蜂蜜中蛋白質及氨基酸含量的測定

◎ 宋鳳艷，周超君

（韓山師范學院生命科學與食品科技學院，廣東 潮州 521041）

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物結合后釀造而成[1]。蜂蜜富含糖類、蛋白質、氨基酸、維生素、有機酸、花粉和微量元素等[2]。本文測定部分蜂蜜樣品的蛋白質及氨基酸含量，分析蜂蜜的產品質量。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

蜂蜜成品：野菊花蜜（樣品1，浙江衢州），山野百花蜜（樣品2浙江衢州），龍眼蜜（樣品3，廣東潮州），荔枝蜜（樣品4，廣東潮州），冬蜜1（樣品5，廣東潮州），冬蜜2（樣品6，廣東潮州）。均購自蜂場或店鋪。

1.2 主要試劑

牛血清白蛋白（AR），考馬斯亮藍G-250（AR），95%乙醇（AR），磷酸（AR），茚三酮（AR），氯化亞錫（AR），磷酸二氫鉀（AR），磷酸氫二鈉（AR），谷氨酸（AR）。

1.3 主要儀器

751紫外分光光度計，HH-4數顯恒溫水浴鍋，90-3型雙向定時恒溫磁力攪拌器。

1.4 實驗方法

（1）繪制蛋白質標準曲線。吸取1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.1 mL，分別置于6支試管中，各加水至0.1 mL，再加入5 mL考馬斯亮藍G-250溶液（考馬斯亮藍G-250 100 mg溶于50 mL的95%乙醇，加入85%磷酸100 mL，蒸餾水定容到1 000 mL），室溫放置2 min，測定吸光度值（595 nm），繪制標準曲線并求回歸方程[3]。

（2）測定蜂蜜樣品中的蛋白質含量。根據預實驗，蜂蜜樣品6 g溶于蒸餾水并定容為25 mL。準確吸取樣品溶液0.1 mL，按標準曲線的實驗步驟進行操作及測定。

1.5 蜂蜜樣品中氨基酸含量的測定

茚三酮顯色法[4]。

（1）繪制氨基酸標準曲線。吸取200 μg/mL氨基酸標準溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水補充容積為4.0 mL，再加入茚三酮溶液（茚三酮1 g溶于35 mL熱水，加入40 mg氯化亞錫，溶解后過濾，濾液置冷暗處過夜，加水定容為50 mL）和磷酸鹽緩沖溶液（pH8.04）各1 mL，混勻后水浴加熱15 min，迅速冷卻至室溫，再加水至25 mL。……