳、消炎、活血、健胃等功效，可用于慢性肝炎、肝硬化、腎炎等肝、腎疾病的治療，也有用于血絲蟲病的治療[4]。明日葉中還含有一種揮發油，對喘息型慢性氣管炎有治療效果[5]。在當今競爭激烈、生物多樣性等環境下植物內生真菌能更好地產生次生代謝物[6]。錢一鑫等發現，白苞蒿內生真菌次生提取物對人前列腺癌細胞系（PC-3）、人骨髓白血病細胞系（HL-60）和[JP2]人乳腺癌細胞系（ MCF-7）生長可能具有抑制活性作用[7]。在溫度適宜，土壤潤濕時，明日葉生長迅速、產量高、葉片肥厚嫩綠、質量好，并且明日葉能耐5～7 d的土壤積水[8]。植物的無性繁殖方式包括組織培養[5]、扦插[9-12]、嫁接[13]等，能實現植物的快速繁殖，且子代保持母本的優良性狀。本研究以白苞蒿帶芽莖段為外植體，運用組織培養技術，優化培養基配方和煉苗方法，使莖段不經過愈傷組織而直接增殖，建立利用白苞蒿莖段直接高效快繁的途徑，為生產提供技術。

1 材料與方法

1.1 材料

以盆養的白苞蒿植株為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選取與消毒 從長勢良好的白苞蒿植株上取長3 cm左右的帶芽莖段，去掉葉片；將莖段用洗衣粉漂洗3 min，流水沖洗10 min，然后在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡10 s，再用0.1% HgCl2滅菌10 min，最后用無菌水沖洗5～8 次，用無菌濾紙吸干材料上的水分。

1.2.2 白苞蒿帶芽莖段的初代培養基的篩選 將莖段接種于MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.0 g/L的培養基上，添加不同濃度的6-芐基腺嘌呤（6-BA）、萘乙酸（NAA）、赤霉素（GA）（表1），培養基pH值 5.8～6.0，培養溫度（25±2） ℃，光強 2 000～3 000 lx，光照時間14 h/d，接種后20 d統計染菌莖段數、活莖段數、生根莖段數、繁殖芽數、繁殖莖段數，計算染菌率（染菌率=染菌莖段數/接種莖段數×100%）、成活率（成活率=活莖段數/接種莖段數×100%）、莖段增殖系數（莖段增殖系數=繁殖莖段數/接種莖段數）、芽增殖系數（芽增殖系數=繁殖芽數/接種芽數）、生根率（生根率=生根莖段數/接種莖段數×100%），照相，最后篩選出適宜的初代培養基。

1.2.3 白苞蒿組培莖段的繼代培養

將初代培養后20 d的白苞蒿莖段接種到4號培養基（MS+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂7 g/L）上，pH值5.8～6.0，培養溫度（25±2） ℃，光強2 000～3 000 lx，光照時間14 h/d，培養后10 d計算莖段增殖系數、芽增殖系數、生根率并照相。

1.2.4 白苞蒿組培莖段生根培養基的篩選

將未生根的白苞蒿組培莖段接種于MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7.0 g/L的培養基上，添加不同濃度的6-BA、NAA、GA（表2），以篩選出適宜白苞蒿組培莖段生根的激素組合，培養基pH值 5.8～6.0，培養溫度（25±2） ℃，光強2 000～3 000 lx，光照時間 14 h/d，接種后7 d計算生根率。

1.2.5 白苞蒿組培苗的移栽

1.2.5.1 已長根的白苞蒿組培苗的移栽

2014年5月12日，將根系發達、生長健壯的白苞蒿組培苗從培養瓶中取出，洗凈根部培養基，移栽于沙土中，澆足水，在光照培養箱中培養，培養溫度（25±2） ℃，光照度8 000～10 000 lx，光照時間14 h/d，培養2 d后移栽到大田蔭棚中，株行距20 cm ×20 cm，白天溫度25～30 ℃，夜間溫度15～18 ℃，空氣相對濕度70%～90%，適當開棚通風，移栽后7 d計算成活率。

1.2.5.2 未長根白苞蒿組培莖段的移栽

2014年5月14日將未長根的白苞蒿組培莖段從培養瓶中取出，洗掉培養基，用誘導生根的試劑處理，扦插到沙土中，澆足水，在光照培養箱中培養7、10 d后計算生根率。2014年5月30日即在光照培養箱中培養后16 d移栽到大田蔭棚，移栽后7 d計算成活率。

2 結果與分析

2.1 不同激素配比對白苞蒿帶芽莖段初代培養的影響

由表3、圖1可知，3種培養基中白苞蒿莖段的染菌率均為0，成活率均為100%，說明外植體消毒徹底，3種培養基均適合白苞蒿莖段生長；其中，3號培養基的莖段、芽增殖系數分別為2.7、3.2，生根率為65%，明顯高于1號和2號培養基，可見3號培養基更適合進行白苞蒿帶芽莖段的初代培養。

2.2 不同初代培養基來源的白苞蒿莖段繼代培養的生長情況

不同初代培養基來源的白苞蒿莖段繼代培養的生長情況見表4、圖2，來自1號、2號、3號初代培養基的白苞蒿莖段在繼代培養基上的莖段增殖系數比初代培養分別高3.6、3.6、3.3，芽增殖系數分別比初代培養高4.6、4.1、4.0，生根率分別比初代培養高0、6%、22%，綜合認為，4號培養基適合進行白苞蒿莖段的繼代增殖培養，同時，因為來源于3號培養基的莖段根系發達、生根率最高，進一步說明3號培養基適合白苞蒿莖段的初代接種。

2.3 不同激素配比對白苞蒿組培莖段生根的影響

白苞蒿組培莖段在5號至8號培養基中培養后10 d的生根率依次為73%、46%、53%、66%，可見5號、8號生根培養基的生根率高于6號、7號生根培養基，而5號、8號生根培養基中是1 mg/L NAA，6號、7號生根培養基中是0.5 mg/L NAA，因此，1 mg/L NAA比0.5 mg/L NAA更適合用于誘導白苞蒿組培莖段生根。

2.4 長根的白苞蒿組培苗的煉苗移栽

長根白苞蒿組培苗移栽到濕沙中在培養箱培養2 d時的成活率為100%，從培養箱移栽到大田蔭棚后7 d時的成活率為100%，生長良好（圖3）。

2.5 未長根的白苞蒿組培莖段的煉苗移栽

未長根的白苞蒿組培莖段用誘導生根的試劑處理后，移栽到濕沙中在培養箱內培養后7 d的生根率為50%，培養后10 d的生根率為90%，且生根后的白苞蒿生長更好；將生根的白苞蒿從培養箱中移栽到大田蔭棚后7 d的成活率為93% （圖4）。

3 結論與討論

目前，關于白苞蒿組織培養方面的報道很少。江洪如等利用白苞蒿外植體在附加有生長素的MS培養基中能誘導出愈傷組織，呈疏松狀的愈傷組織對芽的分化有利，不同濃度和組合的激素對器官分化有一定的影響，再生植株的移栽成活率達90%以上[5]。為簡化繁殖技術，本研究以白苞蒿帶芽莖段為外植體，從培養基的配方、生根方法、煉苗移栽等環節進行優化，在初代培養基中加入0.5 mg/L赤霉素，加速了白苞蒿莖段的伸長生長；莖段不經過愈傷組織而直接增殖；建立了將組培莖段不在組培瓶內誘導生根，而是從培養瓶中取出洗掉培養基，直接用誘導生根的試劑處理后，扦插到濕沙中，在培養箱內培養，然后移栽到大田蔭棚中的生根方法；莖段不經過愈傷組織而直接增殖；建立了組培苗洗凈根部培養基后移栽到濕沙中利用培養箱煉苗的方法，解決了在組培瓶中煉苗容易污染的問題；進而建立了繁殖周期為1.5～2.0個月、繁殖系數為6.0的高效快速的繁殖途徑，降低了成本。

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