◎ 宋鳳艷,周超君
(韓山師范學院生命科學與食品科技學院,廣東 潮州 521041)
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露,與自身分泌物結合后釀造而成[1]。蜂蜜富含糖類、蛋白質、氨基酸、維生素、有機酸、花粉和微量元素等[2]。本文測定部分蜂蜜樣品的蛋白質及氨基酸含量,分析蜂蜜的產品質量。
蜂蜜成品:野菊花蜜(樣品1,浙江衢州),山野百花蜜(樣品2浙江衢州),龍眼蜜(樣品3,廣東潮州),荔枝蜜(樣品4,廣東潮州),冬蜜1(樣品5,廣東潮州),冬蜜2(樣品6,廣東潮州)。均購自蜂場或店鋪。
牛血清白蛋白(AR),考馬斯亮藍G-250(AR),95%乙醇(AR),磷酸(AR),茚三酮(AR),氯化亞錫(AR),磷酸二氫鉀(AR),磷酸氫二鈉(AR),谷氨酸(AR)。
751紫外分光光度計,HH-4數顯恒溫水浴鍋,90-3型雙向定時恒溫磁力攪拌器。
(1)繪制蛋白質標準曲線。吸取1 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.1 mL,分別置于6支試管中,各加水至0.1 mL,再加入5 mL考馬斯亮藍G-250溶液(考馬斯亮藍G-250 100 mg溶于50 mL的95%乙醇,加入85%磷酸100 mL,蒸餾水定容到1 000 mL),室溫放置2 min,測定吸光度值(595 nm),繪制標準曲線并求回歸方程[3]。
(2)測定蜂蜜樣品中的蛋白質含量。根據預實驗,蜂蜜樣品6 g溶于蒸餾水并定容為25 mL。準確吸取樣品溶液0.1 mL,按標準曲線的實驗步驟進行操作及測定。
茚三酮顯色法[4]。
(1)繪制氨基酸標準曲線。吸取200 μg/mL氨基酸標準溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL,分別置于25 mL容量瓶中,加水補充容積為4.0 mL,再加入茚三酮溶液(茚三酮1 g溶于35 mL熱水,加入40 mg氯化亞錫,溶解后過濾,濾液置冷暗處過夜,加水定容為50 mL)和磷酸鹽緩沖溶液(pH8.04)各1 mL,混勻后水浴加熱15 min,迅速冷卻至室溫,再加水至25 mL。……