大株紅景天對百草枯中毒鼠肺組織NF—kβ表達的影響

【摘要】目的：探討大株紅景天（Rosin）對百草枯中毒鼠肺核結合因子-kβ（NF-kβ） 表達的影響。方法：120只SD雄性大鼠分為正常對照組（C）120只、百草枯中毒組（PQ）50只及大株紅景天組（Rosin）50只。PQ組和Rosin組一次性灌胃PQ25mg/kg染毒，C組予等體積生理鹽水灌胃。其中Rosin組于染毒前15min以Rosin 10mg/kg靜脈注射保護，以后每日1次給藥直至處死前；PQ組、C組分別在同時間點予與等體積生理鹽水。觀察各組大鼠在中毒后12h、1d、3d、5d、7d肺組織病理改變，檢測肺泡灌洗液中NF-kβp65表達。結果：C組肺組織結構基本完整，PQ組炎性細胞浸潤明顯增多，肺組織損傷程度加重，Rosin組肺組織損傷程度較輕。PQ組NF-kβp65表達較C組顯著增加，Rosin組降低。結論：NF-kβ在百草枯所致大鼠肺損傷中起重要作用，大株紅景天降低肺組織NF-kβ水平，減輕百草枯中毒大鼠的肺組織損傷。

【關鍵詞】百草枯；核結合因子-kβ；大株紅景天

【中圖分類號】R285.5【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）21-0032-03

Expression of Nuclear Factor Kappa β and Interleukin-1β in Lung

Tissue of Paraquat Poisoned Rats and the Protection of Rosin

ZHANG TaoQU Yan*WANG Ye

Dept.of Emergency，Affiliated Yanan，Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650051，China

Abstract：Objective To investigate the expression of nuclear factor kappa β（NF-kβ）in lung tissue of acute paraquat poisoned rats and the protection of Rosin. Methods 120 male rats were randomly divided into 3 groups：normal control group（C20 rats），paraquat poisoning group（PQ50rats）and Rosin intervention group（Rosin 50rats）.The PQ and Rosin group rats were given paraquat by gastric perfusion（25mg/kg）； The C group rats were given saline by gastric perfusion.The rats in Rosin group were protected by intravenous injections of penis with Rosin （10mg/kg）15min before exposure of paraquat，once a day until killed. The PQ and C group rats were given saline. Histological changes of lung tissues were observed at different time of 12h、1d、3d 、5d and 7d after poisoned to determin expression of NF-kβP65.Results The degree lung injury in PQ group was higher than that in C group. But in Rosin group the degree of lung injury was lighter.Conclusions The content of NF-kβp65 in PQ group was higher than that in C group and that were lower in Rosin group.Conclusion NF-kβp65 could play an important role in lung injury of poisoned rats.Rosin may inhibit the expression of and NF-kβp65 and alleviate lung injury in acute paraquat poisoned rats.

Keywords：Paraquat；NF-kappaB；Rosin

百草枯（Paraquat，PQ）是目前廣泛使用的有機雜環類接觸性除草劑，人類中毒后可引起多臟器功能損害，其中以急性肺損傷（Acute Lung Injury，ALI）表現最為突出[1]。近年來對百草枯中毒機制已進行了廣泛的研究，但是對于百草枯中毒所致急性肺損傷的預防和治療，仍未找到行之有效的方法。本實驗通過建立急性百草枯中毒大鼠模型，研究大株紅景天（Rosin）對急性百草枯中毒大鼠 NF-kβ表達的影響，為臨床治療急性百草枯中毒尋求有效藥物依據。

1材料及試劑

1.1動物清潔級SD雄性大鼠120只，體重200～250g，昆明醫科大學實驗動物中心提供。

1.2材料質量分數為20%的百草枯溶液（山東三元工貿有限公司），試驗前將質量分數為20%的PQ稀釋為1%。大株紅景天注射液（5mL/支，云南聯頓醫藥有限公司）。NF-kβ試劑盒（大連寶生物），Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒（凱基）。

2方法

2.1分組及給藥120只SD雄性鼠隨機分成3組：①PQ組：50只予質量分數為l%的PQ（25mg/kg）一次性灌胃染毒造模。②Rosin組：50只靜脈注射Rosin 10mg/kg，15min后予質量分數為1%的PQ（25mg/kg）一次性灌胃染毒造模。③正常對照組（C組）：20只給予相應體積的生理鹽水灌胃造模。PQ組和C組分別在同時間點予與等體積生理鹽水靜脈注射。

2.2HE染色肺組織分別在實驗開始后第12h、1d、3d、5d及7d處理大鼠，肺組織取材后，常規石蠟切片，HE染色。

2.3采用ELISA方法檢測肺泡灌洗液中PMN的NF-kβ p65表達：

2.4NF-kβp65表達方法采用SPSS13.5統計軟件，計量資料以表示，方差齊時采用LSD-t檢驗，方差不齊時采用秩和檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

3結果

3.1肺組織病理改變C組大鼠的肺組織結構完整，無炎癥細胞滲出。PQ組，肺間隔增厚，肺泡壁斷裂，大量炎癥細胞浸潤，且隨時間的延長炎性細胞浸潤增多，肺組織損傷程度加重。Rosin組肺組織有同PQ組相似的病理表現，但對應相應時間點，肺組織損傷程度較輕。詳見圖1、圖2、圖3。

3.2肺泡灌洗液中NF-kβp65表達由表1可知，紅景天可改善百草枯中毒肺泡灌洗液在PMN的kβp65表達。

4討論

目前百草枯中毒引起肺損傷認為可能的發病機制有百草枯在肺內的聚集、氧自由基的改變、脂質過氧化致線粒體損傷、肺組織細胞內鈣含量失衡、炎性細胞和免疫細胞、細胞因子和趨化因子、DNA損傷等[2]。百草枯進入機體后，造成機體一系列應激反應，炎癥介質等多種生物學效應因子被激活[3]。這些炎癥介質在PQ中毒急性肺損傷及肺纖維化發生發展過程中起了重要作用[4]。許多致肺纖維化因子基因的啟動子區域也含有NF-κβ的固定的核苷酸κβ序列[5]，NF-κβ作為調節細胞因子網絡的樞紐型環節，它的活化可啟動眾多炎性細胞因子的基因轉錄和表達，進而形成“炎癥級聯反應”啟動肺部炎癥，并通過正反饋的級聯放大效應促進肺部炎癥的發展[6]。在正常的生理狀態下，肺組織內活性氧自由基的產生與清除保持動態的平衡[6]。有研究結果表明活性氧在細胞增殖、分化和凋亡調控中起到一定的信號轉導作用[7-8]。百草枯作用于細胞內的氧化還原反應，生成大量氧自由基，通過肺泡Ⅱ型細胞的能量依賴性多胺攝取途徑導致肺損傷[9]。

中藥紅景天含有紅景天苷、紅景天素、多糖、18種氨基酸等有效成分。大株紅景天含有效成分較多，Rosin 是一種苯乙醇類化合物，是其活性成分之一。研究發現Rosin在肺、心、脾、腦組織中均有不同程度的分布，其中以肺分布較多，能清除自由基和防止自由基的形成，具有抗炎、抗缺 氧、抗腫瘤、抗衰老及抗肺纖維化等作用[10-12]。

本次研究結果表明，PQ組NF-κβp65水平明顯增加，且隨時間的延長炎性細胞浸潤增多，肺組織損傷程度加重，Rosin組鼠NF-κβp65表達降低，且隨時間的延長肺損傷化程度減輕。提示NF-κβp65可能參與PQ中毒急性肺損傷[13]，并可能進而影響后期肺纖維化的形成[14]；紅景天可通過抑制細胞因子（肺核因子-κβ）表達及清除氧自由基的方式，對百草枯中毒引起肺損傷起到保護作用。

參考文獻

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（編輯：梁志慶）