多發性骨髓瘤與系統性紅斑狼瘡患者血漿 IL-2、TNF-α檢測

葉倩舲，翟志敏，王會平，秦 慧，張家奎

多發性骨髓瘤與系統性紅斑狼瘡患者血漿 IL-2、TNF-α檢測

葉倩舲，翟志敏，王會平，秦 慧，張家奎

目的檢測多發性骨髓瘤（MM）（“免疫過度受抑”疾病）與系統性紅斑狼瘡（SLE）（“免疫過度激活”疾病）患者血漿白細胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，并對結果進行分析。方法SLE、MM患者和健康對照均于清晨空腹抽取靜脈血 3 m l，酶聯免疫法測定血漿 IL-2、TNF-α水平。結果與對照者比較，MM 患者、SLE患者血漿 IL-2水平差異無統計學意義；MM患者 TNF-α水平顯著低于對照者（P＜0.05），SLE患者 TNF-α水平顯著高于對照者（P＜0.05）。MM患者血漿 IL-2、TNF-α水平顯著低于 SLE患者（P=0.01，P＜0.01）。年齡 ＜55歲組 MM 患者血漿 IL-2、TNF-α均顯著高于≥55歲組（P＜0.01，P=0.03）；腎功能不全 MM患者血漿 IL-2水平顯著高于腎功能正常 MM患者（P =0.01）。有與無首診盤形紅斑的 SLE患者之間，其血漿 IL-2、TNF-α水平差異有統計學意義（P=0.02，P=0.02）。結論TNF-α在體內微環境的生理失衡是 MM患者的“免疫過度受抑”與 SLE患者“免疫異常激活”的原因之一，IL-2的影響作用則有待進一步深入。

多發性骨髓瘤；系統性紅斑狼瘡；白細胞介素-2；腫瘤壞死因子-α；血漿

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是以骨骼破壞、腎損害、血鈣過量為主要表現的惡性漿細胞克隆增生性腫瘤［1］，其惡性增生的漿細胞是不再具有分化能力的 B細胞，呈現“免疫過度受抑”。系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是典型的系統性自身免疫性疾病，患者體內自身反應性T、B淋 巴 細 胞 異 常 活 化［2］，表 現 為 “免 疫過 度 激活”。白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）是反映機體免疫功能的重要細胞因子，參與體內微環境的生理平衡，它們一旦失衡（如上升或下降），則會誘發相應的免疫紊亂與異常。IL-2和 TNF-α參與了 MM發病過程［3］及 SLE免疫病理損傷過程［4］。該研究旨在同時檢測與比較 MM（免疫過度受抑）和 SLE（免疫過度激 活）患者體內 IL-2、TNF-α的血漿 水平。

1 材料與方法

1.1 病例資料17例 MM患者，其中男 8例，女 9例；年齡 30～84（61.06±11.49）歲，均為安徽醫科大學第二附屬醫院血液內科住院患者。所有患者符合中國 2013最新 MM診斷標準（滿足全部 3條標準）［5］。依據國際分期系統（international staging system，ISS）β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-GM）檢驗值分組，β2-GM＜3.5 mg／L為Ⅰ期，β2-GM＞5.5 mg／L為Ⅲ期，介于兩者之間為Ⅱ期［5］。其中，年齡＞55歲12例，＜55歲者 5例；Ⅲ期患者 9例，Ⅰ期和Ⅱ期患者 8例；腎功能異常者7例，腎功能正常者10例。

16例 SLE患者，均為女性，年齡 11～53（28.63 ±8.11）歲，為安徽醫科大學第一附屬醫院、安徽醫科大學第二附屬醫院與安徽省立醫院風濕免疫科門診及住院患者。所有患者符合美國風濕病學會（A-merican College of Rheumatology，ACR）1997年修訂的 SLE分類標 準［6］。SLE疾病活動評分依據 SLE活動指數（systemic lupuserythematosus disease activity index，SLEDAI）量表進行判定［7］，將評分 ＜10分者判定為非活動期患者，≥10分者判定為活動期患者。其中，首診顴部紅斑 9例（56.2%）、首診盤形紅斑 5例（31.2%）、腎損 7例（43.7%）、關節炎 6例（37.5%）為主，其后依次為口腔潰瘍、光敏感、胸膜炎。SLEDAI評分 ＞10分者 5例，SLEDAI評分 ＜10分者11例。

MM對照者 6例，其中男 3例，女 3例，年齡 30～76（49.67±4.41）歲；SLE對照者 13例，均為女性，年齡 17～45（33.54±9.13）歲。對照來自安徽醫科大學第一附屬醫院、安徽醫科大學第二附屬醫院體檢中心健康檢驗者和安徽醫科大學研究生健康個體健康獻血員，無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，血常規及肝腎功能檢查均正常，且不具備 MM或SLE診斷標準中的任何一條。

1.2 主要試劑檢測人血漿 IL-2、TNF-α的 ELISA試劑盒購自上海中亞科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1血液標本采集 得到受試對象或其家屬知情同意后，SLE、MM患者和對照者于清晨空腹抽取靜脈血 3 m l，置于抗凝管，4 h內分離血漿（1 500 r／min，5 min），留存于 -80℃低溫冰箱中，操作過程中避免反復凍融。

1.3.2ELISA測定血漿 IL-2、TNF-α 采用雙抗體一步夾心法 ELISA定量測定 IL-2、TNF-α含量。嚴格按照說明書步驟操作：往預先包被 IL-2／TNF-α抗體的包被微孔中，依次加入標準品、標本、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌；用底物 TMB顯色，TMB經過氧化物酶的催化后轉化呈藍色，并在酸的作用下最終轉化成的黃色；顏色的深淺和樣品中的 IL-2／TNF-α濃度呈正 相 關；用酶標儀在 450 nm波長下測定吸光度（optical density，OD）值，IL-2／TNF-α的 OD值單位均為 pg／m l，根據 OD值得出標準曲線，剔除極值，計算得出樣品濃度。

1.4 統計學處理采用 SPSS 10.01統計軟件進行分析，數據以 ˉx±s表示；組間比較用 Student t（方差齊采用）或 Satterthwaite t檢驗（方差不齊采用）。檢驗水準 α=0.05。

2 結果

2.1 血漿IL-2、TNF-α水平比較MM 患者血漿IL-2水平與對照者比較，Satterthwaite t檢驗，差異無統計學意義，TNF-α水平顯著低于對照組（P＜0.05），見表 1。SLE患者血漿 IL-2水平與 對照比較，差異無統計學意義，但 TNF-α水平顯著高于對照組（P＜0.05），見表 2。MM與 SLE患者血漿 IL-2、TNF-α水平差 異 有 統 計 學 意 義 （Satteithwaite t= 2.82，P=0.01；t=3.98，P＜0.01）。

表1 MM 患 者與對 照 IL-2、TNF-α水平的 比較 （ˉx±s，pg／ml）

表2 SLE患 者與對 照 IL-2、TNF-α水平的 比較 （ˉx±s，pg／m l）

2.2 MM患者年齡、臨床分期及主要臨床檢測指標血漿IL-2、TNF-α水平年齡 ＜55歲 MM患者血漿 IL-2、TNF-α顯著高于≥55歲患者（P＜0.01，P= 0.03）。Ⅰ、Ⅱ期患者血漿 IL-2、TNF-α與Ⅲ期患者差異無統計學意義。腎功能不全 MM患者血漿 IL-2水平顯著高于腎功能正常 MM患者（P=0.01）；但TNF-α水平與腎功能正常 MM患者，差異無統計學意義。 血 紅 蛋 白 （hemoglobin，Hb）、血 小 板 計 數（platelets，PLT）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）與尿 β2-GM分組后，差異均無統計學意義。見表3。

2.3 SLE主要臨床表現血漿IL-2、TNF-α水平SLE患者有、無首診盤形紅斑，其 IL-2、TNF-α血漿水平差異有統計學意義（P=0.02，P=0.02）。首診出現顴部紅斑、出現腎損、光敏感、口腔潰瘍、胸膜炎、關節炎（陽性組，+）與無上述相應首診臨床表現分組（陰性組，-），血漿 IL-2、TNF-α水平差異無統計學意義。見表4。

3 討論

細胞因子網絡成員在體內的失衡與疾病的免疫紊亂 密 切 相 關。本實驗檢測 了 IL-2和 TNF-α在MM和 SLE患者血漿水平，為進一步研究這兩個重要的細胞免疫調節因子在 MM的“免疫過度受抑”和 SLE的“免疫過度激活”中的作用奠定基礎。

IL-2是一種 T細胞生長因子，主要是由輔助性T細胞產生，小部分是由 CD8+T細胞、NK細胞和NKT細胞產生［8］。IL-2可以通過與其受體結合并傳遞信號對各免疫細胞產生不同影響，并特異性獲得靶細胞的定向分化和功能活性［9］；某些免疫細胞功能的差異取決于 IL-2濃度及靶細胞表面 IL-2受體的構型和強度等［10］。與對照血漿 IL-2比較，MM患者偏高，SLE患者偏低，且 MM患者 IL-2水平顯著低于 SLE患者，說明 MM患者由于 B淋巴細胞分化增殖終末階段—漿細胞大量惡性增生，抑制 IL-2的產生與分泌，促使患者表現“免疫過度受抑”；SLE患者體內 IL-2可能參與并促進自身 T、B細胞的異常活化過程，是患者表現免疫過度激活的因素之一。但 MM、SLE血漿 IL-2與對照比較，差異均無統計學意義，這或許由于受到免疫網絡其它相關細胞因子調控或是 IL-2受體等的影響，MM、SLE患者 IL-2水平上升或下降至接近基線（對照組）水平。但本次研究病例與對照的樣本量較少，且未對其它細胞因子與 IL-2受體進行檢測，提示 IL-2對免疫相關疾病的影響作用有待于進一步深入。

表3 MM 患者臨床檢測指標血漿 IL-2、TNF-α水平（ˉx±s，pg／m l）

表4 SLE患者 主要臨 床表 現 IL-2、TNF-α水平（ˉx±s，pg／m l）

TNF-α是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產生，在促炎、抗腫瘤與自身免疫調節方面有著重要作用的免疫調節因子［11］；被認為是迄今發現的抗腫瘤作用最強的細胞因子，其抗腫瘤效能主要是通過對腫瘤細胞的毒性作用和調節免疫系統功能發揮。SLE等自身免疫性疾病患者 TNF-α水平較高［12］，被認為是 TNF-α抑制 T細胞信號傳導、促進 B細胞和樹突狀細胞的生長以及誘導凋亡分子的產生等，參與自身免疫性疾病的發病機制［13］。血漿 TNF-α水平，MM患者顯著低于對照，SLE顯著高于對照，MM患者血漿 TNF-α水平遠低于 SLE患者血漿 TNF-α水平，這表明 TNF-α作為與 IL-2一樣的 Th1型細胞因子，在 MM患者免疫過度受抑和 SLE患者免疫過度激活中發揮著作用，且這種作用效應比 IL-2更為獨立。血漿 TNF-α水平或可作為免疫性疾病 MM、SLE患者的臨床檢測指標。

MM高年齡患者生存期短、預后差［14］，本研究根據我國發病中位年齡 55歲［15］將 MM患者分為兩組，＜55歲組血漿 IL-2、TNF-α濃度水平高于≥55歲組，這提示：年齡不同患者體內這兩個細胞因子的不同可能是年齡影響預后的原因之一，且有必要動態追蹤觀察 MM患者、尤其是高齡 MM患者血漿 IL-2、TNF-α水平，更好地改善其生存與預后。腎損MM患者血漿 IL-2水平高于腎功能正常 MM患者，是因為 IL-2作為一種促炎性因子在 MM 腎功能損害的進展中可能起到了一定的作用。首診盤形紅斑SLE患者的血漿 IL-2、TNF-α水平均顯著高于首診無盤形紅斑 SLE患者，說明 IL-2、TNF-α可能介入了 SLE患者盤形紅斑的形成。

［1］Sun J，Wen X，Jin F，et al.Bioinformatics analyses of differentially expressed genes associated with bisphosphonate-related osteo-necrosis of the jaw in patients with multiple myeloma［J］.Onco Targets Ther，2015，8：2681-8.

［2］莫 莉，許禮發.調節性 T細胞與風濕性疾病［J］.中華臨床醫師雜志（電子版），2011，5（11）：3277-80.

［3］Podar K，Hideshima T，Chauhan D，et al.Targeting signalling pathways for the treatment ofmultiplemyeloma［J］.Expert Opin Ther Targets，2005，9（2）：359-81.

［4］張曲矗，陸進明.系統性紅斑狼瘡與細胞因子的研究進展［J］.現代生物醫學進展，2009，9（19）：3794-7.

［5］中國醫師協會血液科醫師分會，中華醫學會血液學分會，中國多發性骨髓瘤工作組.中國多發性骨髓瘤診治指南（2013年修訂）［S］.中華內科雜志，2013，52（9）：791-5.

［6］Hochberg M C.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［W］.Arthritis Rheum，1997，40（9）：1725.

［7］Bombardier C，Gladman D D，Urowitz M B，et al.Derivation of the SLEDAI.A disease activity index for lupus patients.The Committee on Prognosis Studies in SLE［S］.Arthritis Rheum，1992，35（6）：630-40.

［8］Taniguchi T，Matsui H，Fujita T，et al.Structure and expression of a cloned cDNA for human interleukin-2［J］.Biotechnology， 1992，24：304-9.

［9］Boyman O，Kovar M，Rubinstein M P，etal.Selective stimulation of T cell subsets with antibody-cytokine immune complexes［J］. Science，2006，311（5769）：1924-7.

［10］Boyman O，Sprent J.The role of interleukin-2 during homeostasis and activation of the immune system［J］.Nat Rev Immunol，2012，12（3）：180-90.

［11］樊 斌，李德衛，馮 淵，等.TNF-α和 IL-2在肝 移植急性排斥反應中的表達及意義［J］.中國普通外科雜志，2011，20（1）：11-4.

［12］Chew A L，Bennett A，Smith C H，et al.Successful treatment of severe psoriasis and psoriatic arthritis with adalimumab［J］.Br J Dermatol，2004，151（2）：492-6.

［13］Aringer M，Smolen JS.SLE-Complex cytokine effects in a complex autoimmune disease：tumor necrosis factor in systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Res Ther，2003，5（4）：172-7.

［14］Kyle R A，GertzM A，W itzig T E，et al.Review of1027 patients with newly diagnosed multiple myeloma［J］.Mayo Clin Proc，2003，78（1）：21-33.

［15］陶中飛，傅衛軍，陳玉寶，等.206例多發性骨髓瘤預后因素分析及分期評價［J］.癌癥，2006，25（4）：461-4.

Detection on p lasma IL-2 and TNF-αin patientsw ith m ultiplem yeloma and w ith system ic lupus erythematosus

Ye Qianling，Zhai Zhimin，Wang Huipin，et al
（Dept of Hematology，The Second Hospital of AnhuiMedical University，Hefei 230601）

Objective To detect plasma level of interleukin-2（IL-2）and tumor necrosis factor-α（TNF-α）in patients with multiplemyeloma（MM）（which is an abnormal immunosuppressive disease）and with systemic lupus erythematosus（SLE）（which is a disorder characterized by abnormal immuno-activation and further discuss based on the analyses of the results.Methods Fasting venous blood samples（3ml）were taken from MM，SLE patients and healthy controls.Plasma IL-2 and TNF-αwere detected with the enzyme-linked immunosorbent.Resu lts Plasma IL-2 level didn′t show significance between MM or SLE patients and controls.Compared with their healthy controls respectively，plasma TNF-αlevel of patientswith MM was significantly lower（P＜0.05）and that of patients with SLE was significantly higher（P＜0.05）.Compared with patientswith SLE，patientswith MM had statistically lower plasma IL-2 and lower plasma TNF-α（P=0.01，P＜0.01）.Plasma IL-2 and TNF-αof MM patients in group age less than 55 were significantly higher than in group agemore than 55（P＜0.01，P=0.03）.Plasma IL-2 level ofMM patientswith renal insufficiency，was significantly higher than MM patientswith normal renal function，the difference was statistically significant（P=0.01）.Between SLE patients that just first diagnosed with and without disc-shaped erythema，the plasma IL-2 and TNF-αlevel were statistically significant（P=0.02，P=0.02）.Conclusion The imbalance ofmicroenvironment caused by the increasing or declining of the cytokine TNF-α，could account for the abnormal immuno-suppression ofMM and the abnormal immuno-activation of SLE.Further studies on the effectof IL-2 are needed.

multiple myeloma；systemic lupus erythematosus；interleukin-2；tumor necrosis factor-α；plasma

R 593

A

1000-1492（2016）02-0255-04

時間：2016-1-20 10：32：27

http：／／www.cnki.net／kcms／detail／34.1065.R.20160120.1032.048.htm l

2015-12-08接收

安徽醫科大學校科研基金（編號：2015xkj032）

安徽醫科大學第二附屬醫院血液科，合肥 230601

葉倩舲，女，住院醫師，醫學碩士；

翟志敏，女，教授，主任醫師，博士生導師，責任作者，E-mail：zzzm889＠163.com