日本囊對蝦Na-K-2Cl共同轉運蛋白基因的克隆與組織表達分析

劉洪濤，王　軍，毛　勇，喬　瑩，鐘聲平，蘇永全

(廈門大學海洋與地球學院，福建廈門361102)

?

日本囊對蝦Na-K-2Cl共同轉運蛋白基因的克隆與組織表達分析

劉洪濤，王軍，毛勇，喬瑩，鐘聲平，蘇永全*

(廈門大學海洋與地球學院，福建廈門361102)

摘要:利用反轉錄PCR( RT－PCR)和cDNA末端快速擴增( RACE)等技術在鰓組織中獲得日本囊對蝦( Marsupenaeus japonicus) Na－K－2Cl共同轉運蛋白( NKCC) cDNA全序列，包含14 bp的5'非編碼區( 5'－UTR)、201 bp的3'－UTR和3 183 bp的開放閱讀框( ORF)．該ORF共編碼1 060個氨基酸，預測蛋白分子質量為117．051 ku，理論等電點為6．57，命名為Mj－NKCC．預測Mj－NKCC二級結構由10個跨膜區組成，跨膜區的氨基酸序列和布局均相對保守．同源對比結果顯示，Mj－NKCC的氨基酸序列與夏威夷海蝕洞蝦( Halocaridina rubra)的Na－K－2Cl共同轉運蛋白相似度最高，為77%．系統進化分析表明Mj－NKCC與夏威夷海蝕洞蝦、藍蟹( Callinectes sapidus)等甲殼動物的NKCC聚為一支．實時熒光定量PCR( qRTPCR)分析表明，Mj-NKCC基因在肝胰腺、鰓、胃、腸、心、眼柄、肌肉和血細胞中均有表達，鰓組織中表達量最高;在鹽度驟變時，該基因表達變化顯著，表明其很可能參與了對蝦的滲透壓調節，在對蝦的滲透平衡中發揮重要作用．

關鍵詞:日本囊對蝦; Na－K－2Cl共同轉運蛋白( NKCC) ;基因克隆;組織表達;鹽度驟變

日本囊對蝦( Marsupenaeus japonicus)屬甲殼綱( Crustacea)，十足目( Decapoda)，對蝦科( Penaeidae)，囊對蝦屬( Marsupenaeus)，在我國黃海、東海和南海海域均有分布，是我國重要的經濟養殖蝦類［1］．日本囊對蝦屬海水廣鹽性對蝦，適宜的鹽度范圍是15～34，但對水體鹽度的變化較為敏感．陳堅等［2］研究發現低鹽度對日本囊對蝦生長和存活率的影響較為明顯．李才文等［3］證實鹽度變化能夠影響對蝦的免疫狀……