豬肉中氯丙嗪殘留檢測UPLC—MS/MS法探討

摘 要：本文在參考國內外文獻的基礎上，對超高效液相色譜串聯質譜法測定豬肉中的氯丙嗪殘留進行了探討。在堿性條件下，經過1 h的80 ℃水浴，用無水乙醚兩次提取，吹干提取液后，用1.00 mL流動相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）復溶，過膜后上UPLC-MS/MS測定，建立了豬肉中氯丙嗪殘留的超高效液相色譜串聯質譜檢測方法。具有良好的線性關系，相關系數r=0.994 754；經測定方法檢出限確定為0.250 μg/kg，可滿足實際檢測需要；加標回收試驗的變異系數及回收率范圍等結果滿足GB/T 27404-2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》的要求。本試驗方法前處理過程簡便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動相梯度等一系列的條件設置合理，經UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識度高，有較高的響應，測得檢出限可滿足檢測需求，驗證結果具有較好的精密度和準確度，可用于豬肉中氟哌啶醇殘留檢測。

關鍵詞：豬肉；氟哌啶醇；檢測方法

中圖分類號：S859.79+6 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2016）08-0068-03

氯丙嗪：（1）治療精神病：用于控制精神分裂癥或其他精神病的興奮躁動、緊張不安、幻覺、妄想等癥狀，對憂郁癥狀及木僵癥狀的療效較差。對Ⅱ型精神分裂癥患者無效，甚至可加重病情[1]。（2）鎮吐：幾乎對各種原因引起的嘔吐，如尿毒癥、胃腸炎、癌癥、妊娠及藥物引起的嘔吐均有效。也可治療頑固性呃逆。但對暈動病嘔吐無效。（3）低溫麻醉及人工冬眠：用于低溫麻醉時可防止休克發生。人工冬眠時，與哌替啶、異丙嗪配成冬眠合劑用于創傷性休克、中毒性休克、燒傷、高燒及甲狀腺危象的輔助治療。（4）與鎮痛藥合用，治療癌癥晚期患者的劇痛。（5）治療心力衰竭。（6）試用于治療巨人癥。常用其鹽酸鹽，為白色或乳白色結晶性粉末；有微臭，味極苦；有引濕性；遇光漸變色；水溶液呈酸性反應。在水、乙醇或氯仿中易溶，在乙醚或苯中不溶。熔點為194 ℃～198 ℃。主要用于：各種急、慢性精神分裂癥，特別適合于急性青春型和伴有敵對情緒及攻擊行動的偏執型精神分裂癥[2]，亦可用于對吩噻嗪類治療無效的其他類型或慢性精神分裂癥[3]。有時被違法添加到動物養殖過程中[4]，由于其有鎮靜、催眠作用，會降低動物對外界刺激的反應[5]，過度鎮靜作用會使動物反應遲鈍、面部表情呆板等諸多不良反應，嚴重者會威脅到動物或人的生命安全[6]。因此，動物源性組織中氯丙嗪殘留的檢測則非常重要，而關于氯丙嗪檢測方法的研究卻鮮有報道。本試驗是在堿性條件下，用無水乙醚提取豬肉中的氯丙嗪殘留物[7]，吹干后用流動相復溶，上機測定。

1 主要儀器設備與試劑

所用儀器為：液相色譜串聯質譜聯用儀Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位電子天平，離心機，氮吹儀，水浴搖床。

主要試劑：氯丙嗪標準物質（Sigma公司），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），無水乙醚，氫氧化鈉，乙酸，乙酸銨緩沖溶液，濾膜（津騰：0.22 μm，有機相），二次蒸餾水等。

2 試驗方法

稱取2.00 g樣品于50 mL離心管中，加入200 μL乙腈，渦旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氫氧化鈉溶液，再渦旋混合 60 s。80 ℃水浴中放置1 h。在此期間，每個樣品均進行兩次渦流混合。1 h后，將樣品從水浴中取出并冷卻至室溫。加入5 mL無水乙醚，渦旋混合30 s，充分振蕩15 min，取出，7 000 r/min離心5 min。移取上層上清液。重復提取一次，合并上清液。45 ℃水浴氮吹儀氮氣吹干。用1.00 mL流動相（5 mmoL/L乙酸銨+乙腈）溶解定容，充分渦旋混合，過0.22 μm有機相濾膜，上機測定。

3 上機測定

液相色譜及質譜條件：

色譜柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 3.0 mm × 100 mm）或相當者；

柱溫：40 ℃；

流動相：5 mmoL/L乙酸銨+乙腈（55+45）；流動相梯度條件見表1。

流速：0.300 mL/min；

進樣量：5.0 μL；

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：負離子掃描；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

電噴霧電壓：-1 750 V；

輔助氣溫度：500 ℃；

定性離子對、定量離子對、采集時間、去簇電壓及碰撞能量見表2。

4 結果與分析

4.1 線性試驗

按方法條件設置儀器參數，在空白樣品中添加一系列濃度的標準溶液（0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L、8.00 μg/L，上機濃度），按照方法進行前處理后，待儀器穩定后，進行上機測定，繪制標準曲線，其相關系數r=0.994 754。

4.2 方法檢出限確定

取空白豬肉樣品，添加濃度為0.250 μg/kg，按照上述方法全過程進行預處理和測定，平行樣品n=7，根據各樣品檢測值（0.198 μg/kg、 0.205 μg/kg、0.208 μg/kg、0.207 μg/kg、0.222 μg/kg、0.188 μg/kg、0.183 μg/kg），計算出平均值X（0.202 μg/kg）及標準偏差Sb（0.013 18），當被分析物的回收率在70 %～120 %之間時，可計算檢出限為0.048 5 μg/kg。計算公式如下：

檢出限（MDL）=（k×Sb×C）/X

其中：k為置信因子，一般取3。

4.3 方法精密度和回收率實驗

以空白豬肉樣品為基質，進行加標回收試驗，加標濃度分別為0.500 μg/kg、1.25 μg/kg、 3.00 μg/kg。將加標樣品和空白樣品按方法進行前處理，上機測試，結果見表3、表4和表5。

5 結論

經過上述實驗驗證，本方法適用于豬腎和肌肉組織中氯丙嗪殘留的測定，一系列濃度的標準樣品溶液0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L和8.00 μg/L的標準曲線相關系數r=0.994 754；經測定方法檢出限確定為0.048 5 μg/kg，符合標準方法的要求；0.500 μg/kg、1.250 μg/kg、3.000 μg/kg加標試驗變異系數分別為9.57 %、10.15 %、3.51 %，加標試驗回收率范圍分別為83.80 %～106.80 %、77.60 %～98.40 %、90.66 %～98.66 %。方法驗證結果滿足SN/T 0001-93的要求，具有較好的精密度和準確度；人員檢測能力滿足實際檢測工作的需要。

本試驗方法前處理過程簡便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流動相梯度等一系列的條件設置合理，經UPLC-MS-MS打碎后的定性定量離子辨識度高，有較高的響應，測得檢出限可滿足檢測需求，驗證結果具有較好的精密度和準確度，可用于豬肉中氟哌啶醇殘留檢測。

參考文獻：

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[6] Waraich P. S.，Adams. C. E.，Roque M.，et al.. Haloperidol dose for the acute phase of schizophrenia[J]. Cochrance，2003，290（20）：2693-2072.

[7] GB/T 20763-2006. 豬腎和肌肉組織中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法[S].北京：中國標準出版社，2006.

[8] GB/T 27404-2008. 實驗室質量控制規范 食品理化檢測[S].北京：中國標準出版社，2008.