胃竇黏膜腸上皮化生腺體中LAPTM4B蛋白的表達及其意義

馬廣貞　滕玲玲　劉魯英

【摘 要】本研究通過免疫組織化學染色方法檢測了80例胃竇黏膜中LAPTM4B蛋白表達情況，并結合形態學觀察判斷腸上皮化生的類型及程度。80例標本中28例檢測到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達（35%），52例未檢測到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達（65%）。LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達有顯著性差異（P<0.01）。LAPTM4B基因的異常表達可能在胃癌發生的早期階段發揮重要作用。

【關鍵詞】胃黏膜；腸上皮化生；LAPTM4B

【Abstract】We detected the LAPTM4B protein expression by immunohistochemical staining in 80 cases of gastric antrum mucosa which were diagnosed as chronic gastritis with intestinal metaplasia. Combining with morphological observation， we determined the type and degree of intestinal metaplasia. We detected LAPTM4B protein expression in intestinal metaplasia glands in 28 cases of specimens （35%）. The expression of LAPTM4B protein in different types， different degrees of intestinal metaplasia had significant difference（P<0.01）. The increased expression of LAPTM4B indicated that LAPTM4B play an important role in the early stages of gastric carcinogenesis.

【Key words】Gastric mucosa； Intestinal metaplasia； LAPTM4B

腸上皮化生是胃黏膜的重要病理改變，多發生在慢性萎縮性胃炎基礎上，有研究顯示，胃黏膜發生腸型分化與細胞表達同源異形盒基因CDX2 有關。LAPTM4B基因是近年來發現的與腫瘤發生發展關系密切的基因[1]。本研究通過檢測胃竇黏膜腸上皮化生的類型、程度以及LAPTM4B蛋白表達情況及其相互關系，探討胃黏膜腸上皮化生的發生機制。

1 材料與方法

1.1 病例資料

收集聊城市第二人民醫院2010年1月至2013年6月存檔的胃鏡活檢標本80例。所有標本均自胃竇部取材，經病理診斷為慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生，其中男性51例，女性29例，中位年齡59 歲（38～79歲）。全部活檢標本經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm厚度切片備用。

1.2 方法

免疫組織化學染色采用PowerVision二步法。4μm厚的石蠟切片經二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，3%雙氧水阻斷內源性過氧化物酶（室溫孵育10分鐘），組織抗原修復后，加一抗4℃過夜。滴加辣根過氧化物酶標記的通用型二抗（PV-6000，Dako），DAB顯色，蘇木素復染，封片后顯微鏡下觀察。

1.3 試劑

LAPTM4B多克隆抗體（1：50稀釋），由北京大學醫學部周柔麗教授惠贈，sulfo-Lewisa單克隆抗體（克隆號F2，1：50稀釋）購自Cell Sciences公司， 免疫組織化學染色試劑盒購自Dako公司。

1.4 結果判定

LAPTM4B免疫組織化學染色定位于細胞質或細胞膜，依據染色強度和染色面積共同評分。（1）根據染色的范圍分為3級，0分：不顯色或<10%，1分：11～50%，2分：>50%；（2）根據染色強度分為3級，無染色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，然后把染色范圍和染色強度分值相加，得分為0或1者為陰性，得分2以上者為陽性。sulfo-Lewisa 免疫組織化學染色定位于胞質，在胞質中出現棕黃色顆粒為染色陽性。

1.5 統計學分析

應用SPSS 16. 0統計軟件進行數據分析。樣本率之間比較采用χ2檢驗，P<0.05 認為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 胃竇黏膜腸上皮化生的類型

按照sulfo-Lewisa染色結果與組織結構特點對腸上皮化生進行分類：Ⅰ型腸化：腸化腺體不表達sulfo-Lewisa；Ⅱ型腸化：僅深部腸化的腺體表達sulfo-Lewisa；Ⅲ型腸化：sulfo-Lewisa在深部及表面的腸化腺體同時表達[2]。本研究中，80 例標本根據染色結果分為I 型腸化16 例（20.0%），Ⅱ型腸化37 例（46.2%），Ⅲ型腸化27 例（33.8%）。

2.2 胃竇粘膜腸上皮化生的程度

胃竇粘膜腸上皮化生的嚴重程度根據以下標準判定。選擇3～5個視野（或整個視野，×400），輕度腸化：胃黏膜發生腸化區域占腺體和表面上皮總面積的1/3以下；中度腸化：1/3～2/3之間；重度腸化：2/3以上至全層[3]。80例胃鏡標本包括輕度腸化10 例（12.5%）、中度腸化44例（55%）和重度腸化26例（32.5%）。

2.3 胃竇粘膜LAPTM4B蛋白表達情況

80例標本中28例檢測到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達（35%），52例未檢測到LAPTM4B蛋白在腸上皮化生腺體表達（65%）。

2.4 胃竇粘膜LAPTM4B蛋白表達與腸上皮化生嚴重程度、類型之間的關系

LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達有顯著性差異，其中LAPTM4B蛋白在發生Ⅲ型腸化的腺體中表達顯著高于I型、Ⅱ型腸上皮化生，其差異具有統計學意義（P=0.018）；隨著腸上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表達也顯著增加（P=0.045）（表1）。

表1 胃竇粘膜LAPTM4B表達與腸上皮化生的類型、程度的關系

3 討論

Correa等提出的腸型胃癌形成機制己被大家普遍接受，即正常胃黏膜經過慢性萎縮性胃炎及腸上皮化生，逐步進展到異型增生，最終導致腸型胃癌發生。研究發現多種基因在胃癌前病變的早期階段已經發揮作用，但是胃癌發生發展的機制尚未明確。LAPTM4B基因是最近發現的與多種腫瘤發生、發展密切相關的癌基因。在大多數的腫瘤中檢測到LAPTM4B蛋白表達升高，包括肝癌[4]、胃癌、結腸癌[5]及乳腺癌[6]等。本研究通過免疫組化染色，發現在腸上皮化生腺體中35%檢測到LAPTM4B蛋白表達（28/80），LAPTM4B蛋白在不同類型、不同程度腸上皮化生中的表達有顯著性差異（P<0.05）。LAPTM4B蛋白在發生Ⅲ型腸化的腺體中表達顯著高于I型、Ⅱ型腸上皮化生，其差異具有統計學意義（P=0.018）；隨著腸上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表達也顯著增加（P=0.045）。本研究結果提示LAPTM4B蛋白表達升高可能在胃癌發生過程中較早發揮作用，但是本研究僅從蛋白表達的水平反映了LAPTM4B與胃癌發生的關系，其確切作用機制尚不十分明確，不同類型腸化黏膜中LAPTM4B表達變化的意義有待于進一步研究。

【參考文獻】

[1]劉軍建，張杰，周柔麗，等.用熒光差異顯示法分離新的肝細胞癌相關基因[J].北京醫科大學學報，2000，32（5）：411-414.

[2]Bodger K， Campbell F， Rhodes J M. Detection of sulfated glycoproteins in intestinal metaplasia： a comparison of traditional mucin staining with immunohistochemistry for the sulfo-Lewis（a） carbohydrate epitope[J]. J Clin Pathol， 2003， 56（9）：703-8.

[3]Rugge M， Correa P， Dixon M F， et al. Gastric dysplasia： the padova international classification[J]. Am J Surg Pathol， 2000， 24（2）：167-76.

[4]Yang H， Zhai G， Ji X， et al. LAPTM4B allele*2 is a marker of poor prognosis following hepatic tumor resection for hepatocellular carcinoma[J]. PLoS One. 2012；7（4）：e34984.

[5]Kang Y， Yin M， Jiang W， et al. Overexpression of LAPTM4B-35 is associated with poor prognosis in colorectal carcinoma[J]. Am J Surg. 2012；204（5）：677-83.

[6]Li X， Kong X， Chen X， et al. LAPTM4B allele*2 is associated with breast cancer susceptibility and prognosis[J]. PLoS One. 2012；7（9）：e44916.

[責任編輯：湯靜]