關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)血中移行成分的比較

李純璞， 張善玉， 金英今

（1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林延吉133000；2.延邊大學(xué)分析測(cè)試中心，吉林延吉133000）

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關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)血中移行成分的比較

李純璞1， 張善玉1， 金英今2*

（1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林延吉133000；2.延邊大學(xué)分析測(cè)試中心，吉林延吉133000）

摘要:目的 比較關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)的血中移行成分。方法 HPLC法比較空白血清、含藥血清和甲醇提取液的色譜峰，確定灌服關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)、蒼術(shù)提取物后大鼠血中移行成分。結(jié)果 以240 nm為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，關(guān)蒼術(shù)和白術(shù)藥材中有3個(gè)相似成分進(jìn)入血液；以340 nm為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，有1個(gè)相似成分。結(jié)論 關(guān)蒼術(shù)的血中移行成分和白術(shù)比較接近，而與蒼術(shù)有較大差異。

關(guān)鍵詞:關(guān)蒼術(shù)；白術(shù)；蒼術(shù)；血中移行成分；HPLC

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.032

KEY W 0RDS: Atractylodes jaPonica；AtractylodismacrocePhalae；Atractylodes Lancea；constituents absorbed into b1ood；HPLC

中藥化學(xué)成分由于理化性質(zhì)各異，造成其吸收部位或速率不同，各成分以原型或代謝物進(jìn)入體內(nèi)的方式也不一致，而且給藥后血清成分并非固定不變，隨時(shí)間可能發(fā)生變化，因此有必要建立血清藥物化學(xué)動(dòng)態(tài)圖譜，用于反映中藥化學(xué)成分群在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其與藥物原型成分之間的相關(guān)性。從某種意義上來(lái)說(shuō)，中藥血清動(dòng)態(tài)圖譜的研究是未來(lái)從中藥中尋找活性物質(zhì)的主要途徑之一［1］。

關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)均為菊科蒼術(shù)屬植物，其中蒼術(shù)和白術(shù)為臨床常用中藥，收載于《中國(guó)藥典》［2］，而關(guān)蒼術(shù)因其揮發(fā)性成分含有量低而在我國(guó)被視作蒼術(shù)和白術(shù)的偽品，但日本和韓國(guó)卻將其作為白術(shù)用于臨床，另外朝鮮族民間也經(jīng)常把關(guān)蒼術(shù)分為塊根和節(jié)狀根，分別作為白術(shù)和蒼術(shù)使用［3-4］。無(wú)論中藥中含有多少種成分，只有進(jìn)入血液者才有可能成為有效成分（外用藥及直接作用于胃腸道的藥物除外）。通過(guò)分析口服給藥后血中移行成分，確定中藥及復(fù)方的體內(nèi)直接作用物質(zhì)，將成為快速、準(zhǔn)確地確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效途徑［5-7］，其常用研究方法為在建立中藥色譜指紋圖譜的基礎(chǔ)上，采用血清藥物化學(xué)方法，通過(guò)對(duì)比藥材各提取部位、給藥（含藥血清）及未給藥供試動(dòng)物血清（空白血清）的色譜指紋圖譜，篩選中藥的活性成分及其作用機(jī)理［8-10］。本實(shí)驗(yàn)擬采用中藥血清藥物化學(xué)的方法，對(duì)關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)等提取物進(jìn)行初步研究，比較其含藥血清中的移行成分峰，探索這3味中藥是否具有相同的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為朝鮮族民族藥材—關(guān)蒼術(shù)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究及其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 藥材 關(guān)蒼術(shù)藥材于2010年采自吉林省汪清縣，經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室呂惠子副教授鑒定為菊科植物關(guān)蒼術(shù)Atractylodes jaPonica Koidz. ex Kitam.的塊根；白術(shù)和蒼術(shù)藥材購(gòu)自延吉藥店，經(jīng)呂惠子副教授分別鑒定為菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocePhala Koidz.和蒼術(shù)Atractylodes Lancea（Thunb.）DC.的干燥根莖。將三者用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，置于陰涼干燥處備用。

1.2 儀器與試劑 LC-10ATVP高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ5200DE數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XYJ80-2電動(dòng)離心機(jī)（金壇市恒豐儀器廠）；高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。乙腈為色譜純；水為去離子水；其他試劑為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年SD大鼠均為雄性，體質(zhì)量（200±10）g，由延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（吉）2011-0007。先適應(yīng)性飼養(yǎng)幾天，每日更換水和飼料，并保證良好的衛(wèi)生環(huán)境。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 灌胃液的制備 精密稱取粉碎后的關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)粉末適量，分別加甲醇回流提取，提取液減壓濃縮，殘?jiān)舆m量蒸餾水溶解，制成混懸液（1.0 g/mL），即得。

2.2 血清供試液的制備 取SD大鼠8只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)給藥組，藥物組給予相應(yīng)的灌胃液，2 mL/只，2次/d；空白組給予同體積去離子水，連續(xù)給藥3 d。于最后一次給藥1 h后，摘除眼球取血，3 000 r/min離心10 min，取適量置于離心管中，按血清-甲醇（1∶4）加入甲醇，搖勻，離心，取上清液，蒸干后少量甲醇溶解，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 色譜條件 BondaPakTMC18分析柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；柱溫25℃；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)240、340 nm（3種藥材的提取液及含藥血清通過(guò)紫外分光光度儀，在200～500 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果分別在240 nm和340 nm處出現(xiàn)最大吸收）。流動(dòng)相為水（A）-乙腈（B），梯度洗脫（240 nm時(shí)，0～8 min，40％～50％B；8～28 min，50％～75％B；28～40 min，75％～90％B；40～60 min，90％～100％B；60～80 min，100％～40％B。340 nm時(shí)，0～10 min，40％～50％B；10～15 min，50％B；15～40 min，50％～65％B；40～50 min，65％～95％B；50～60 min，95％～100％B），將240和340 nm檢測(cè)波長(zhǎng)分別簡(jiǎn)稱為色譜條件Ⅰ和Ⅱ。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 按照色譜條件Ⅰ，分別將藥材、空白血清、含藥血清供試液進(jìn)行HPLC分析，得到相應(yīng)的色譜圖，見(jiàn)圖1。

a.關(guān)蒼術(shù)含藥血清 b.關(guān)蒼術(shù)藥材 c.白術(shù)含藥血清 d.白術(shù)藥材 e.蒼術(shù)含藥血清 f.蒼術(shù)藥材 n.空白血清a.A.jaPonica medicated serum b.A.jaPonica samP1e c.A.macrocePhalae medicated serum d.A.macrocePhalae samP1e e.A.lancea medicated serum f.A.lancea samP1e n.b1ank serum圖1　色譜條件I下的HP L C色譜圖Flg.1 HPLC chromatogram s（I）

與空白血清色譜圖比較，關(guān)蒼術(shù)含藥血清色譜圖中發(fā)現(xiàn)8個(gè)新的移行成分峰.其中，1、3、6、7 號(hào)4個(gè)峰在關(guān)蒼術(shù)藥材的色譜圖中有相對(duì)保留時(shí)間接近的對(duì)應(yīng)峰，即被吸收入血的關(guān)蒼術(shù)原型成分，而2、4、5及8號(hào)4個(gè)峰為新產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物；白術(shù)含藥血清色譜圖中出現(xiàn)3個(gè)移行成分峰，其中4號(hào)峰為白術(shù)原型成分，1、5號(hào)峰為代謝產(chǎn)物；蒼術(shù)含藥血清色譜圖中出現(xiàn)5個(gè)移行成分峰，其中5、6號(hào)峰為蒼術(shù)原型成分，2、3及4號(hào)峰為代謝產(chǎn)物。

比較關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)含藥血清的色譜圖發(fā)現(xiàn)，白術(shù)和關(guān)蒼術(shù)有3對(duì)相對(duì)保留時(shí)間接近的峰，即關(guān)蒼術(shù)的3號(hào)峰和白術(shù)的4號(hào)峰、關(guān)蒼術(shù)的7號(hào)峰和白術(shù)的5號(hào)峰、關(guān)蒼術(shù)的9號(hào)峰和白術(shù)的6號(hào)峰，均是藥材色譜圖中有對(duì)應(yīng)峰的峰。

3.2 按照色譜條件Ⅱ，分別將藥材、空白血清、含藥血清供試液進(jìn)行HPLC分析，得到相應(yīng)的色譜圖，見(jiàn)圖2。

a.關(guān)蒼術(shù)含藥血清 b.關(guān)蒼術(shù)藥材 c.白術(shù)含藥血清 d.白術(shù)藥材 e.蒼術(shù)含藥血清 f.蒼術(shù)藥材 n.空白血清a.A.jaPonica medicated serum b.A.jaPonica samP1e c.A.macrocePhalae medicated serum d.A.macrocePhalae samP1e e.A.lancea medicated serum f.A.lancea samP1e n.b1ank serum圖2　色譜條件Ⅱ下的HP L C色譜圖Flg.1 HPLC chromatogram s（Ⅱ）

與空白血清色譜圖比較，關(guān)蒼術(shù)含藥血清色譜圖中發(fā)現(xiàn)兩個(gè)新的移行成分峰，均在關(guān)蒼術(shù)藥材的色譜圖中有相對(duì)保留時(shí)間接近的對(duì)應(yīng)峰，即被吸收入血的關(guān)蒼術(shù)原型成分；白術(shù)含藥血清色譜圖中出現(xiàn)3個(gè)移行成分峰，其中3號(hào)峰為白術(shù)原型成分，1、2號(hào)峰為代謝產(chǎn)物；蒼術(shù)含藥血清色譜圖中出現(xiàn)5個(gè)移行成分峰，其中4、5號(hào)峰為蒼術(shù)原型成分，1、2及3號(hào)峰為代謝產(chǎn)物。比較關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)含藥血清色譜圖發(fā)現(xiàn)，三者各有相對(duì)保留時(shí)間接近的峰（關(guān)蒼術(shù)1號(hào)、白術(shù)2號(hào)和蒼術(shù)3號(hào)峰），關(guān)蒼術(shù)和白術(shù)含藥血清色譜圖中有1對(duì)相對(duì)保留時(shí)間相近的峰（關(guān)蒼術(shù)的2號(hào)峰和白術(shù)的3號(hào)峰）。

4 討論

眾所周知，中藥的成分復(fù)雜，但只有能夠進(jìn)入血液者才是真正的有效成分，在關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)中究竟有哪些成分進(jìn)入了血液?是不是有相同的成分?這是血清藥物化學(xué)所要解決的問(wèn)題。從3種藥材的提取、血清樣品的收集處理以及液相色譜分析條件的設(shè)定等相關(guān)研究均是在同一條件下進(jìn)行，所得色譜圖中相對(duì)保留時(shí)間接近的峰有可能是相同或相似的化學(xué)成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)240 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，關(guān)蒼術(shù)和白術(shù)藥材中有3個(gè)相似成分進(jìn)入血液；340 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，兩者有1個(gè)相似的成分。但是，蒼術(shù)在240 nm和340 nm波長(zhǎng)下均沒(méi)有相似的成分進(jìn)入血液，提示關(guān)蒼術(shù)和白術(shù)的血中移行成分比較接近，與蒼術(shù)有較大差異。

中藥血清藥物化學(xué)研究的最終目的，是通過(guò)弄清血清中藥物成分的響應(yīng)以及代謝轉(zhuǎn)化成分的分析，試圖找到中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)初步對(duì)關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)3種藥材進(jìn)行了血清藥物化學(xué)研究，將為深入開(kāi)展三者的有效物質(zhì)基礎(chǔ)及其深層次的應(yīng)用藥物研發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。

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［綜 述］

Com parlson of the constltuents absorbed lnto blood ln Atractylodes japonica，Atractylodismacrocephalae and Atractylodes Lancea

LIChun-Pu1， ZHANG Shan-yu1， JIN Ying-jin2*
（1.College of Pharmacy，Yanbian University，Yanji133000，China；2.Center of Forecasting and Analysis，Yanbian University，Yanji133000，China）

ABSTRACT:AIM To comPare the constituents absorbed into the b1ood in Atractylodes jaPonica，Atractylodis macrocePhalae and Atractylodes Lancea.METH0DS HPLC was aPP1ied to comParing the difference in chromatogram Peaks of b1ank serum，medicated serum and methano1 extract.Then the constituents absorbed into b1ood in rats were identified after intragastric administration with Atractylodes jaPonica，AtractylodismacrocePhalae and Atractylodes Lancea extracts.RESULTS There were three simi1ar constituents absorbed into the b1ood in Atractylodes jaPonica and AtractylodismacrocePhalae at240 nm，whi1e therewas one at340 nm.C0NCLUSI0N The constituents absorbed into the b1ood in Atractylodes jaPonica are re1ative1y simi1ar to those in AtractylodismacrocePhalae，but obvious1y different from those in Atractylodes Lancea.

*通信作者:金英今（1965—），女（朝鮮族），高級(jí)工程師，從事化學(xué)制藥研究。Te1:（0433）2732207，E-mai1: jinyingjin650118@ 126.com

作者簡(jiǎn)介:李純璞（1990—），女，碩士，從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mai1: chunPu1iangyuan@163.com

收稿日期:2015-06-13

中圖分類號(hào):R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001-1528（2016）02-0383-03