阿德福韋酯對慢性乙型肝炎肝硬化患者細胞免疫功能的影響*

王汝剛， 浦春文， 周　偉

(大連市第六人民醫院， 遼寧 大連　116031)

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阿德福韋酯對慢性乙型肝炎肝硬化患者細胞免疫功能的影響*

王汝剛， 浦春文， 周偉

(大連市第六人民醫院， 遼寧 大連116031)

[摘要]目的： 探討阿德福韋酯對慢性乙型肝炎肝硬化患者細胞免疫功能的影響。方法： 104例慢性乙型肝炎肝硬化患者，分為代償期組(n=56)和失代償期組(n=48)，兩組患者在對癥治療同時均給予阿德福韋酯抗病毒治療(10 mg/次，1次/d，24周)，分別于治療前和治療24周時檢測兩組患者血清HBV DNA水平、HBsAg、HBeAg、HBcAb、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、白蛋白(Abl)及T細胞免疫功能相關指標CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平和CD4+CXCR5+濾泡性輔助性T細胞(TFH)、白細胞介素(IL)-2和干擾素(IFN)-γ水平，探討阿德福韋酯對慢性乙型肝炎肝硬化患者細胞免疫功能的影響。結果： 治療前兩組患者的HBV DNA水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽性比例、T細胞免疫功能比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；治療后兩組HBV DNA定量水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽性比例均明顯低于治療前(P<0.05)，治療后代償期組ALT和Abl改善水平顯著高于失代償期組(P<0.05)；兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較前降低(P<0.05)； CD4+CXCR5+TFH、IL-2和IFN-γ水平均較前升高(P<0.05)；但治療后兩組同指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。結論： 阿德福韋酯可以提高代償期和失代償期慢性乙型肝炎肝硬化患者的T淋巴細胞免疫功能，可能與病毒轉陰和肝功能改善有關。

[關鍵詞]阿德福韋酯； 慢性乙型肝炎肝硬化； 病毒轉陰率； 濾泡性輔助性T細胞

核苷酸類似物阿德福韋酯治療慢性乙型病毒性肝炎的療效明確，除可直接干預病毒DNA轉錄外，還可能參與了調節機體免疫功能；同時，阿德福韋酯還可以提高慢性乙型病毒性肝炎患者機體CD4+和CD4+/CD8+水平，降低CD8+水平，對抗病毒和逆轉肝纖維化[1-2]。孫學華等[3]報道阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者后CD4+和CD8+T細胞亞群表達頻率增加。白細胞介素-2(interleukin-2，IL-2)和干擾素-γ(IFN-γ)是T細胞分泌的細胞因子，參與細胞免疫功能的調節[3]。本研究比較阿德福韋酯治療104例慢性乙型肝炎肝硬化患者治療前后血清CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+水平和CD4+CXCR5+濾泡性輔助性T細胞(TFH)、IL-2和IFN-γ水平變化，并分為代償期和失代償期進行比較，探討阿德福韋酯對慢性乙型肝炎肝硬化患者T淋巴細胞免疫功能的影響。

1對象與方法

1.1對象

2013年10月～2014年10月入院治療的104例慢性乙型肝炎肝硬化患者，診斷標準參照2010年中華醫學會肝病學分會感染病學分會聯合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。納入標準：(1)年齡≥18歲，<75歲；(2)符合肝硬化和分期標準；(3)首次進行抗病毒治療。排除非乙型病毒性肝硬化，乙肝合并酒精性或自身免疫性肝病等，或進展為肝癌；合并嚴重心、肝、腎等臟器功能障礙，阿德福韋酯不耐受或耐藥；依從性差、隨訪資料不完善及拒絕納入研究患者。所有患者按照肝臟疾病的分期，分為代償期組和失代償期組。代償期組56例，男性30例，女性26例，年齡37～66歲，平均(49.8±10.3)歲；乙肝病程1月～10年，平均(3.2±0.6)年。失代償期組48例，男性25例，女性23例，年齡36～74歲，平均(50.2±12.2)歲；乙肝病程6月～13年，平均(3.9±1.2)年。兩組患者的性別、年齡和乙肝病程比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。所有患者均給予對癥治療，血紅蛋白(Hb)<60 g/L時，采用輸血治療；嚴重低蛋白血癥采用外源性白蛋白補充，同時給予保肝降酶、注意休息和飲食等。兩組患者同時給予阿德福韋酯(正大天晴醫藥有限公司，10 mg/次， 1次/d，24周)抗病毒治療。

1.2方法

于治療前和治療后24周時分別采取患者外周靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，取上層血清置于-80 ℃冰箱中保存集中送檢。HBV DNA水平檢測采用熒光定量聚合酶鏈反應法，試劑盒系中山大學達安基因股份有限公司產品。乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)及乙肝c抗體(HBcAb)采用ELISA法進行檢測，試劑盒購自廈門英科新創科技有限公司。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)及白蛋白(Abl)采用OLYMPUS全自動生化分析儀進行檢測。CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+水平和CD4+CXCR5+ TFH、IL-2和IFN-γ采用美國BECKMANCOULTER公司EPICS XL型流式細胞分析儀和軟件SYSTEM II檢測。

1.3統計學方法

2結果

2.1HBV DNA、HBsAg、HBeAg及HBcAb檢測

兩組慢性乙型肝炎肝硬化患者血清HBV DNA水平和HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽性比例，治療前比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后兩組明顯低于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)，而治療后兩組同指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。兩組慢性乙型肝炎肝硬化患者治療后ALT水平降低而Abl升高，差異有統計學意義(P<0.05)；代償期組ALT和Abl改善水平顯著高于失代償期組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2CD4+、CD8+和CD4+/ CD8+、CD4+CXCR5+TFH、IL-2和IFN-γ水平

治療前兩組患者T細胞免疫功能差異均無統計學意義(P>0.05)，治療后兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較前降低，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組治療后CD4+CXCR5+TFH、IL-2及IFN-γ水平較治療前升高，差異有統計學意義(P<0.05)；而治療后兩組同指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　兩組患者HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBV DNA、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+、

(1)與同組治療前比較，P<0.05

3討論

慢性乙型肝炎合并肝硬化的發病機制較為復雜，除了病毒本身的致病作用外，機體免疫功能紊亂也發揮重要作用。免疫應答既可清除病毒，亦可導致肝細胞免疫損傷，甚至病毒變異。有研究顯示T淋巴細胞亞群的平衡在機體清除HBV過程中起重要作用[5]。CD4+T淋巴細胞識別MHC Ⅱ類分子所提呈的外源性抗原肽，活化后主要分化為Th細胞。 CD8+T淋巴細胞識別MHCⅠ類分子所提呈的內源性抗原肽，活化后主要分化為CTL細胞。機體感染乙肝病毒后，病毒在宿主細胞內復制，產生病毒蛋白，細胞內的MHCⅠ類分子選擇性地與之結合形成復合物，此復合物被T淋巴細胞特異性抗原識別，激活CD8+T淋巴細胞細胞，導致肝細胞破壞；同時CD4+T淋巴細胞通過其表面的MHC Ⅱ類分子介導B淋巴細胞激活，促進B淋巴細胞產生抗-HBs，從而清除HBV。這是HBV 引起肝細胞損傷的主要原因，也是宿主清除細胞內病毒的主要機制。宿主外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+細胞水平和CD4+/CD8+的比值反映著機體的細胞免疫狀態。慢性乙型肝炎患者外周血T細胞亞群的改變體現了患者細胞免疫的免疫病理學改變[6]。最近研究證明濾泡性輔助性T細胞是輔助B細胞產生抗體的主要T細胞亞群，其定位于淋巴濾泡并與B細胞共定位和相互作用，通過持續表達CXCR5/ICOS/PD-1等膜表面分子和產生IL-21等細胞因子輔助B細胞參與體液免疫反應[7]。阿德福韋酯為嘌吟類衍生物，口服后在體內迅速被酯酶水解為游離阿德福韋，進入門靜脈和全身循環，在細胞激酶的作用下被磷酸化為有活性的代謝產物即阿德福韋二磷酸鹽，它與自然底物脫氧腺苷三磷酸競爭抑制 HBV DNA 多聚酶活性，且整合到病毒DNA 鏈中，終止 DNA 鏈的合成抑制病毒復制。另外阿德福韋可誘導內生性干擾素，增加自然殺傷細胞活力和刺激機體免疫反應，具有較強的抗HBV作用，對失代償期肝硬化患者是一種安全有效的藥物[8-9]。本研究中轉陰率定義為HBsAg、HBeAg、HBcAb均陽性轉為均陰性，是因為HBsAg、HBeAg、HBcAb 均陽性在病毒學轉陰方面可能更有意義[4]。

輔助性T細胞(Th)的主要表面標志物為CD4，在免疫反應中扮演中間角色，可通過增生、擴散等方式激活其他類型T細胞產生直接免疫反應。Th1細胞主要介導細胞免疫反應，可分泌多種細胞因子如IL-2、IFN-γ、TNF-β等，共同調節抗原提成、活化巨噬細胞、移植器官排斥反應和誘導自身免疫性疾病中發揮重要作用。本研究結果顯示兩組的病毒轉陰率比較，差異無統計學意義，代償期組ALT降低水平和Alb升高水平顯著高于失代償期組(P<0.05)。兩組治療后CD4+、CD4+/ CD8+水平均高于治療前，CD8+水平較治療前降低(P<0.05)。兩組治療后CD4+CXCR5+TFH水平、IL-2和IFN-γ水平較前升高(P<0.05)。說明阿德福韋酯可以提高代償期和失代償期慢性乙型肝硬化患者的T淋巴細胞免疫功能，可能與病毒轉陰和肝功能改善有關。

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(2015-12-05收稿，2016-02-23修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 趙毅

關于醫學符號的使用

統計學符號不論用哪種字母，也不論大寫或小寫一律都用斜體。要注意區分拉丁字母和希臘字母。例如均數的符號是字母x2，卡方的符號是希臘字母χ2,自由度的符號是希臘文“υ”，不是拉丁文“V”。樣本的相關系數是英文“r”，不能誤為希臘文“γ”。

化學元素及核素在醫學寫作時一般多采用符號，都是拉丁字母正體大寫。離子態是在右上角用數字加“-”或“+”表示。例如Na+,Ca2+,P3-等等，不采用Ca++,P---,Al+3,O-2表示；核素的核子素(質量數)應寫在元素符號的左上角，例如：131I,32P；表示激發狀態的m寫在右上角，例如:99Tcm,133Inm。在科技論文和專著中不應寫核素的中文名稱，即不能寫成131碘、銦133m、P32、Tc99m。

近幾年分子生物學發展很快，并已滲透到許多學科，大多數分子生物學名詞術語的符號已有統一的確定形式，要對符號的來源及其內涵有深刻的了解，才能在使用時不致發生錯誤，例如：RNA有rRNA(ribosomal RNA)、tRNS(transfer RNA)、mRNA(messenger RNA)3類。r、t、m是表示類型的符號應小寫，RNA應大寫。

《貴陽醫學院學報》編輯部

Influence of Adefovir Dipivoxil on T Cell Immune Function of CHB Liver Cirrhosis

WANG Rugang， PU Chunwen, ZHOU Wei

(DalianSixthPeople'sHospital,Dalian116031,Liaoning,China)

[Abstract]Objective: To investigate the efficacy of adefovir dipivoxil on IL-2 and IFN-γ level change of CHB liver cirrhosis. Methods: A total of 104 CHB patients were divided into 56 cases of compensated cirrhosis group and 48 cases of discompensation group. Both groups received adefovir dipivoxil 10 mg/per day for 24 weeks. Serum HBV DNA level, HBsAg, HBeAg, HBcAb, ALT, Abl , T cell immune function relevant index CD4+, CD8+, CD4+/ CD8+ and CD4+CXCR5+ TFH, IL-2 and IFN-γlevel were tested before and after 24 weeks of treatment; observing HBeAG before and after treatment (HBsAg, HBeAg, HBcAball converted from positive to negative). Results: HBV DNA Quantitative levels after operation and HBsAg, HBeAg, HBcAb presented as positive proportion, which was significantly lower than before treatment(P<0.05); the ALT and Abl level in compensated group was significantly higher than discompensation group(P<0.05); CD4+ and CD4+/ CD8+ value in both groups were both higher and CD8+ value was lower after treatment(P<0.05). CD4+CXCR5+TFH，IL-2 and IFN-γ levels in both groups all increased after treatment(P>0.05). Comparing indexes of both groups, differences were not statistically significant(P>0.05). Conclusion: adefovir dipivoxil can improve T cell immune function in patients in different stages of liver cirrhosis，which may be related to virus clearance and liver function improvement.

[Key words]adefovir dipivoxil; chronic hepatitis B cirrhosis; virus clearance rate; T follicular helper cells

[中圖分類號]R575

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)03-0322-04

*[基金項目]遼寧省科技廳博士啟動基金(20131024)

網絡出版時間：2016-03-17網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160317.1035.030.html