重組人胸腺肽α1在大腸桿菌中的表達純化與鑒定

尹鳳紅,肖清江,周衛東,陳清西(1.廈門大學生命科學學院,福建廈門36110;.廈門特寶生物工程股份有限公司,福建廈門3610)

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重組人胸腺肽α1在大腸桿菌中的表達純化與鑒定

尹鳳紅1,2,肖清江2,周衛東2,陳清西1*
(1.廈門大學生命科學學院,福建廈門361102;2.廈門特寶生物工程股份有限公司,福建廈門361022)

摘要:采用大腸桿菌作為宿主表達重組人胸腺肽α1(rh Tα1)融合蛋白,純化獲得rh Tα1并對其鑒定.于300 L發酵罐進行中試發酵表達rh Tα1融合蛋白;經異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導,離心發酵液收集菌體,菌體經破碎、離心、親和層析捕獲,獲得融合蛋白;每升發酵液可獲得約170 mg硫氧環蛋白-胸腺肽α1融合蛋白.融合蛋白經腸激酶酶切后,再經親和層析、反相層析、體積排阻層析等純化步驟,獲得高純度rh Tα1;通過本純化工藝獲得的rh Tα1原液經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和高效液相色譜-排阻法(HPLC-SEC)的檢測純度均大于99%;采用玫瑰花環形成率測定rh Tα1活性與市售化學合成標準品一致;質譜分析分子質量為3 066.59 u,與去乙酰化的rh Tα1理論分子質量(3 066 u)一致;N端測序結果與理論值一致.綜上結果,說明本工藝可實現工業化規模生產.

關鍵詞:重組人胸腺肽α1(rh Tα1);表達;純化

胸腺素α1(thymosin-alpha 1,Tα1)作為免疫調節因子,可以啟動T淋巴細胞的成熟,刺激分泌干擾素及各種淋巴細胞介素,以及增強自然殺傷細胞介導的細胞毒性.對Tα1的臨床研究主要集中在治療乙型肝炎及丙型肝炎方面,能夠顯著增強機體免疫力,對肝炎病毒的復制繁殖具有顯著抑……