蜂蜜中蛋白質(zhì)及氨基酸含量的測(cè)定

◎ 宋鳳艷，周超君

（韓山師范學(xué)院生命科學(xué)與食品科技學(xué)院，廣東 潮州 521041）

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物結(jié)合后釀造而成[1]。蜂蜜富含糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、有機(jī)酸、花粉和微量元素等[2]。本文測(cè)定部分蜂蜜樣品的蛋白質(zhì)及氨基酸含量，分析蜂蜜的產(chǎn)品質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

蜂蜜成品：野菊花蜜（樣品1，浙江衢州），山野百花蜜（樣品2浙江衢州），龍眼蜜（樣品3，廣東潮州），荔枝蜜（樣品4，廣東潮州），冬蜜1（樣品5，廣東潮州），冬蜜2（樣品6，廣東潮州）。均購(gòu)自蜂場(chǎng)或店鋪。

1.2 主要試劑

牛血清白蛋白（AR），考馬斯亮藍(lán)G-250（AR），95%乙醇（AR），磷酸（AR），茚三酮（AR），氯化亞錫（AR），磷酸二氫鉀（AR），磷酸氫二鈉（AR），谷氨酸（AR）。

1.3 主要儀器

751紫外分光光度計(jì)，HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，90-3型雙向定時(shí)恒溫磁力攪拌器。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

（1）繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.1 mL，分別置于6支試管中，各加水至0.1 mL，再加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250溶液（考馬斯亮藍(lán)G-250 100 mg溶于50 mL的95%乙醇，加入85%磷酸100 mL，蒸餾水定容到1 000 mL），室溫放置2 min，測(cè)定吸光度值（595 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并求回歸方程[3]。

（2）測(cè)定蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)含量。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，蜂蜜樣品6 g溶于蒸餾水并定容為25 mL。準(zhǔn)確吸取樣品溶液0.1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作及測(cè)定。

1.5 蜂蜜樣品中氨基酸含量的測(cè)定

茚三酮顯色法[4]。

（1）繪制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取200 μg/mL氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水補(bǔ)充容積為4.0 mL，再加入茚三酮溶液（茚三酮1 g溶于35 mL熱水，加入40 mg氯化亞錫，溶解后過(guò)濾，濾液置冷暗處過(guò)夜，加水定容為50 mL）和磷酸鹽緩沖溶液（pH8.04）各1 mL，混勻后水浴加熱15 min，迅速冷卻至室溫，再加水至25 mL。溶液靜置15 min后測(cè)定吸光度值（570 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并求回歸方程。

（2）測(cè)定蜂蜜樣品中的氨基酸含量。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取蜂蜜樣品6 g，蒸餾水溶解后定容到25 mL，吸取樣品溶液4 mL，其余操作如繪制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。曲線回歸方程為y=0.006x，R2=0.999 1。

圖1 蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 蜂蜜樣品中蛋白質(zhì)的含量

蜂蜜各樣品中的蛋白質(zhì)含量，見(jiàn)表1。

表1 六個(gè)蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)含量表

幾個(gè)被測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的含量在0.044～0.391 g/100 g，不同樣品間蛋白質(zhì)含量差距較大。各樣品測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.666%～6.447%，實(shí)驗(yàn)總體重復(fù)性良好，各平行樣品間誤差較小。

以氨基酸含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。曲線回歸方程為：

y=0.001 5x，R2=0.999 1

圖2 氨基酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 蜂蜜樣品中氨基酸的含量

根據(jù)蜂蜜樣品中氨基酸的吸光度值測(cè)定結(jié)果，計(jì)算得到各樣品中的氨基酸含量，見(jiàn)表2。樣品中的氨基酸含量在0.030 8～0.055 3 g/100 g，各樣品測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.601 0%～1.305 9%，平行樣品間的誤差很小。

表2 六個(gè)蜂蜜樣品中的氨基酸含量表

3 結(jié)語(yǔ)

從測(cè)定結(jié)果可知，考馬斯亮藍(lán)法和茚三酮顯色法分別測(cè)定蜂蜜樣品中的蛋白質(zhì)和氨基酸含量，方法的精密度較高。蜂蜜樣品中蛋白質(zhì)和氨基酸的含量有一定的差別[5]。作為出口蜂蜜品種，龍眼蜜和荔枝蜜中的蛋白質(zhì)含量相對(duì)較高，兩個(gè)冬蜜樣品中的含量稍低，但氨基酸的含量則相反。野菊花蜜和山野百花蜜中的蛋白質(zhì)及氨基酸的含量都極低。

參考文獻(xiàn)：

[1]馮繼讓.國(guó)家《蜂蜜》標(biāo)準(zhǔn)解讀[J].蜜蜂雜志，2011（1）：8-11.

[2]李欽龍.不同蜂蜜中蛋白質(zhì)的差異性研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2012.

[3]劉學(xué)仁，羅新鵬，查 敏，等.蜂蜜質(zhì)量分析的研究進(jìn)展[J].中藥材，2012（7）：1175-1180.

[4]呂憲禹.蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)方案與應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[5]楊遠(yuǎn)帆，倪 輝，吳黎明.茚三酮法測(cè)定蜂蜜及果葡糖漿中的氨基酸含量[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2013（2）：171-175.