弓形蟲病血清學檢測方法研究進展

蘇 勇

（遼寧省沈陽市動物疫病預防控制中心，遼寧沈陽 110034）

弓形蟲病血清學檢測方法研究進展

蘇 勇

（遼寧省沈陽市動物疫病預防控制中心，遼寧沈陽 110034）

弓形蟲病是由剛第弓形蟲（toxop1asma gondii）引起的一種人畜共患寄生蟲病。呈世界性分布，各種家畜，包括豬、牛、羊、犬、貓和試驗動物，包括小白鼠、天竺鼠、家兔等，以及人類，都能感染弓形蟲。弓形蟲病可使孕畜流產死胎，急性弓形蟲病可造成家畜的死亡。弓形蟲感染孕婦后可引起流產，胎兒畸形或產出弱智兒。弓形蟲感染成人后，可侵害神經系統、呼吸系統、心臟、淋巴內皮系統等多種器官或系統，并造成損傷，嚴重時會造成死亡。因此弓形蟲病具有重要的公共衛生意義。

弓形蟲病；人畜共患寄；公共衛生意義

由于弓形蟲病病原學檢查比較困難且陽性率不高，所以血清學試驗仍是目前廣泛應用于診斷的重要參考依據，從血清或腦脊液內檢測弓形蟲特異性抗體，是弓形蟲感染和弓形蟲病診斷的重要輔助手段，尤其是特異性IgM陽性，代表早起感染，特別適用于流行病學調查和早期生前診斷。近年來，有不少關于檢測循環抗原（CAg）的報告，表明循環抗原陽性具有病原學診斷價值。

1 抗體檢測方法

1.1 染色試驗（Sabin-Feldman dye test，DT）

是最早使用的，公認的可靠方法，具有良好的特異性、敏感性個重復性。其原理是采用活滋養體在有致活因子的參與下與樣本的特異性抗體作用，使蟲體表膜破壞而不為美蘭著染。鏡檢時60%蟲體不被藍染者為陽性，如測定滴度，則以50%蟲體不著色者為血清最高滴度。蟲體多數被藍染者為陰性。由于需要適宜的含輔助因子的人血清，并要以活弓形蟲為抗原，故其應用受到一定的限制。

1.2 間接血凝試驗（IHA）

間接血凝抗體是機體對弓形蟲可溶性抗原刺激的應答，比染色試驗抗體出現遲。它雖不是最特異的反應，但由于近年來在抗原處理和固定血細胞方法等方面的不斷改進，特異性大大提高。結果易于判斷，敏感性較高，試劑易于商品化，適于大規模流行病學調查時使用，目前已有試劑盒出售。

1.3 間接免疫熒光抗體試驗（IFA）

以整蟲抗原，采用熒光標記的二抗檢測特異抗體。此法可檢測同型及亞型抗體，其中檢測IgM具有早期診斷價值。但因需要熒光顯微鏡，故在基層推廣有困難。此外檢測IgM還有可能由于被檢血清含類風濕因子、抗核抗體等因素產生假陽性。

1.4 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

用于檢測宿主的特異循環抗體或抗原，已有多種改良法廣泛用于早期急性感染和先天性弓形蟲病的診斷。有學者在原有基礎上增加用生物素-親和素系統，其靈敏度可提高數倍。目前臨床上多采用同時檢測IgM、IgG診斷現癥感染。目前已有一些新的改進技術，如金黃色葡萄球菌A蛋白-ELISA法，將金黃色葡萄球菌A蛋白標記酶，替代第二抗體；其他還有Dot-ELISA、ABC-ELISA等。

1.5 免疫酶染色試驗（IEST）

效果與間接免疫熒光抗體試驗相似，可用普通光學顯微鏡觀察，便于基層推廣應用。

1.6 微量間接乳膠凝集試驗（LAT）

法國和日本十分推崇微量間接乳膠凝集試驗。我國楊鐵生等（1991）應用自行制備的微量間接乳膠凝集試驗試劑盒檢測健康人血清64份和貓血清35份。其敏感性、特異性和重復性均與日本榮研試劑盒無顯著差異。

2 抗原檢測方法

2.1 循環抗原（CAg）的檢測方法

是近年來應用較多的技術，循環抗原比特異性抗體出現早，是病原體存在的特征。常用的方法為ELISA，也有改進的斑點-ELISA、黑色素細胞抗體-ELISA等。具有較高的敏感性和特異性，可診斷弓形蟲急性感染。

2.2 抗弓形蟲McAb的建立與應用

采用McAb-微量反向間接血凝試驗（RIHA）檢測弓形蟲循環抗原，制成了用于早期弓形蟲病的診斷試劑盒。

2.3 PCR檢測技術

夏愛娣等（1992）和韋相才等（1994）建立了診斷弓形蟲病的PCR方法，提取外周血白細胞DNA進行擴增，具有較高的敏感性和特異性；石群立等（1992）用建立的PCR檢測80例先天性畸形兒石蠟包埋腦組織中的弓形蟲，擴增出13例陽性結果（43.3%）。

3 展望

近幾年通過大量的試驗研究，弓形蟲病診斷研究方面已取得較大進展，一些研究成果已經或正在對弓形蟲病的防控產生積極影響，但是今后應為檢測提供可靠的診斷抗原或抗體，加快解決試劑的標準化問題，建立綜合的檢測系統來彌補單一檢測系統的不足。

［1］ 張二營，周金颯，李維維，等.弓形蟲病免疫學診斷方法研究進展［J］.科學大眾：科學教育，2014，（7）：155-155.

［2］ 杜夏夏，徐鵬.弓形蟲病免疫學診斷方法的研究進展［J］.現代畜牧獸醫，2015，（2）：55-58.