服用百草枯、溴敵隆中毒的檢驗研究

【摘要】百草枯是一種毒性極強的除草劑，而溴敵隆則為毒性較強的殺鼠藥物，在生活中比較常見也比較容易獲得，尤其是我國農村地區，經常有使用這兩類藥物服毒或意外死亡的案例報道。本文介紹了生物檢材中百草枯和溴敵隆的液相萃取，即利用液相色譜串聯質譜，同時配備不同的色譜柱，對百草枯和溴敵隆進行定性分析的方法。

【關鍵詞】毒物檢驗；百草枯；溴敵隆；法醫毒物學

1案情

某年某月某日，有群眾報案稱其親屬某男因涉嫌殺人未遂后服毒自殺解剖后提取死者的心血、胃內容作為檢材。

2毒物分析

2.1百草枯的檢驗

2.1.1檢材前處理

生物檢材采用液一液萃取，各取心血0.2mL、胃內容0.1g，分別加0.8mL、0.9mL水浸泡超聲10 min，后將上述檢材分別用1mL乙腈沉淀蛋白，12000r/min離心5min，取上清液，用0.45μm濾膜過濾后待檢。

2.1.2主要儀器及試劑

儀器：混合線性離子阱質譜儀（ABI4000 Q-TRAP），配高效液相色譜儀（Agilent1200）和Agilent 1200自動進樣器。

試劑：百草枯（購自農業部環境保護科研監測所）；乙腈、甲酸（均為HPLC級）；乙酸銨（分析純）；超純水由Milli-Q（Mill—pore純水系統）制得。

2.1.3儀器操作條件

液相條件：色譜柱Atlant HILIC silica3.01xm3.0x100mm，流動相：乙腈/5mmol/L醋酸銨緩沖液（含0.1%甲酸）=75/25，流速0.5/min：柱溫：30～C；進樣量：51xL。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI）.，正離子掃描（ESI+），多反應監測（MRM）檢測；離子源（IS）： 5500V：碰撞氣（CAD）：4PSI：氣簾氣（CUR）：30Psi：霧化氣（Gsl）：40psi；輔助氣（GS2）：30Psi：離子源溫度（TEM）：500～C；母離子（Q1）：171，子離子（Q3）：77，駐留時間（Dwelltime）：200ms。

2.2溴敵隆的檢驗

2.2.1檢材前處理

采用液一液提取方法：分別取心血lmL、胃內容1克于2個離心管中，分別加入0.5mL pH6.O的磷酸鹽緩沖液，5mL5%乙醇/乙酸乙酯（V/V），0.5mLl%三氯醋酸（W/V）溶液后渦旋混合5min，浸泡超聲10min，12000r/min離心5min，將有機層轉移至另一玻璃試管，殘留物用5mL5%乙醇/乙酸乙酯進行第二次提取，將兩次提取物合并后置于50～C水浴中氮氣流下吹干，殘留物用lmL甲醇溶解，經0.451xm濾膜過濾后待檢。

2.2.2主要儀器及試劑

儀器：混合線性離子阱質譜儀（ABI4000 Q-TRAP），配高效液相色譜儀（Agilent1200）和Agilent 1200自動進樣器。

試劑：溴敵隆（購自農業部環境保護科研監測所）；乙醇、乙腈、甲醇、乙酸乙酯（均為HPLC級）；乙酸銨、三氯醋酸（均為分析純）；超純水由Milli-Q（Millpore純水系統）制得。

2.2.3儀器操作條件

液相條件：色譜柱PhenomenexKinetex c18（100mmX4.60mm，2.6μm），前接Phenomenex c18保護柱（4mmx2.0mm），流動相：A為10 mmol/L醋酸銨緩沖液，B為甲醇，梯度洗脫程序：0～2mm 70%A：2～8min 70%～30%A：8～12min30%～5%A：12～14min 5%A：14～18mm 5%～70%A；18～20min70%A。整個分析過程共20mm；流速：0.5mL/min柱溫：30～C；進樣量：5UL。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），，負離子掃描（ESI-），多反應監測（MRM）檢測；離子源（Is）：一4500V～碰撞氣（cAD）：8psi；氣簾氣（CUR）：45Psi；霧化氣（GSl）：60Psi輔助氣（GS2）：60psi；離子源溫度（TEM）：500～C；母離子（Q1）：526.9，子離子（Q3）：250，駐留時間（Dwelltime）：50ms。

3討論

本文使用液質聯用儀，利用液相色譜的高效分離能力和質譜良好的定性功能，有效解決了殺鼠劑溴敵隆和除草劑百草枯的快速定性。以百草枯為例，利用液質的MRM-IDA—EPI掃描模式，除采集母離子/子離子對外，還在EPI譜圖采集了155、142、128、102等子離子的信息，其確證信息更為豐富。

參考文獻

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