7-ACA細菌內毒素檢查方法探析

楊帥

哈藥集團制藥總廠 150000

7-ACA細菌內毒素檢查方法探析

楊帥

哈藥集團制藥總廠 150000

要建立藥用的中間體7-ACA細菌內毒素檢查方法。本文是按照2010年的中國藥典中的附錄進行的本次試驗分析，根據分析判定相應的結果。研究結果表明了供試品溶液的濃度，如果濃度是1.25mg/ml的時候，就說明對細菌內毒素的檢查是沒有任何的干擾的，使用藥用中間體7-ACA的檢查方法是可行的。

7-ACA；細菌內毒素；檢查方法

藥用中間體7-ACA是一種頭孢類的抗生素前身，這種頭孢類的抗生素是合成的，沒有將細菌內的毒素進行有效的去除。內毒素就是一種威脅著人體生命安全的一種致病的因子，只要很少的內毒素就會引起生物或者是病理作用，因此現在7-ACA細菌內毒素的檢查并且進行有效的控制，已經成為了研究的重點。本文的研究中，考慮到7-ACA的PH比較低，僅僅在3.0～5.0之間，但是細菌內毒素比較適合的PH值是在6.0～8.0之間，因此就需要進行供試品的調節，需要調節到6.0～8.0之間，之后才能夠開始進行檢測。

一、材料

藥用中間體 7-ACA，這一藥品的批號分別是 691312017、691312018和691312019。

鱟試劑1，這一試劑是TAL1，批號是1302130，是由湛江博康海洋生物有限責任公司制造的。

鱟試劑2，TAL2，湛江安度斯生物有限公司。

細菌內毒素工作標準品（CSE，中國食品藥品生物檢定院，批號為150601-201176，規格為100EU/支）。

細菌內毒素檢測用水和碳酸鈉。

二、方法和結果

（一）鱟試劑的靈敏度復核

在本次試驗中使用的是2010年版本的中國藥典中的第二部的附錄進行的7-ACA細菌內毒素檢查方法的研究，在試驗的過程中，要求靈敏度要在 0.5～2.0λ之間，具體的試驗結果如表 1所示：

表1：鱟試劑靈敏度實驗結果

（二）供試品中細菌內毒素限制的確定

在本次產品中使用的是藥用中間體，從成品的注射劑上來說，使用的是通用量，通用量是在1h內輸入的藥量不能夠超過1.2g，在計算的過程中使用的是通用的量，也就是說 M=1.2g/（60kg·h）=20mg/（kg·h）。使用的計算公式也是有著具體的要求的，具體的計算公式是L=K/M，在本次試驗中，具體的計算公式是：L=K/M=5EU/（kg·h）/20mg/（kg·h）=0.25EU/mg。

（三）供試品有效的稀釋濃度

在本次試驗中，使用的是鱟試劑，這一試劑的靈敏度是0.125EU/ml，最大的有效的稀釋倍數是（MVD）=1，這時的C就是λ/L=（0.125EU/mL）/（0.25EU/mg）=0.5mg/mL。

（四）供試品干擾預實驗

稱取藥用中間體7-ACA（批號為1312017）約100mg，用1%的無熱原碳酸鈉溶液溶解，制成40mg/mL的溶液，再加細菌內毒素檢查用水按表2濃度稀釋成供試品管（NPC）和含有2λ濃度細菌內毒素的供試品陽性對照管（PPC）。

取2個不同廠家的鱟試劑，分別置上述NPC和PPC中進行反應，每個濃度分別平行做 2支，另分別做陰性對照管（NC）和陽性對照管（PC）各2支，于37±1℃保溫（60±2）min。則7-ACA干擾預實驗結果見表2。

表2：7-ACA干擾預實驗結果

由表2可見，藥用中間體在濃度＞1.25mg/mL時對2個廠家鱟試劑會產生干擾作用；濃度≤1.25mg/mL時對2個廠家鱟試劑均無干擾作用。

（五）供試品干擾試驗

根據預實驗，將濃度為1.25mg/mL的供試品溶液進行干擾實驗，實驗結果見表3。

表3：7-ACA濃度為1.25mg/mL時干擾實驗結果

由表3可見，3批供試品濃度為1.25mg/mL時，Et均在0.5～2Es范圍內，可認為在此濃度下供試品對鱟試劑無干擾作用。

（六）樣品檢測

取3批7-ACA樣品稀釋至0.5mg/mL（即最低有效濃度），以靈敏度0.125EU/mL的TAL進行檢測，菌符合規定。

三、討論

7-ACA細菌內毒素的檢查的方法是非常重要的，因為只有將細菌內毒素的檢查方法了解透徹，才能夠根據具體的方法，對細菌內毒素進行有效的控制，否則這種毒素就會危及到人體的安全，對人們的生命產生嚴重的威脅。要想將7-ACA細菌內毒素的研制方法科學的研究出來，就要對7-ACA有著了解。7-ACA就是7-氨基頭孢烷酸，這是一種比較常見的頭孢母核，在7-ACA里有兩個活性的基團，在活性基團上需要連接不同的側鏈，在這樣的情況下，就構成了頭孢類的抗生素，這種頭孢類的抗生素在性質上也有著一定的差異，例如頭孢呋辛、頭孢三嗪等。

頭孢菌素類的抗身素在使用的過程中是極為重要的，在發展速度上也比較驚人，已經被很多的醫學研究者所重視，現在臨床上經常使用的，頭孢菌素有很多中，大約達到了50種以上，在臨床中京杭使用的也達到了 30種以上，因此我們一定要重視7-ACA的研究，尤其是7-ACA細菌內毒素的檢查的方法。在本次試驗中使用的7-ACA就是由頭孢菌素C裂解形成的，首先頭孢菌通過發酵獲得頭孢菌素C。在裂解的過程中，使用的是酶法和化學法來獲得粗品的研究，使用化學反應進行頭孢菌素C鋅鹽的生產，在比較極端的環境下需要進行降溫處理，使用的化學藥品也是有毒有害的化學藥品，經過這樣的環節處理之后，人體使用之后就會帶來很大的危害，需要得到我們的重視。使用酶法進行裂解是不會涉及到重金屬的，在裂解的過程中，獲得的粗品質量也比較好，污染小，裂解設備占地面積也比較小，因此在使用的過程中，一定要引起我們的注意。否則產生較大的環境污染，這樣與國家對藥品行業的要求是違背的。

7-ACA，中文名稱7-氨基頭孢烷，化學名稱為3-乙酰氧甲基-5-硫-7-氨基-8-氧-1-氮雜二環辛-2-烯-2羧酸。是玉米漿通過頭孢菌發酵得到的頭孢菌素C，頭孢菌素C在酰胺鍵處水解得到7-AcA，它是生產頭V，頭孢哌酮等半合抗類產品的重要中間體。7-ACA是頭孢菌素關鍵性中間體，已成為當今國際抗生素市場的主角，按銷售額計，以頭孢菌素和青霉素為主的β-內酰胺類抗生素發展最快，約占世界抗生素市場的 70%。7-ACA是通過頭孢菌素C裂解而成。豆油是在生產7-ACA過程中的一步，通過吸收豆油中的營養有益成分，可以養大細菌，再通過酶法生產出7-ACA中間體。

國內廠家采用化學法生產的主要原因是：國內不具有酶的生產能力，只能依靠進口酶，它的價格較高，使得酶法生產7-ACA成本與化學法相當，而在色澤外觀上略遜于化學法，因此國內采用酶法技術的很少。從目前的國內主要生產廠家來看，化學法對環境污染嚴重以及職工勞動保護問題沒有有效的治理措施，其經濟效益在很大程度上是以犧牲環境和健康為代價獲取的。

試驗結果表明，藥用中間體7-ACA用1%的碳酸鈉調節pH后，稀釋到適宜的濃度進行細菌內毒素檢測對鱟試劑無干擾作用，可檢測限值為 0.1EU/mg及以上，可以保證細菌內毒素被有效檢出。

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R927.2

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1672-5018（2016）10-035-02