組織切片技術在獸醫診斷中的應用和常見問題的分析

王蘭會　（山東省臨沂市河東區畜牧獸醫局　276034）

組織切片技術在獸醫診斷中的應用和常見問題的分析

王蘭會（山東省臨沂市河東區畜牧獸醫局276034）

利用組織切片技術進行病理診斷是獸醫學中最具權威性的診斷方法之一。所謂組織切片，即取動物某一實體器官上的組織塊用石蠟包埋，然后進行切片及染色的制片過程。在整個制片過程中，包括有取材與固定，脫水與透明，浸蠟與包埋，切片與粘片，染色與封固五大步驟。制作時，對每一步都必須認真對待，否則將達不到預期效果，甚至導致制片工作的徹底失敗。病理診斷的準確性，一方面取決于獸醫師的技術水平，另一方面取決于組織病理片處理和染色效果。然而，在現實中，組織切片技術往往得不到應有的重視，在目前臨床獸醫工作中普遍地存在著一些問題，由于標本固定時間不足，組織脫水不徹底，某些環境因素造成試劑濃度改變等，都直接影響到制片質量，給臨床病理和流行病學診斷帶來一定的困難。筆者在多年的獸醫工作實踐中體會到∶組織切片技術必須把好以下幾點：

1　重視取材固定操作

取材要盡可能新鮮，為了防止器官組織的壞死，速度要很快。取材一般采用鋒利的刀片或剪刀，為了避免組織器官的破裂變形，不可以采用鑷子壓迫組織。所選取組織塊的厚薄、大小都要適度，如果組織塊過厚或過大，則固定液不易滲透，固定效果則比較差而組織塊過薄或過小，則在固定脫水時，容易發生扭曲變形等狀況。取材還應該有代表性，能夠反映出組織的基本結構此外，還要采集健康部位及病變部位交叉部分的組織，這樣才能夠通過兩者的對照，從而清晰的看到各種病理變化情況。通常情況下，配置好的固定液最好要及時使用，配好后應貯存于陰涼處，避光保存，以免發生化學變化而失去其固定作用。固定要及時，這樣才能保證細胞與正常生存狀態時相似固定液要充分，一般情況下約為材料塊的倍左右，對于水分含量較多的材料，要更換一次新液，避免腐敗的發生材料固定好，應該保存密封容器內，并且在容器外貼上標簽，及時注明材料來源、固定液以及日期等主要信息。材料固定之后，除了乙醇之外，其他固定液必須沖洗干凈，否則殘留在組織材料內的固定液可能會產生結晶或沉淀，而不利于染色的完成。

2　包埋要認真，切片要完整

病理組織切片多采用浸蠟包埋的方法，透蠟溫度應保持恒定。包埋操作要迅速，盡量在最短的時間內完成石蠟的透人過程，避免引起組織變脆、收縮或變硬等。通常情況下，包埋操作可以在恒溫箱內完成，為了避免由于溫度的變化導致組織材料與石蠟的分離，組織材料切面應該朝下放置，并采用同溫的鑷子輕輕撥動材料，使其平整，待石蠟凝固完全時方可取出備用。切片時，一定要保證所采取的切片刀鋒利，否則可能會造成切片斷裂和不完整切片時，注意刀片的放置的傾角要適當，傾角過小容易引起皺起，過大可能會使切片上卷一般選擇口川厚度的切片，如果切片過厚可能會導致雙層細胞現象，不利于觀察和病理診斷。在貼片操作時，要先采用小鑷子夾取已經割開的石蠟帶，置于恒溫水浴鍋水面之上展片之后，將載玻片做好標記，置于恒溫烘箱內生右，防止染片過程中發生脫片。

3　脫蠟石蠟切片

脫蠟前切片要經烘烤，這種使組織和玻片粘貼牢固。組織切片脫蠟應徹底，脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間，所有的時間都是指新的二甲苯在室溫25℃以下時，如果二甲苯是用過一段時間，切片又比較厚，室溫低應增加脫蠟時間，脫蠟不凈是影響染色不良的重要原因之一。

4　染色石蠟切片

經水洗后放入蘇木素染色液中，一般情況下新配的蘇木素染液中只需染1～3min左右，應根據染片的多少，逐步把染色時間延長。蘇木素染色后，不易在分化液中停留時間過長，切片分化應在鏡下觀察，分化過度，應水洗后重新在蘇木素染液中染色，在水洗分化和使切片在自來水或稀的氨水中充分變藍（藍化）。新配的伊紅染色塊，切片染色不易過長，應根據染切片的多少逐步延長染色時間，切片使伊紅染后，分化時間要短。

5　脫水切片染色

通過各級酒精脫水，首先從低濃度到高濃度。低濃度酒精對伊紅有分化作用，切片經過低濃度時要短，向高濃度逐漸延長脫水時間，脫水不徹底，使切片發霧，在顯微鏡下組織結構模糊不清。

6　透明與封片

石蠟組織切片染色經過脫水后必須經二甲苯處理，使切片透明，才能用樹膠封片。應引起注意的是，二甲苯純度不純使切片透明不夠，會影響切片質量（工作中曾發現新進貨的二甲苯試劑中散發出濃厚的汽油味，嚴重影響切片質量）。

總之，組織切片技術在基礎獸醫學研究和臨床獸醫應用中都是不可缺少的。通過大量的理論研究及工作實踐，筆者認為在病理組織切片染色操作過程中，每一個步驟都應該認真對待科學處理，否則將會對制片的質量造成一定的影響。如取材大小要合適，標本應及時固定，脫水應徹底，包埋要放置平整，切片要完整。一個比較完美的切片從表面觀察應該平整、無破裂、沒有皺褶，厚薄適中、分化也比較好蘇木素一伊紅染色的對比度好標簽清晰明了。要想提高切片的質量水平，除了規范化的操作之外，還要求操作人員高度的責任心，在實際工作中總結經驗，認真分析影響切片質量的每一個小因素，才能制作出質量高、比較完美的病理組織切片，從而為臨床獸醫診斷和基礎獸醫研究提供依據

S854.4+3文獻標識碼：B

1007-1733（2016）08-0080-02

2016-04-06）