重組人轉化生長因子β1在CHO/dhfr－細胞中的穩定表達和純化

劉春鳳，張　寧，周　婷，王世媛，陳清西*

( 1．廈門大學生命科學學院，福建廈門361005; 2．廈門特寶生物工程股份有限公司，福建廈門361022)

?

重組人轉化生長因子β1在CHO/dhfr－細胞中的穩定表達和純化

劉春鳳1，張寧2，周婷2，王世媛2，陳清西1*

( 1．廈門大學生命科學學院，福建廈門361005; 2．廈門特寶生物工程股份有限公司，福建廈門361022)

摘要:構建了含重組人轉化生長因子β1( rhTGF-β1)基因的真核表達載體，并利用陽離子脂質體介導的方法，將構建的表達載體轉染到二氫葉酸還原酶( DHFR)缺陷型哺乳動物細胞CHO/dhfr(－)中，通過氨甲喋呤( MTX)加壓篩選獲得穩定表達重組人轉化生長因子β1的細胞株．于14 L細胞發酵罐進行擴大培養，通過酶聯免疫吸附實驗( ELISA)檢測得表達量在3 mg/L左右．采用親和層析、反相層析及分子篩凝膠層析的方法分離純化，獲得的rhTGF－β1試制品的純度大于97%，得率在25%以上．通過基質輔助激光解析電離化飛行時間質譜( MALDI－TOF MS)測定rhTGF－β1的分子量為25．470 ku，與理論分子量一致．N端蛋白序列分析儀分析其N端氨基酸序列，與理論的氨基酸序列一致．rhTGF－β1具有抑制水貂肺上皮細胞Mv－1－Lu增殖的活性，測定其比活為3．2×107IU/mg，與商品化的rhTGF－β1標準品相當．本研究為進一步規模化制備rhTGF-β1奠定了基礎．

關鍵詞:重組人轉化生長因子β1;表達;純化

轉化生長因子β( transforming growth factor－β，TGF－β)是一類具有多種生物學活性的細胞因子，參與調節細胞的增殖、分化、發育和凋亡等多種生命活動［1］．TGF－β亞家族目前報道有6種，分別為TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3、TGF－β4、TGF－β5和TGF－β6，它們氨基酸序列之間有70%～80%的同源性［2］．哺乳動物僅有3種，分別為TGF－β1、TGF－β2和TGF－β3，其中TGF－β1在體細胞系中所占比……