談奶牛性控凍精技術

馬 瑩

(濟南畜牧技術推廣站,山東濟南 250031)

談奶牛性控凍精技術

馬 瑩

(濟南畜牧技術推廣站,山東濟南 250031)

提高對性控凍精技術實踐效果宣傳力度,通過重點區域、重點小區的示范使用,使廣大養殖戶意識到性控凍精的使用價值,從而慢慢接受并使用性控凍精;政府各部門制定優惠政策,加大對奶牛養殖的扶持力度,調動奶農的養殖積極性;加大對性控凍精技術的研究資金投入,著力降低性控凍精生產的成本。

奶牛;性控凍精;技術使用

目前奶牛的主要繁殖方式是人工授精技術，從成本、效果來看，應用性控精液（X精液）通過人工授精來獲得雌性犢牛是最佳途徑，也是我們要推廣的奶牛性別控制技術。

1 性控精液獲得方法

性控精液的獲得方法主要是流式細胞儀法，牛精液中X精子和Y精子的DNA含量差異大更加容易分離，目前X精子的分離準確度可達90%以上。流式細胞儀分離法其主要流程包括采集精液——精液品質檢測——合格者染色——流式細胞儀分離——性控精液冷凍——解凍。在精液分離冷凍處理過程中，精細胞可能受到許多因素的干擾，如：采集到處理的間隔時間、高度稀釋、核染色、機械壓力（通過檢索儀時、激光照射、離心、冷凍等）。有研究表明，采集到處理的間隔時間越長，分離處理的效果越差，間隔時間一般不應超過24h，造成分離效果下降的原因，可能是在間隔時間內，環境因素會造成線粒體產生的活性氧（ROS）增加，較高的ROS水平將會使精子線粒體發生膨脹，誘導線粒體膜通透性發生改變，釋放細胞色素C及其他凋亡相關因子損傷精子，損傷的精子又進一步增加ROS的生成，最終導致精液品質下降。另外，在精液冷凍解——凍過程中會造成部分精子的損傷和死亡，從而，產生更多對精細胞有害的ROS，精細胞的氧化損傷程度與精子冷凍效果有密切關系。為此，研究者一直以來，致力于研究精液冷凍保存的方法，探索選擇合適的染色液、稀釋液、鞘液、收集液、保存液、抗氧劑種類以及合適的冷凍保存方式，來提高精液冷凍保存的效果。稀釋液的種類和配方對精液的冷凍效果非常重要，組成稀釋液的主要成分包含糖類、鹽類、蛋白類及一些抗凍保護劑。常用的糖類有葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖等，稀釋液的糖類物質不僅為精細胞提供能量，還具有一定的防凍作用，甘油是一種常用的抗凍保護劑，因為甘油濃度對精子活力和頂體完整率有一定影響，對精細胞有一定的毒害作用，因此在運用中應注意控制其濃度。有研究發現，卵黃配合抗凍劑甘油對精液的冷凍保存也具有重要的作用。一般，卵黃的適宜添加量在15～20%，再進行充分攪拌混勻。添加抗氧化劑主要是抑制精細胞內的自由基的生成，預防不飽和酸發生過氧化，從而對精細胞膜起到保護作用。添加的抗氧化劑種類主要有維生素和一些酶類，維生素C和維生素E在具有重要的抗氧化作用，稀釋液中添加維生素E能夠增強牛精子抗氧化酶活性，可以使精子冷凍—解凍后的質量得到提高，其添加的適宜劑量為1.5mg/ml。在冷凍稀釋液中添加維生素C對荷斯坦種公牛X精子的影響發現，隨著解凍時間的延長，維生素C能夠減緩精子的死亡，而解凍時間短則效果不明顯，其適宜添加量為4～6mg/ml，并且發現荷斯坦公牛X精子在解凍后，其精子活率、質膜完整率及頂體完整率都有顯著提高。對奶牛性控凍精生產工藝進行改進發現，改進后的精子活率、頂體完整率、母牛受胎率、犢牛性別控制準確率以及精液中抗氧化物酶活性都有顯著提高，在大幅度降低成本的同時加快了分離速度，并且提高了每支細管中的有效精子含量。值得注意的是，在冷凍處理前可以對精子進行優選，將死精畸形精進行剔除，可以有效降低冷凍處理后的死精數，使得ROS產生減少，從而提高精液品質。

2 輸精技術

性控凍精有效精子數遠低于常規凍精，價格高于常規凍精，因此如何提高受胎率，節省成本就顯得非常關鍵了。在運用性控凍精輸精時，不僅要嚴格掌握好輸精時間，而且要有過硬的輸精技術，才能達到理想的受胎率。有很多資料表明：性控凍精輸精部位不同，受胎率也不同，而且存在明顯差異。子宮角深部輸精比子宮體輸精受胎率高出很多，效果也更好。但也對人工授精員提出了更高的標準、更嚴的要求。在輸精時要求做到：慢插、輕拉、緩出，輸精完畢，套管口不應有血跡，具體如下：（1）輸精前用紙巾將陰戶擦干凈，嚴禁用消毒水清洗陰戶；（2）進槍時，以35°～40°角向上插入5～10cm，避開尿道口后，再改為略向前下方進入陰道；（3）從直腸把握子宮頸；（4）內外兩手協調操作；（5）不應以外面手強硬操作；（6）輕柔地使輸精槍通過子宮頸，滑向子宮體內至子宮體前沿，達卵泡側子宮角深部大彎處；（7）輸精槍到達輸精部位后緩慢注入精液；（8）輸精完畢，緩慢退出輸精槍，按摩子宮直至外陰有強烈收縮最佳；（9）如需促排可在輸精后肌注LRH-A325～50μg。

3 奶牛性控凍精應用的體會

對專業技術工作，態度一定嚴謹、認真負責，業務嫻熟。充分掌握實施對象的全面情況，如種精液的保管，種精液的解凍時間的問題，精子活力是否達到3.5以上，有效精子數應不少于1000萬個。還有輸精時間和次數的考慮，一般發情開始后或排卵前12h左右適宜輸精，發情期內輸精1～2次，相隔8～12h為佳。做好工作前牛只及操作人員，器具的衛生檢查和衛生消毒處理，備品的擺放，技術工作無小事，無死角，為工作人員及牛只創造優質的環境，防止應激情況的出現。臨床來看，母牛的受精效果是，子宮正常的與患病的牛只的情期受孕率比為62%和46%，差異非常明顯。力爭達到衛生檢查工作、并做好患牛治診斷，主要是確保母牛受孕成功。

[1] 趙永靜.提高種公牛精液品質的幾項措施[J].養殖技術顧問，2014，（10）：54-56.