高效液相色譜法同時測定8種食品添加劑

摘要：建立對食品中8種添加劑（檸檬酸鈉、乙酸、糖精鈉、咖啡因、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯）分離測定的高效液相色譜法。色譜柱為Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇和0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液，梯度洗脫，流速為1.5 mL/min，紫外-可見檢測器可變波長程序檢測，柱溫30 ℃，一次進樣，15 min內完成分析過程。方法簡單，快速，對實際樣品測定結果滿意。

關鍵詞：高效液相色譜；食品添加劑；同時測定

中圖分類號：O657.7+2；TS202.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）21-5620-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.21.047

Simultaneous Determination of 8 Food Additives By HPLC

SHENG Qi， LIU Su-juan， FENG Feng， SHAO Yan-qiu， SUN Hang

（Department of Chemistry and Industry， Mudanjiang Normal University， Mudanjiang 157011， Heilongjiang， China）

Abstract： A high performance liquid chromatography（HPLC） was developed for the separating and determination of eight food additives（sodium citrate，acetic acid，saccharin sodium，caffeine，benzoic acid，ethyl p-hydroxybenzoate，propyl p-hydroxybenzoate，and butyl p-hydroxybenzoate. A Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm） was used as separation column with methanol and 0.02 mol/L monopotassium phosphate solution as mobile phase in gradient elution. By variable wavelength UV-vis detection，the flow rate was 1.5 mL/min and the column temperature was 30 ℃. 8 additives could be separated in 15 min by one sampling. The method was fast，accurate，and the measured result of practical samples was satisfactory.

Key words： high performance liquid chromatography； food additives； simultaneous determination

食品添加劑適當使用可以改善食品質量，防止食物變質，保持食物營養[1，2]，但亂用或濫用會損害消費者健康，研發食品添加劑快速檢測方法有重要的現實意義。隨著社會發展，食品安全逐漸得到重視，中國頒布了食品添加劑使用標準規范其使用[3]。檢測食品添加劑的方法主要有液相色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳法、衍生光譜法和色譜-質譜聯用方法[4-7]，多存在檢測標底較為單一的缺陷。本研究設計的梯度洗脫可變波長高效液相色譜法1次可檢測8種添加劑，減少了藥品和人工，縮短了檢測時間。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-15C性液相色譜儀（日本島津制作所）；KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；TB-214型電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；8種防腐劑檸檬酸鈉、乙酸、糖精鈉、咖啡因、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯標準品均購自Sigma公司，其他試劑均為HPLC級；試驗用水均為娃哈哈純凈水。

1.2 標準溶液的制備

準確稱取檸檬酸鈉、乙酸、糖精鈉、咖啡因、苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯定容成1.000 mg/mL的標準溶液。

1.3 色譜條件

LC-15C型液相色譜儀配備LC-15C型高壓泵、DGU-20A型在線脫氣機、CTO-15C型柱溫箱、SPD-15C型紫外-可見檢測器，LC-solution15C型色譜工作站。色譜柱Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；柱溫30 ℃，進樣量為10 μL。

1.4 實測樣品

雪碧和康師傅水晶葡萄購自當地超市。超聲波脫氣5 min，取10 mL定容50 mL，進樣前經0.45 μm濾膜過濾。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的確定

篩選試驗發現在表1條件下檢測靈敏度高、干擾小，且有最大吸收。

2.2 流動相的選擇

流動相主要是緩沖鹽和有機相混合。緩沖鹽選磷酸鹽；有機相選甲醇、乙腈。分別以甲醇與水，甲醇與磷酸鹽溶液，乙腈與水，乙腈與磷酸鹽溶液為流動相，進行效果測試。結果表明以KH2PO4溶液與甲醇分離效果較好。逐步調節流動相梯度，發現表2條件下，分離效果最佳。

2.3 緩沖鹽濃度及其pH的選擇

以0.01、0.02、0.05、0.10 mol/L的KH2PO4溶液進行檢測。結果濃度為0.010 mol/L時分離效果不好，0.05、0.10 mol/L溶液對色譜柱有損害，0.02 mol/L溶液可滿足需求。控制流動相的pH有穩定緩沖作用，設置不同的pH（1.5、2.5、3.5、4.5）溶液進行檢測。結果表明，溶液pH過高時，分離不完全；溶液pH過低，降低色譜柱壽命；溶液pH為2.5時色譜峰較高，分離正常，檢測效果佳。故選取pH為2.5的0.02 mol/L的KH2PO4溶液進行分離檢測。

2.4 流速的選擇

考察溶液流速為0.5～2.0 mL/min時8種添加劑混合液色譜分離情況。隨著流速增大，保留時間縮短。當流速大于1.6 mL/min時，糖精鈉和咖啡因會出現明顯重疊，且高流速下泵壓力增大，并不能明顯縮短保留時間。綜合考慮，選擇流速為1.5 mL/min。

2.5 混合標樣分離效果

以確定的最佳條件對食品添加劑進行檢測，得標準樣品色譜，見圖1。

2.6 標準曲線、相關系數及檢出限

將食品添加劑標準混合液逐級稀釋成1～50 μg/mL系列混合溶液進行測定，以峰面積（x）和相應質量體積分數（y）作線性回歸。結果表明，各組分回歸方程相關系數均接近1（表3），其相關關系良好。

2.7 回收率及精密度測定

以康師傅水晶葡萄為代表樣品，添加高、中、低3個濃度的8種食品添加劑，按優化的色譜條件進行平行6次分析，考察回收率和精密度，結果見表4。平均回收率為93.6%～105.4%，相對標準偏差為1.5%～4.1%。試驗結果達到了分析檢測要求。

2.8 實際樣品的檢測

采用試驗確定方法檢測康師傅水晶葡萄與雪碧，食品添加劑種類見圖2和圖3。添加劑含量見表5。3 結論

以甲醇和磷酸二氫鉀為流動相進行梯度洗脫，輔以可變波長程序對8種食品添加劑的標準混合溶液進行高效液相色譜法檢測。結果表明，在1～50 μg/mL濃度范圍內線性良好，相關系數均接近1，檢出限為0.08 mg/L，平均回收率為93.6%～105.4%，相對標準偏差為1.5%～4.1%。該方法具有分離效果好，快速、便捷、準確的特點，實用性強。對實際樣品檢測，結果滿意，可用于食品的日常檢測。

參考文獻：

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