非洲豬瘟實驗室診斷方法研究進展

蘇嬌 呂春 聶翠鳳/內蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗疫控中心

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非洲豬瘟實驗室診斷方法研究進展

蘇嬌 呂春 聶翠鳳/內蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗疫控中心

非洲豬瘟是各主要養豬國家最擔心發生的豬疫病之一，因為它可以引起免疫抑制，容易造成很高的死亡率，可達100%，目前應對該病尚無有效的治療方法或疫苗。據報道，與我國相鄰的俄羅斯等國家不斷有該疫情的暴發，該疫情已影響到俄羅斯國土面積的三分之一以上，這給我國動物疫病防控工作帶來了很大的威脅。由此可見，有效的實驗室診斷方法在非洲豬瘟防控中顯得尤為重要。本文就非洲豬瘟的實驗室診斷方法研究進展進行了綜述。

一、非洲豬瘟抗體檢測——酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗應用于血清抗體的檢測，具有操作方便，特異性較好，靈敏度高，適用于大批量樣品的檢測。國外Perez Filgueira DM等人采取了不同地區的豬血清樣品進行試驗，該試驗表明間接酶聯免疫吸附試驗敏感性高，能夠檢測到非洲豬瘟病毒早期感染的樣品，可以用于早期的特異性抗體檢測。Vidal MI等人建立了固相酶聯免疫吸附試驗，其檢測血清樣品的敏感性達0.05 mg/ml。Hutchings GH等人建立了間接夾心酶聯免疫吸附

試驗，試驗表明其敏感性高于單抗酶聯免疫吸附試驗。我們國內也有人以VP73純化蛋白為包被抗原，建立了間接酶聯免疫吸附試驗來檢測非洲豬瘟病毒血清抗體，與商品化的阻斷酶聯免疫吸附試驗相比，其具有較好的敏感性和特異性。目前主要是間接酶聯免疫吸附試驗和競爭或阻斷酶聯免疫吸附試驗來檢測非洲豬瘟病毒血清抗體，西班牙某公司已經研制出阻斷酶聯免疫吸附試驗試劑盒，并且已經商品化，也是世界動物衛生組織指定的參考試劑盒，該試劑盒的敏感性和特異性均較好，已被很多國家使用。

二、非洲豬瘟病原學檢測

（一）PCR方法

PCR已經廣泛的應用于疾病診斷和科學研究中，其具有簡單快速、靈敏度高和特異性強的優點。PCR技術無需病毒分離培養，可以直接檢測到組織或體液中的病毒，也可以同時檢測同一病原不同株或不同病原的檢測，為疫病檢測提供了有效的技術支撐。

國外Agǜero M等人設計了p72蛋白編碼區的引物，建立了檢測非洲豬瘟的PCR診斷方法，該試驗方法可用于非洲豬瘟的快速診斷，也可用于監控非洲豬瘟病毒的發生，以便及時采取有效的應急措施，同時因為PCR診斷方法快速、有效，被世界動物衛生組織列為非洲豬瘟病毒的參照診斷方法。Basto AP等人設計了兩對引物，建立了檢測非洲豬瘟的巢式PCR方法，該診斷方法與病毒分離和常規PCR相比，此方法更加敏感，可用于非洲豬瘟病毒的流行地區。實時熒光定量PCR克服了傳統PCR擴增產物后處理和易污染的缺點，它是利用熒光信號，對整個擴增過程進行實時監測的技術。King DP等人以非洲豬瘟病毒p72為目的基因，設計了相應的引物和探針序列，建立了實時熒光定量PCR檢測非洲豬瘟的診斷方法，該方法更加簡便、快速和靈敏。也有相關人士表示，使用實時熒光定量PCR檢測感染豬，耗時不足2 h。國內的陳靜靜等人建立了雙重熒光定量PCR，可同時檢測古典豬瘟病毒和非洲豬瘟病毒，只需一步即可完成，可作為鑒別兩種病毒的診斷方法。

（二）環介導等溫擴增技術

環介導等溫擴增技術操作簡便，反應時間短，成本低廉，檢測成本遠低于熒光定量PCR，無需特殊儀器設備，整個實驗只需水浴鍋或金屬恒溫儀，適用于基層檢疫部門，具有更高的實用推廣價值。James HE等人使用環介導等溫擴增法檢測非洲豬瘟病毒，結果表明該方法與實時熒光定量PCR檢測組織和血液樣品的結果一致。楊吉飛等人建立了環介導恒溫擴增快速檢測非洲豬瘟病毒，試驗結果表明所建立的診斷方法可有效地用于非洲豬瘟的快速診斷和防控。

三、小結

目前，實驗室診斷是監測和控制非洲豬瘟暴發行之有效的辦法，因為當前尚無有效的藥物治療或疫苗進行防控。酶聯免疫吸附試驗適用于檢測感染豬的低毒力或中等毒力的非洲豬瘟病毒抗體，可用作大規模血清樣品的篩選，同時也適用于根除計劃。PCR診斷技術需具備PCR儀或實時熒光定量PCR儀，可用于非洲豬瘟的疫情監測情況。而環介導等溫擴增技術檢測非洲豬瘟有待于進一步完善，為臨床快速診斷提供一定的技術支撐。

參考文獻（略）